孫思勝，田文翰，馬傳貴，陳亞群，張化閣，李光輝*

1. 許昌學(xué)院食品與生物工程學(xué)院，河南省食品安全生物標(biāo)識快檢技術(shù)重點實驗室（許昌 461000）；2. 北京京誠生物科技有限公司（北京 102600）；3. 舞鋼市沁豐園林業(yè)專業(yè)合作社（舞鋼 462500）

“夏黑”葡萄為葡萄科（Vitaceace）葡萄屬（Vitis L.）的歐美雜交三倍體品種。“夏黑”葡萄成熟因果實呈紫黑色而艷麗誘人，具有濃郁的草莓香味，肉質(zhì)肥厚，無核，甜酸適宜等特點而深受消費者的喜愛[1-2]。由于葡萄鮮嫩多汁、水分高，采摘過程中容易受機(jī)械損傷，且采收季節(jié)為高溫多濕的盛夏，蒸騰作用相對較強(qiáng)，代謝旺盛，是較難貯運的果品，貯藏期間的因素為：硬度降低、水分流失、干梗、掉粒、容易受病菌侵染而腐爛等，導(dǎo)致其貯藏時間縮短，嚴(yán)重影響了鮮食葡萄的商品價值，給生產(chǎn)者和銷售者造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[3-5]。

近年來國內(nèi)外有關(guān)葡萄的保鮮主要有化學(xué)保鮮劑（SO2防腐劑、ClO2殺菌劑、1-MCP），低溫冷藏，涂膜保鮮和氣調(diào)貯藏等方法和技術(shù)[5]。雖然SO2在保持葡萄果實品質(zhì)方面具有較好效果，但其易導(dǎo)致葡萄漂白、傷害、異味等問題，并且殘留在果實中的SO2會危害人體健康[6-7]；因此開發(fā)一種安全有效的葡萄保鮮劑尤為必要。

以中藥為原料的植物源保鮮劑由于具有殘留低、安全、殺菌抑菌、廉價、資源豐富等優(yōu)點而日益成為研究開發(fā)的熱點，尤其適用于附加值較高的果蔬保鮮研究。中國中藥資源豐富多樣，不少中藥中含有抗菌和抗氧化成分，對細(xì)菌、真菌等病原微生物具有較強(qiáng)的抑菌活性，對采后果蔬具有較明顯的保鮮活性。

丁香為木犀科（Oleacae）丁香屬（Syinga）植物，具有抗菌的作用。黃巍等[8]在研究丁香精油涂布對水蜜桃的保鮮效果中發(fā)現(xiàn)，丁香精油涂布可顯著降低水蜜桃的腐爛并保持水蜜桃的感官品質(zhì)，同時對于維持果品的可溶性固形物含量和硬度也具有一定效果。桑葉是桑樹的干燥葉，產(chǎn)量豐富，其有效成分包括黃酮及黃酮苷類、生物堿類、多糖類等[9]。葉文峰等[10]發(fā)現(xiàn)桑葉具有抗氧化作用。

丁香和桑葉兩者組合在一起的提取物結(jié)合淀粉涂膜處理在“夏黑”葡萄保鮮方面的研究鮮有報道。因此，研究不同濃度丁香和桑葉兩者配伍的提取物結(jié)合淀粉涂膜處理對“夏黑”葡萄貯藏品質(zhì)及生理的影響，為開發(fā)天然果品保鮮劑提供數(shù)據(jù)支持和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

“夏黑”葡萄（舞鋼市沁豐園林業(yè)專業(yè)合作社）；丁香、桑葉（河南省許昌市胖東來醫(yī)藥超市，產(chǎn)地廣西）；草酸、可溶性淀粉（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；酚酞、鉬酸銨、抗壞血酸、硫酸亞鐵、磷酸二氫鉀、鄰苯二甲酸氫鉀（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；氯化鋇（天津市天力化學(xué)試劑有限公司）；3, 5-二硝基水楊酸（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）；鄰苯二酚（天津市大茂化學(xué)試劑廠）；過氧化氫（30%，天津市凱通化學(xué)試劑有限公司）；三氯乙酸（上海山浦化工有限公司）；2-硫代巴比妥酸（上?？曝S實業(yè)有限公司）；2, 6-二氯靛酚鈉（上海源葉生物科技有限公司）；化學(xué)試劑均為分析純。

分析天平（上海精密儀器儀表有限公司）；T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；電磁爐（九陽股份有限公司）；TGL-16M臺式高速冷凍離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；GY-3硬度計（愛德堡儀器有限公司）；HH-4電熱恒溫水浴鍋（上海比朗儀器有限公司）；冷庫（江蘇泰州市霍普制冷設(shè)備有限公司）。

1.2 “夏黑”葡萄的處理

“夏黑”葡萄采摘后立即送往實驗室，篩選，選取成熟度（完熟）一致、無腐爛、無病無蟲害侵襲、無機(jī)械傷的果穗為試驗材料。

先稱取15 g桑葉，放入盛有2 500 mL自來水的鍋中浸泡30 min，在電磁爐上加熱沸騰，小火開始熬制，等到熬制25 min后，把在500 mL自來水浸泡30 min的9 g丁香放入鍋中，5 min后，將溶解好的9 g淀粉放入鍋中，混合均勻，過濾，將這種濃度涂膜液記為B1。同樣的方法分別稱取30 g桑葉+18 g丁香，45 g桑葉+27 g丁香，60 g桑葉+36 g丁香和75 g桑葉+45 g丁香，同時加入9 g的淀粉從而制成另外4種濃度的涂膜液，分別記成B2、B3、B4和B5，放涼后備用。

每組選取27穗“夏黑”葡萄，將選取的樣品葡萄浸泡在涂膜液中靜置6～8 min，浸泡完畢后取出，自然狀態(tài)下晾干，包裝樣品葡萄采用PE保鮮袋（35 cm×25 cm×0.01 mm）包裝（不扎口），低溫貯藏于0～4 ℃冷庫中。

對照組葡萄用燒開后放涼的蒸餾水處理，同樣需要浸泡6～8 min，晾干后用同等規(guī)格的保鮮袋包裝，低溫貯藏于0～4 ℃冷庫中；記為CK。每隔5 d取樣測定1次相關(guān)指標(biāo)，每個葡萄果實作為1次重復(fù)，每個處理重復(fù)3次。

1.3 指標(biāo)測定

1.3.1 落粒率的計算[11]

1.3.2 腐爛率的計算[12]

1.3.3 可溶性固形物含量的測定

使用手持糖度計法[13]測定葡萄果實中可溶性固形物含量。

1.3.4 VC含量的測定

使用2, 6-二氯靛酚鈉法[14]測定葡萄果實中VC含量。

1.3.5 丙二醛含量的測定

丙二醛含量采用硫代巴比妥酸比色法[11]測定。

1.3.6 呼吸強(qiáng)度的測定

呼吸強(qiáng)度采用靜置法[15]進(jìn)行測定。

1.3.7 過氧化物酶活性的測定

采用愈創(chuàng)木酚法[16]測定過氧化物酶的活性。

1.4 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析

采用Microsoft Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，用SPSS 13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，使用最低顯著性差異法（Least significant difference，LSD）進(jìn)行顯著性差異分析（p＜0.05為差異顯著，p＜0.01為差異極顯著）。

2 結(jié)果與分析

2.1 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄落粒率的影響

落粒率可直接反映葡萄的貯藏保鮮的效果。從表1中可以看出，隨著貯藏時間延長，采后“夏黑”葡萄的落粒率均呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢。在第5天時，采后“夏黑”葡萄開始有落?，F(xiàn)象出現(xiàn)。在貯藏5～15 d期間，對照組“夏黑”葡萄的落粒率上升速度很快，丁香復(fù)合桑葉提取物各處理組均顯著低于對照組（p＜0.05）；在貯藏第15天時，CK的落粒率為53%（最高且嚴(yán)重影響葡萄的商品品質(zhì)），B1、B2、B3、B4和B5的落粒率分別為14%，9.33%，30%，11.33%和25%，B2處理組的落粒率最低。在貯藏第25天時，B2處理組的落粒率剛達(dá)到30%，B1、B3、B5和對照組的落粒率均遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過30%，與B2處理組差異顯著（p＜0.05）。通過多重比較結(jié)果表明，丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理可以抑制采后“夏黑”葡萄果實的落粒，在一定貯藏時間內(nèi)，以B2處理對果實落粒率抑制效果較好。

2.2 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄腐爛率的影響

腐爛率是評價果品貯藏保鮮效果的一個重要指標(biāo)。由表2可知，采后“夏黑”葡萄的腐爛率隨著貯藏時間延長而呈現(xiàn)上升趨勢。在貯藏0～5 d，各處理組和對照組采后“夏黑”葡萄均沒出現(xiàn)腐爛。在貯藏第15天時，對照組和B3處理組葡萄的腐爛率顯著高于其他處理組（p＜0.05）；其中對照組的腐爛率最高，為36%；B2的腐爛率最低，為9.33%。在貯藏20～30 d，對照組的葡萄的腐爛率顯著高于其他丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理組（p＜0.05）。經(jīng)過多重比較結(jié)果可知，丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理可抑制采后“夏黑”葡萄果實的腐爛率上升，在一定貯藏時間內(nèi)，以B2處理對果實腐爛率抑制效果較好。

表1 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄落粒率的影響

表2 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄腐爛率的影響

2.3 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄可溶性固形物含量的影響

可溶性固形物含量是判斷采后葡萄果實耐貯藏性的重要指標(biāo)。由圖2可知，采后“夏黑”葡萄果實隨著貯藏時間增加，可溶性固形物含量呈先上升后下降趨勢。在貯藏第25天時，B1和B2處理組的可溶性固形物含量顯著高于對照組（p＜0.05），對照組葡萄果實的可溶性固形物含量為16.1%，而B1和B2處理組的分別為17.17%和17.13%，B3和B5處理組的均為16.67%，B4的為16.8%。可見，丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理可延緩采后“夏黑”葡萄果實可溶性固形物含量的下降。

2.4 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄VC含量的影響

根據(jù)圖2可知，在貯藏期間，采后“夏黑”葡萄的VC含量隨著貯藏時間延長呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，出現(xiàn)下降的原因可能是“夏黑”葡萄果實中VC隨著貯藏時間的延長而不斷氧化分解而下降。在0～25 d，B2處理的葡萄果實VC含量均高于對照組和其他處理組。其中，在貯藏第20天時，對照組CK的VC含量為0.75 mg/100 g，而B2處理組的為2.02 mg/100 g，顯著差異（p＜0.05）。說明丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理可抑制采后“夏黑”葡萄果實VC含量的下降，從而保持采后“夏黑”葡萄的貯藏品質(zhì)。

圖1 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄可溶性固形物含量的影響

圖2 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄VC含量的影響

2.5 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄丙二醛含量的影響

丙二醛是評價膜脂過氧化程度的重要指標(biāo)，與葡萄果實的成熟衰老基本一致，因此可以作為判斷果實是否進(jìn)入衰老階段的指標(biāo)之一[17]。由圖3可見，“夏黑”葡萄果實的丙二醛含量隨著貯藏時間的延長而逐漸上升，且對照組的丙二醛含量在整個貯藏期間均高于各丁香復(fù)合桑葉提取物處理組。在貯藏第25天時，對照組的丙二醛含量顯著高于B2處理組（p＜0.05）；對照組的丙二醛濃度為1.55 μmol/g，B2組的丙二醛濃度為1.06 μmol/g。說明在相同的貯藏條件下，丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理的B2能更好地抑制采后“夏黑”葡萄果實膜脂過氧化程度，延緩葡萄的衰老。

圖3 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄丙二醛含量的影響

2.6 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄呼吸強(qiáng)度的影響

夏黑葡萄采后的呼吸作用與采后果實品質(zhì)變化、成熟衰老、貯藏壽命等有著密切的關(guān)系[18]。由圖4可知，隨著貯藏時間延長，各丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理組的呼吸強(qiáng)度呈現(xiàn)先下降再逐漸上升趨勢，而對照組保持始終上升趨勢。在貯藏第15天時，對照組CK處理組的果實呼吸強(qiáng)度為23.70 mg/（kg·h），而B1、B2、B3、B4和B5的果實呼吸強(qiáng)度分別為17.19，18.71，12.09，14.61和17.78 mg/（kg·h）；可見丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理對采后“夏黑”葡萄呼吸強(qiáng)度具有一定抑制作用。

圖4 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄呼吸強(qiáng)度的影響

2.7 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄過氧化物酶活性的影響

過氧化物酶可以催化清除植物組織中低濃度的H2O2，從而使機(jī)體免受H2O2的毒害作用。由圖5可以看出，隨著貯藏時間延長，各處理組和對照組的采后“夏黑”葡萄果實中過氧化物酶活性總體呈先下降后上升再下降趨勢。對照組的葡萄果實過氧化物酶活性在貯藏第20天出現(xiàn)高峰，而其他丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理組均在第25天出現(xiàn)高峰。在貯藏第25天時，各丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理組的過氧化物酶活性均顯著高于對照組（p＜0.05），各處理組差異不明顯；對照組的過氧化物酶活性為7.90 U/g（最低），丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理組B1、B2、B3、B4和B5的過氧化物酶活性分別為12.43，15.46，12.89，13.74和13.89 U/g。在整個貯藏期間，丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理可延緩過氧化物酶活性的降低的進(jìn)程。

圖5 丁香復(fù)合桑葉提取物處理對采后“夏黑”葡萄過氧化物酶活性的影響

3 結(jié)論

試驗以丁香和桑葉的水提物為原料結(jié)合淀粉，將其應(yīng)用于“夏黑”葡萄的貯藏保鮮。通過測定不同濃度的丁香和桑葉兩者配伍的提取物結(jié)合淀粉涂膜處理對“夏黑”葡萄貯藏品質(zhì)指標(biāo)及生理指標(biāo)的變化篩選出保鮮涂膜液的最適濃度。結(jié)果表明，與對照組相比，在一定貯藏時間內(nèi)，丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理對采后“夏黑”葡萄果實的落粒率、腐爛率、丙二醛濃度和呼吸強(qiáng)度的上升具有一定抑制作用，延緩VC和可溶性固形物含量的下降速度，同時延緩果實過氧化物酶的活性降低的進(jìn)程，進(jìn)而延長果實的貯藏壽命。其中，以丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜的B2對采后“夏黑”葡萄果實的貯藏保鮮效果最好。研究表明一定的丁香復(fù)合桑葉提取物結(jié)合淀粉涂膜處理有望開發(fā)成為“夏黑”葡萄保鮮劑。