周霜霜 張伯

（1蘇州大學(xué)附屬張家港醫(yī)院＜張家港市第一人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科＞ 江蘇 張家港 215600）

（2蘇州大學(xué)附屬張家港醫(yī)院＜張家港市第一人民醫(yī)院普外科＞ 江蘇 張家港 215600）

原發(fā)性肝癌是全球范圍內(nèi)最常見、死亡率較高的惡性腫瘤，而肝細(xì)胞癌（HCC）占原發(fā)性肝癌的90.0%，全球約有HCC新發(fā)病例50萬例，而我國占全球新發(fā)病例的50.0%，成為世界上肝癌發(fā)生率最高的國家[1]。既往研究表明[2]：肝癌惡性程度相對較高，發(fā)展迅速，再加上患者發(fā)病隱匿，容易被患者忽視，導(dǎo)致患者治療后5年生存率較低。C/EBPβ是轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族成員，能與DNA增強(qiáng)子區(qū)域結(jié)合，加強(qiáng)下游基因轉(zhuǎn)錄效率[3]；vimentin是一種細(xì)胞骨架蛋白，能直接參與、調(diào)節(jié)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)與增殖，在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。因此，本研究以肝癌患者作為對象，探討C/EBPβ和 vimentin 在肝癌組織中的表達(dá)及臨床意義，報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月－2019年3月肝癌患者60例作為對象，所有患者均擬行手術(shù)治療，手術(shù)過程中取病灶組織及配對癌旁組織（距離病灶≥3cm）。其中，男44例，女16例，年齡23～79歲，平均（53.19±5.63）歲?；颊咧校幸腋螖y帶42例，無乙肝攜帶18例；TNM分期：-I、Ⅱ期36例，Ⅲ、IV期24例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)病理組織檢查確診；（2）均擬行手術(shù)治療，且患者均能耐受；（3）意識(shí)清楚，能與醫(yī)生進(jìn)行溝通、交流。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并精神異常、認(rèn)知功能障礙或入院資料不全者；（2）合并凝血異常、嚴(yán)重心、腎異常者或伴有自身免疫疾病者。

1.2 方法

（1）儀器與設(shè)備。C/EBPβ抗體、vimentin 抗體試劑盒（購置于蘇州優(yōu)寧維生物技術(shù)服務(wù)有限公司）、S-P試劑盒、DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)）、無水酒精、梯度濃度酒精；（2）檢測方法?；颊邤M行手術(shù)治療，手術(shù)過程中取病灶組織及配對癌旁組織，采用免疫組織化學(xué)法測定不同組織中C/EBPβ和vimentin 表達(dá)水平，取上述獲得的病灶組織與癌旁組織，利用多聚甲醛4%常溫下固定，經(jīng)石蠟包埋后制備4um切片，向切片中加入濃度為3%的H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，分別加入C/EBPβ和vimentin一抗（以PBS代替一抗作陰性對照），4℃下過夜，然后加入生物素標(biāo)記的C/EBPβ和vimentin二抗，常溫下完成10min孵育，利用DAB顯色后進(jìn)行蘇木素染色，利用中性樹膠常規(guī)封固。免疫組化染色下隨機(jī)取10個(gè)非重疊視野，完成細(xì)胞陽性比例計(jì)算；②判斷方法。C/EBPβ和vimentin陽性信號(hào)位于胞和、胞漿，上述抗體的陽性對照染色強(qiáng)度均記為2分；0分：待測組織細(xì)胞無信號(hào)，1分弱于對照；2分與對照相仿；3分：強(qiáng)于對照組，估算陽性區(qū)域百分比[4]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用（±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 不同組織中C/EBPβ與Vimentin蛋白的表達(dá)比較

肝癌病灶組織中C/EBPβ與Vimentin蛋白陽性率，均高于癌旁組織（P＜0.05），見表1。

表1 不同組織中C/EBPβ 與 Vimentin 蛋白的表達(dá)比較[n(%)]

2.2 原發(fā)性肝癌不同病理下C/EBPβ與Vimentin蛋白陽性率比較

原發(fā)性肝癌C/EBPβ與 Vimentin 蛋白陽性率與年齡、性別、AFP水平、是否有門靜脈侵犯、肝功能分級及肝硬化不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；原發(fā)性肝癌C/EBPβ與 Vimentin 蛋白陽性率與腫瘤直徑、分化類型、TNM分期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 原發(fā)性肝癌不同病理下C/EBPβ與 Vimentin 蛋白陽性率比較

3.討論

vimentin 主要表達(dá)于間充質(zhì)細(xì)胞，多種上皮源性腫瘤均可出現(xiàn)波動(dòng)蛋白異常表現(xiàn)，能直接參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，能作為上皮源性腫瘤的預(yù)測指標(biāo)。既往研究表明：vimentin是EMT的重要間質(zhì)標(biāo)記，是間質(zhì)細(xì)胞遷徙的重要調(diào)節(jié)者，在肝癌、胃癌等惡性腫瘤中均能直接促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移。C/EBPβ屬于轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族重要成員，能與DNA增強(qiáng)子區(qū)域結(jié)合增強(qiáng)下游基因轉(zhuǎn)錄效率。既往研究表明：C/EBPβ能調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，直接參與炎癥反應(yīng)。國外學(xué)者研究表明：C/EBPβ表達(dá)失調(diào)與腫瘤惡化存在緊密的聯(lián)系，能提高腫瘤細(xì)胞的存活率，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5]。本研究中，肝癌病灶組織中C/EBPβ與Vimentin蛋白陽性率，均高于癌旁組織（P＜0.05）；原發(fā)性肝癌C/EBPβ與Vimentin 蛋白陽性率與腫瘤直徑、分化類型、TNM分期具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明C/EBPβ和vimentin在肝癌組織中呈高表達(dá)，且與臨床病理存在緊密聯(lián)系，能直接參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，C/EBPβ和 vimentin 在肝癌組織中呈高表達(dá)，且與患者惡性程度有關(guān)，能反映患者預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療。