畢思遠(yuǎn) ，李保玲，朱志強(qiáng)*，曹濤，甘慧，金虹*

1. 哈爾濱體育學(xué)院滑雪教學(xué)訓(xùn)練基地博士后科研工作站（哈爾濱 150008）；2. 廣東省檢迅檢測(cè)科技有限公司（東莞 523843）；3. 深圳市匯知科技有限公司（深圳 518000）；4. 深圳市易瑞生物技術(shù)股份有限公司（深圳 518101）

中國(guó)是柑橘的重要原產(chǎn)地之一，柑橘資源豐富，優(yōu)良品種繁多，有4 000多年的栽培歷史。柑橘酸甜可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，是許多人喜愛(ài)的水果之一。醫(yī)學(xué)上，柑橘味甘酸、性涼，入肺、胃經(jīng)；具有順氣、止咳、健胃、化痰、消腫、止痛、疏肝理氣等多種功效，是很好的中藥材。隨著柑橘經(jīng)濟(jì)效益的提升，柑橘的種植面積不斷擴(kuò)大，柑橘產(chǎn)業(yè)作為果農(nóng)收入的主要來(lái)源，成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)作物經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè)。由于柑橘病蟲(chóng)種類(lèi)多，危害大，許多農(nóng)戶(hù)為防治病蟲(chóng)害及提高柑橘產(chǎn)量，經(jīng)常噴灑大量農(nóng)藥，導(dǎo)致部分柑橘農(nóng)藥殘留超標(biāo)[1-6]。菊酯類(lèi)農(nóng)藥是柑橘類(lèi)經(jīng)常噴灑的農(nóng)藥種類(lèi)之一，具有蓄積性，即使低劑量長(zhǎng)期接觸也會(huì)引起慢性疾病。因此，檢測(cè)柑橘中菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留情況具有十分重要的意義。

菊酯類(lèi)農(nóng)藥目前應(yīng)用最多的是農(nóng)業(yè)部NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》的測(cè)定方法。該前處理方法用時(shí)較長(zhǎng)，且用到正己烷、丙酮、乙腈3種溶劑。QuEChERS是近年來(lái)國(guó)際上發(fā)展迅速的用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的前處理技術(shù)，于2003年首次被報(bào)道使用于水果蔬菜中。該方法與NY/T 761—2008的前處理方法相比，減少了樣品取樣量和溶劑的使用量，解決了分析時(shí)間長(zhǎng)、溶劑使用量大等問(wèn)題，被廣泛推廣于很多國(guó)家和地區(qū)[7-14]。因此，試驗(yàn)采用QuEChERS前處理方法對(duì)柑橘類(lèi)水果樣品提取、凈化，氣相色譜儀配備ECD檢測(cè)器上機(jī)檢測(cè)，分析柑橘類(lèi)水果中的7種菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留量，為柑橘類(lèi)農(nóng)藥殘留的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供重要的數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器

7890A型氣相色譜儀配備ECD檢測(cè)器（安捷倫科技公司）；DB-17毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm，安捷倫科技公司）；ME204電子天平（瑞士梅特勒公司）；DSY-VI型氮吹儀（上海東精華苑科技公司）。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：質(zhì)量濃度均為100 μg/mL的百菌清、腐霉利、三唑酮、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正己烷（均為色譜純，TIDEA化學(xué)試劑公司）；醋酸鈉（分析純，國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司）。

QuEChERS萃取包（5 g硫酸鎂，1.5 g乙酸鈉）；QuEChERS凈化管（1.2 g硫酸鎂、500 mg PSA和400 mg GCB，上海安譜科技有限公司）。

1.2 色譜條件

進(jìn)樣口溫度220 ℃；檢測(cè)器溫度250 ℃；柱流量1.2 mL/min；尾吹65 mL/min；載氣，氮?dú)?；分流?0︰1。

升溫程序：初始溫度60 ℃，以15 ℃/min升溫速率升至180 ℃，保持3 min，再以20 ℃/min升溫速率升至300 ℃，保持2 min。

1.3 樣品處理

樣品溶液的制備：取新鮮的柑橘樣品，經(jīng)縮分后將其切碎，充分混勻后放入食品粉碎機(jī)粉碎，制成待測(cè)樣品。放入包裝容器中備用。

樣品提?。簻?zhǔn)確稱(chēng)取10.0 g已制備好的柑橘樣品，放入25 mL離心管中，加入10 mL一酸乙腈溶液，旋渦混合后，加入QuEChERS萃取包（5 g硫酸鎂、1.5 g乙酸鈉），劇烈振蕩3 min，在離心機(jī)中以5 000 r/min離心3 min。上清液備用。

樣品凈化：移取5 mL離心后的上清液到QuEC-hERS凈化管（1.2 g硫酸鎂、500 mg PSA和400 mg GCB）中，強(qiáng)力振搖1 min使之得以?xún)艋耆?。? 000 r/min離心3 min。精密移取2 mL離心好的上清液到刻度試管中，在氮吹儀中吹至近干后，加入1 mL正己烷溶解殘?jiān)?。?jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣色譜系統(tǒng)。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：精密移取質(zhì)量濃度均為100 μg/mL的百菌清、腐霉利、三唑酮、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯，標(biāo)準(zhǔn)溶液，各1 mL，置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻，即得10 μg/mL的各單標(biāo)溶液儲(chǔ)備液，備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 萃取溶劑的確定

乙腈、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷為常見(jiàn)的農(nóng)藥殘留測(cè)定所用的萃取溶劑。相比于其他3種溶劑，乙腈能很好地降低對(duì)脂肪、糖類(lèi)等的溶解性（柑橘中含有大量糖類(lèi)）。而且用乙腈提取時(shí)，提取物中雜質(zhì)較少，干擾小。為更好地萃取對(duì)酸堿度敏感的農(nóng)藥，降低降解程度，采用1%乙酸乙腈作為提取溶劑，7種農(nóng)藥的回收率有了很大提高（見(jiàn)表1）。綜合考慮，選擇1%的乙酸乙腈作為提取溶劑。

表1 2種萃取溶劑回收率結(jié)果比較

2.2 色譜柱的選擇

色譜柱作為氣相色譜的核心部分，在待測(cè)物的分離及靈敏度的高低方面起著至關(guān)重要作用。試驗(yàn)選擇DB-17（30 m×0.25 mm，0.25 μm），HP-5（30 m×0.25 mm，0.25 μm）和DB-1（30 m×0.25 mm，0.25 μm）3種色譜柱，配制0.5 μ g/mL 7種農(nóng)藥的混標(biāo)溶液進(jìn)行色譜分離測(cè)試，比較DB-17、HP-5和DB-13種色譜柱上7種農(nóng)藥的分離度和靈敏度。結(jié)果表明，DB-17和DB-1毛細(xì)管柱分離效果較HP-5好，但是DB-17較DB-1待7種農(nóng)藥的靈敏度高。為保證檢測(cè)結(jié)果能準(zhǔn)確定量，選擇測(cè)DB-17（30 m×0.25 mm，0.25 μm）作為測(cè)定的分離柱。圖1為7種農(nóng)藥在DB-17上分離的標(biāo)準(zhǔn)圖譜，圖2為陽(yáng)性樣品的典型譜圖。

圖1 7種農(nóng)藥在DB-17上分離的標(biāo)準(zhǔn)圖譜

圖2 陽(yáng)性樣品典型圖譜

2.3 線性方程及檢出限

精密移取一定量1.4的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用正己烷依次配制成百菌清、腐霉利、三唑酮、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯和氯菊酯的質(zhì)量濃度均為0.02，0.10，0.50，1.00，1.50和2.00 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，進(jìn)樣氣相色譜。以各農(nóng)藥殘留的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，做線性分析。ECD檢測(cè)器具有較高的靈敏度，采用以3倍信號(hào)與噪聲比（S/N）計(jì)算7種農(nóng)藥的檢出限。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 7種菊酯類(lèi)農(nóng)藥線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限

2.4 加標(biāo)回收及精密度試驗(yàn)

稱(chēng)取3份10.0 g的樣品，分別加入最終理論值為（0.1 mg/kg）、中（0.5 mg/kg）、高（1.0 mg/kg）3個(gè)水平濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3樣品的提取及凈化過(guò)程處理樣品，待儀器穩(wěn)定后，進(jìn)樣氣相色譜分析。得到7種農(nóng)殘的實(shí)際含量值，以實(shí)際含量值與理論加標(biāo)濃度的比值計(jì)算3個(gè)水平的回收率。每個(gè)水平濃度點(diǎn)的樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣6針，計(jì)算儀器的精密度?；厥章始熬芏葴y(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可以看出，7種農(nóng)藥在3個(gè)水平的加標(biāo)回收率范圍在85.7%～95.2%之間，精密度測(cè)定值在1.65%～3.26%之間，符合分析測(cè)定的要求。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

稱(chēng)取10.0 g的樣品，加入7種農(nóng)藥殘留的混標(biāo)溶液，使最終理論值為0.1 mg/kg，按照1.3樣品的提取及凈化過(guò)程處理樣品，同法配制6份待測(cè)溶液。計(jì)算6份樣品溶液檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算精密度測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見(jiàn)表4。由檢測(cè)數(shù)據(jù)得出，7種農(nóng)藥精密度測(cè)試的RSD在1.29%～3.90%之間。

表4 重復(fù)性結(jié)果

3 結(jié)論

建立一種改進(jìn)的QuEChERS前處理柑橘類(lèi)水果，DB-17色譜柱分離、氣相色譜儀配備ECD檢測(cè)器檢測(cè)柑橘類(lèi)水果中百菌清、腐霉利、三唑酮、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氯菊酯7種常用農(nóng)藥殘留的方法。方法中確定1%的乙酸乙腈作為提取溶劑。通過(guò)比較，選擇DB-17色譜柱對(duì)7種農(nóng)藥進(jìn)行分離；同時(shí)對(duì)方法的線性及檢出限、加標(biāo)回收與精密度、重現(xiàn)性進(jìn)行考察。結(jié)果表明該方法具有前處理操作簡(jiǎn)便、成本低、檢出限低、準(zhǔn)確度及靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，適用于柑橘類(lèi)水果中有機(jī)氯及菊酯類(lèi)農(nóng)藥的測(cè)定。