屈珅玥,魏小東,賽 曼,蘭小中,陳 敏*

(1.西南大學(xué)藥學(xué)院,重慶 400715;2.西藏農(nóng)牧學(xué)院-西南大學(xué)藥用植物聯(lián)合研發(fā)中心,西藏 林芝 860000)

大花紅景天Rhodiola crenulata (HK.f.et Thoms.) H.Ohba 是景天科紅景天屬植物,主要分布在四川、西藏等地,是2020 年版《中國藥典》一部收錄的紅景天正品基源植物[1]。大花紅景天的主要化學(xué)成分類型包括黃酮類、苯酚類、氰苷類、萜類等[2]。紅景天具有抗高山缺氧[3]、抗疲勞[4]、保肝[5]、降血糖[6]等藥理作用。長期服用紅景天未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng),廣泛用于食品配方[7],在2002 年我國衛(wèi)生部頒布的“關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知(衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]51) ” 中規(guī)定為 “可用于保健食品的物品” 之一[8]。本研究采用柱層析等手段對大花紅景天進(jìn)行化學(xué)成分分析,從中分離得到17 個化合物,其中化合物13～15 為首次從紅景天屬中分離得到,化合物17 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

HPLC 液相色譜儀(250 mm×10 mm,5 μm,日本島津公司)；RE-2000B 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(中國上海亞榮生化儀器廠)；Avance-400、500、600 型核磁共振光譜儀 (德國Bruker 公司)；Sephadex LH-20 凝膠(美國Ge 公司)；TLC 60 F254(德國默克公司)；制備TLC 板和柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)。色譜級甲醇、乙腈(美國Tedia 公司)；分析純乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、冰醋酸及0.5% 硫酸-香草醛等顯色劑 (成都科龍化工試劑廠)；氘代試劑(CD3OD、DMSO) (美國Sigma 公司)。

大花紅景天于2016 年9 月從西藏林芝地區(qū)市場購買,經(jīng)西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院蘭小中教授鑒定為景天科紅景天屬植物大花紅景天Rhodiola crenulata(HK.f.et Thoms.) H.Ohba 的干燥根莖,憑證標(biāo)本(2016-CM-09) 保存于西南大學(xué)藥學(xué)院藥物分析教研室。

2 提取與分離

將干燥的大花紅景天根莖(10.5 kg),粉碎,用95%乙醇滲漉法進(jìn)行提取；減壓濃縮后得到浸膏4.75 kg。將浸膏用適量的水分散制成混懸液,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。萃取液減壓回收后,得相應(yīng)部位萃取物分別為36.9、559、655 g。

取乙酸乙酯部位559 g,進(jìn)行正相硅膠柱層析。經(jīng)石油醚-乙酸乙酯(1∶0～0∶1) 梯度洗脫,得到9 個組分(Rh.A～Rh.I)。Rh.G 組分經(jīng)過正相硅膠分離,以二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1) 梯度洗脫,得到11 個亞組分(G1～G11)。G7 經(jīng)過正相硅膠柱層析二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1) 得到9個亞組分(G7-1～G7-9),G7-7 經(jīng)過凝膠柱二氯甲烷-甲醇(1∶3) 得到化合物1 (2.8 g)、2 (2.2 mg)。G6 經(jīng)過凝膠柱二氯甲烷-甲醇(1∶3) 得到化合物3 (5.2 mg)；G7-8 洗脫流分中有無色柱狀結(jié)晶析出,重結(jié)晶得到化合物4 (1.3 g)；G7-6 經(jīng)過半制備HPLC 甲醇-水(45∶55) 得到化合物5；Rh.C 組分經(jīng)過凝膠柱二氯甲烷-甲醇(1∶3) 得到4 個亞組分(C1-4)。C2 經(jīng)過半制備HPLC 甲醇-水(70∶30) 得到化合物13。Rh-H 組分經(jīng)過半制備HPLC 甲醇-水(50∶50) 得到化合物15；Rh-F 組分經(jīng)過正相硅膠,以二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1) 梯度洗脫,得到化合物10 (2.9 mg)、11 (6.2 mg)；Rh.D 組分經(jīng)過凝膠柱二氯甲烷-甲醇(1∶3) 得到化合物9 (1.6 mg)；Rh.H 組分經(jīng)過反相中壓制備柱甲醇-水(20∶80～60∶40),得到化合物17 (2.2 mg)。

取正丁醇萃取物655 g,濕法上樣后進(jìn)行大孔樹脂柱層析。水-乙醇(1∶0～0∶1) 梯度洗脫,得到7 個組分(Cr.A～Cr.G)。Cr.E 組分經(jīng)過正相硅膠柱層析,以二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1)梯度洗脫,得到4 個亞組分(E1～E4)。E3 經(jīng)過正相硅膠柱層析二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1) 獲得化合物6 (10 mg)、8 (1.3 mg)、14 (1.1 mg)、16 (6.1 mg)；E2 經(jīng)過凝膠柱二氯甲烷-甲醇(1∶3) 得到化合物12 (3.6 mg)；E1 經(jīng)過制備TLC 二氯甲烷-甲醇(85∶15) 得化合物7 (8.8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色針晶,分子式C11H20O6。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:5.97 (1H,dd,J=17.7,10.8 Hz,Ha-2),5.17 (1H,dd,J=17.6,1.40 Hz,Hb-1),5.04 (1H,dd,J=10.9,1.4 Hz,Hc-1),4.12 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.61(1H,dd,J=11.7,2.0 Hz,H-6′),3.39 (1H,dd,J=11.6,5.6 Hz,H-6′),3.10 (1H,t,J=8.5 Hz,H-5′),3.02 (1H,t,J=8.8 Hz,H-4′),2.97 (1H,m,H-3′),2.90 (1H,dd,J=8.8,7.8 Hz,H-2′),1.28 (3H,s,H-5),1.24 (3H,s,H-4)；13C-NMR(DMSO,101 MHz) δ:144.6 (C-2),113.2 (C-1),98.1 (C-1′),76.7 (C-5′),76.6 (C-3′),76.6 (C-3′),73.5 (C-2′),70.2 (C-4′),61.2 (C-6′),27.6 (C-5),26.0 (C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]對照基本一致,故鑒定為大花紅天素。

化合物2:無色針狀結(jié)晶,分子式C8H10O2。1H-NMR (DMSO,400 MHz) δ:6.98 (2H,d,J=8.42 Hz,H-4,8),6.65 (2H,d,J=8.4 Hz,H-5,7),3.52 (2H,t,J=7.3 Hz,H-1),2.59 (2H,t,J=7.3 Hz,H-2)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:155.9 (C-6),130.1 (C-4,8),129.9 (C-3),115.4 (C-5,7),63.1 (C-1),38.7 (C-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]對照基本一致,故鑒定為酪醇。

化合物3:白色粉末,分子式C9H12O6N2。1HNMR (CD3OD,400 MHz) δ:8.00 (1H,d,J=8.1 Hz,H-6),5.89 (1H,d,J=4.5 Hz,H-1′),5.68(1H,d,J=8.1 Hz,H-5),4.15 (2H,m,H-2′,H-3′),4.00 (1H,dt,J=4.5,2.9 Hz,H-4′),3.84(1H,dd,J=12.2,2.8 Hz,H-5′),3.73 (1H,dd,J=12.2,3.1 Hz,H-5′a)；13C-NMR (CD3OD,101 MHz) δ:166.2 (C-4),152.5 (C-2),142.7 (C-6),102.6 (C-5),90.7 (C-1′),86.4 (C-4′),71.3(C-2′),75.7 (C-3′),62.3 (C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]對照基本一致,故鑒定為尿苷。

化合物4:無色柱狀結(jié)晶,分子式C14H20O7。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:7.03 (2H,d,J=8.5 Hz,H-2,6),6.66 (2H,d,J=8.4 Hz,H-3,5),4.16 (1H,dd,J=7.8,1.1 Hz,H-1′),3.87 (1H,m,H-8),3.65 (1H,ddd,J=11.8,6.1,1.8 Hz,H-6′),3.56 (1H,m,H-8),3.43 (1H,ddd,J=11.8,5.6,1.5 Hz,H-6′),3.14 (1H,m,H-5′),3.06 (2H,m,H-2′,4′),2.95 (1H,m,H-2′),2.73 (2H,m,H-7)；13C-NMR (DMSO,101 MHz)δ:155.6 (C-4),129.7 (C-2,6),128.6 (C-1),115.0 (C-3,5),102.8 (C-1′),76.9 (C-5′),76.8(C-3′),73.4 (C-2′),70.1 (C-8),69.9 (C-4′),61.1 (C-6′),34.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對照基本一致,故鑒定為紅景天苷。

化合物5:黃色粉末,分子式C15H10O6。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:8.04 (2H,d,J=8.9 Hz,H-2′,6′),6.92 (2H,d,J=8.9 Hz,H-3′,5′),6.44 (1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.19 (1H,d,J=2.1 Hz,H-6)；13C-NMR (DMSO,101 MHz)δ:175.9 (C-4),163.9 (C-7),160.7 (C-9),159.2 (C-4′),156.2 (C-5),146.8 (C-2),135.7(C-3),129.5 (C-2′,6′),121.7 (C-1′),115.4(C-3′,5′),103.0 (C-10),98.2 (C-6),93.5 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]對照基本一致,故鑒定為山柰酚。

化合物6:棕色粉末,分子式C9H8O4。1HNMR (CD3OD,400 MHz) δ:7.50 (1H,d,J=15.9 Hz,H-7),7.01 (1H,d,J=2.1 Hz,H-2),6.91(1H,dd,J=8.2 Hz,2.11),6.75 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.19 (1H,d,J=15.9 Hz,H-8)；13CNMR (CD3OD,101 MHz) δ:171.1 (C-9),149.4(C-4),147.0 (C-7),146.8 (C-3),127.8 (C-1),122.8 (C-6),116.5 (C-5),115.6 (C-2),115.1 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14-15]對照基本一致,故鑒定為咖啡酸。

化合物7:白色固體,分子式C7H6O3。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:7.78 (2H,m,H-3,5),6.81 (2H,m,H-2,6)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:167.3 (C-7),161.7 (C-4),131.7 (C-3,5),121.4 (C-2,6),115.2 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16-17]對照基本一致,故鑒定為對羥基苯甲酸。

化合物8:白色粉末,分子式C21H36O10。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:5.28 (1H,t,J=6.8 Hz,H-2),5.08 (1H,m,J=6.9 Hz,H-6),4.81(1H,d,J=4.0 Hz,ara-H1),4.12 (1H,d,J=7.8 Hz,glc-H1),4.05 (1H,dd,J=12.2 Hz,7.40,H-1a),3.92 (1H,dd,J=11.2,6.1 Hz,H-1b),2.06 (2H,m,J=6.2 Hz,H-5),1.99 (2H,m,H-4),1.64 (3H,s,H-10),1.61 (3H,s,H-9),1.57 (3H,s,H-8)；13C-NMR (DMSO,101 MHz)δ:139.6 (C-3),131.4 (C-7),124.4 (C-6),121.2 (C-2),103.8 (ara-C1),102.0 (glc-C1),77.1 (glc-C3),76.1 (glc-C5),73.8 (glc-C2),73.0 (ara-C3),71.0 (ara-C2),70.7 (glc-C4),68.5 (glc-C6),67.7 (ara-C4),65.2 (ara-C5),64.9 (C-1),39.5 (C-4),26.4 (C-5),26.0 (C-9),18.1 (C-8),16.6 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]對照基本一致,故鑒定為香葉基1-O-α-L-阿拉伯糖基(1→6) -β-D-葡萄糖。

化合物9:無色針狀結(jié)晶,分子式C9H8O3。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:7.48 (1H,d,J=2.0 Hz,H-7),7.47 (2H,d,J=8.6 Hz,H-3,5),6.75 (2H,d,J=8.6 Hz,H-2,6),6.25 (1H,d,J=15.9 Hz,H-8)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:168.0 (C-9),159.6 (C-4),144.1 (C-7),131.5(C-6),130.1 (C-2),125.3 (C-1),115.7 (C-5),115.5 (C-3),115.1 (C-8)。以上數(shù) 據(jù)與文 獻(xiàn)[19]對照基本一致,故鑒定為對香豆酸。

化合物10:黃色針狀結(jié)晶,分子式C21H10O10。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:12.44 (1H,s,5-OH),10.20 (1H,s,4′-OH),9.52 (1H,s,3-OH),8.05(2H,d,J=8.9 Hz,H-2′,6′),6.90 (2H,d,J=9.0 Hz,H-3′,5′),6.79 (1H,d,J=2.1 Hz,H-8),6.38 (1H,d,J=2.2 Hz,H-6),5.51 (1H,d,J=1.87 Hz,Rha-H-1),1.09 (3H,d,J=6.12 Hz,Rha-H-6)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:176.1(C-4),161.4 (C-7),160.4 (C-5),159.4 (C-4′),155.7 (C-9),147.5 (C-2),136.0 (C-3),129.7(C-2′,6′),121.5 (C-1′),115.5 (C-3′,5′),104.7 (C-10),98.8 (C-6),98.4 (Rha-1),94.4(C-8),71.6 (Rha-4),70.3 (Rha-3),70.1 (Rha-2),69.9 (Rha-5),17.9 (Rha-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]對照基本一致,故鑒定為山柰酚-7-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物11:白色無定型粉末,分子式C35H60O4。1H-NMR (DMSO,400 MHz) δ:5.32 (1H,m,H-6),4.22 (1H,d,J=7.8 Hz,H-1′),3.64～2.90(H-2′,3′,4′,5′,6′),0.96 (3H,s,H-19),0.90(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.85～0.77 (9H,H-26,27,29),0.65 (s,3H)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:140.4 (C-5),121.2 (C-6),100.8 (C-1′),76.9 (C-3),76.8 (C-3′),76.7 (C-5′),73.5(C-2′),70.1 (C-4′),61.1 (C-6′),56.2 (C-14),55.4 (C-17),49.6 (C-9),45.1 (C-24),41.9 (C-13),39.2 (C-12),38.3 (C-4),36.8 (C-1),36.2(C-10),35.5 (C-20),33.4 (C-22),31.4 (C-7),31.4 (C-8),29.3 (C-2),28.7 (C-25),27.8 (C-16),25.5 (C-23),23.9 (C-15),22.6 (C-28),20.6 (C-11),19.7 (C-27),19.1 (C-19),18.9(C-26),18.6 (C-21),11.8 (C-29),11.7 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]對照基本一致,故鑒定為胡蘿卜苷。

化合物 12:無色針狀結(jié)晶,分子式C7H6O5。1H-NMR (DMSO,400 MHz) δ:6.91 (2H,s,H-2,6)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:167.5(C-7),145.4 (C-3,5),138.0 (C-4),120.5 (C-1),108.8 (C-2,6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]對照基本一致,故鑒定為沒食子酸。

化合物13:黃色油狀物,分子式C7H8O。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:7.82 (2H,d,J=8.7 Hz,H-2,6),6.84 (2H,d,J=8.7 Hz,H-3,5),2.47 (3H,s,H-1)；13C-NMR (DMSO,101 MHz)δ:155.1 (C-4),129.8 (C-2,6),127.2 (C-1),115.1 (C-3,5),20.5 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]對照基本一致,故鑒定為對甲酚。

化合物14:白色粉末,分子式C20H22O8。1HNMR (CD3OD,400 MHz) δ:7.02 (1H,d,J=1.8 Hz,H-2,2′),6.82 (1H,dd,J=8.2,1.9 Hz,H-6,6′),6.75 (1H,d,J=8.1 Hz,H-5,5′),4.95(1H,s,H-7,7′),4.08 (1H,d,J=9.5 Hz,H-9a,9a′),3.95 (1H,d,J=9.5 Hz,H-9b,9b′),3.84(3H,s,2×OCH3)；13C-NMR (CD3OD,101 MHz)δ:148.7 (C-3,3′),147.5 (C-4,4′),129.6 (C-1,1′),121.6 (C-6,6′),115.6 (C-5,5′),112.9 (C-2,2′),89.1 (C-7,7′,8,8′),76.8 (C-9,9′),56.4 (2×OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[24]對照基本一致,故鑒定為8,8′-二羥基松脂素。

化合物15:黃色油狀物,分子式C27H28O12。1HNMR (CD3OD,400 MHz) δ:7.61 (1H,d,J=15.9 Hz,H-7′),7.51 (1H,d,J=15.9 Hz,H-7″),7.04(1H,d,J=2.1 Hz,H-2′),7.01 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2″),6.93 (2H,m,J=8.0,2.1 Hz,H-6′,6″),6.76 (2H,d,J=8.1 Hz,H-5′,5″),6.30(1H,d,J=15.9 Hz,H-8′),6.18 (1H,d,J=15.9 Hz,H-8″),5.54 (1H,m,H-5),5.12 (1H,m,H-4),4.35 (1H,m,H-3),4.17 (2H,m,H-8),2.31 (2H,m,H-6),2.14 (2H,m,H-2),1.26(3H,t,J=7.19 Hz,H-9)；13C-NMR (CD3OD,101 MHz) δ:174.7 (C-7),168.5 (C-9′),167.9 (C-9″),149.8 (C-4′),149.7 (C-4″),147.7 (C-7′),147.6 (C-7″),146.8 (C-3′),146.8 (C-3″),127.7(C-1′),127.5 (C-1″),123.1 (C-6′),123.1 (C-6″),116.5 (C-2′),116.5 (C-2″),115.2 (C-5′),115.1 (C-5″),114.7 (C-8′),114.6 (C-8″),75.7(C-1),74.9 (C-5),69.1 (C-4),68.6 (C-3),62.7 (C-8),38.5 (C-6),38.3 (C-2),14.3 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[25]對照基本一致,故鑒定為4,5-二咖啡?？鼘幩嵋阴?。

化合物 16:無色針狀結(jié)晶,分子式C8H8O5。1H-NMR (DMSO,400 MHz) δ:7.08 (1H,d,J=1.92 Hz,H-2),7.03 (1H,d,J=1.92 Hz,H-6),3.78 (3H,s,-OCH3)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:167.4 (C-7),147.8 (C-3),145.2(C-5),139.0 (C-4),120.5 (C-1),110.7 (C-6),104.9 (C-2),55.9 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[26]對照基本一致,故鑒定為3-O-甲基-沒食子酸。

化合物17:白色粉末,分子式C16H22O9。1HNMR (DMSO,400 MHz) δ:6.37 (2H,s,H-3,5),4.90 (1H,d,J=7.3 Hz,H-1′),3.72 (6H,s,H-8,9),2.31 (3H,s,H-7),2.90～3.70 (6H,m,glucosyl protons)；13C-NMR (DMSO,101 MHz) δ:200.3 (C-10),159.8 (C-4),157.1 (C-2,6),114.0 (C-1),100.3 (C-1′),93.2 (C-3,5),77.4(C-5′),76.8 (C-3′),73.2 (C-2′),70.0 (C-4′),60.8 (C-6′),55.8 (C-8,9),32.3 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[27]對照基本一致,故鑒定為2,6-二甲氧基苯乙酮-4-O-β-3-D-葡萄糖。

4 結(jié)論

本研究從大花紅景天干燥根莖的乙酸乙酯和正丁醇提取物中分離鑒定得到17 個化合物,包括1個甾體類、1 個生物堿類、1 個木脂素類、2 個黃酮類、2 個萜類、4 個酚類、6 個有機(jī)酸類。前期查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)紅景天對四氯化碳[28]、對乙酰氨基酚[29]等誘導(dǎo)的肝損傷都有顯著的改善作用。今后,將繼續(xù)對分離得到的單體化合物進(jìn)行肝保護(hù)活性篩選,以期為大花紅景天的開發(fā)利用提供參考。