寧亞維，李文蕾，蘇丹，王志新，劉楊柳，賈英民*

1(河北科技大學(xué) 生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北 石家莊，050018) 2(北京工商大學(xué) 食品與健康學(xué)院，北京，100048)

生物防腐劑因具有天然、高效、安全性高等優(yōu)勢受到人們青睞[1]，它包括生物源抑菌物質(zhì)及具有抑菌活性微生物防腐2種類型[2]。生物源抑菌物質(zhì)主要包括動植物提取物[3-5]和微生物代謝產(chǎn)物[6]，抑菌性微生物主要是具有抑菌活性乳酸菌的開發(fā)[7]。微生物代謝產(chǎn)物由于制備周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)勢成為生物防腐劑開發(fā)的重點。乳酸菌代謝產(chǎn)物和芽孢桿菌代謝產(chǎn)物成為重點開發(fā)的生物防腐劑[8]。其中已經(jīng)商品化生產(chǎn)的乳酸菌代謝產(chǎn)物nisin，由于抑菌活性高、安全性好等優(yōu)點已經(jīng)被工業(yè)化生產(chǎn)并應(yīng)用。由于nisin主要對革蘭氏陽性菌抑菌效果好，對革蘭氏陰性菌基本不抑制，在食品防腐中的應(yīng)用具有一定的局限性[9-10]。因此，開發(fā)具有廣譜抑菌活性的生物防腐劑或生物防腐劑配方具有重要的研究價值。

Brevilaterin是由BrevibacilluslaterosporusS62-9產(chǎn)生的一類具有抑菌活性的小肽，可以抑制金黃色葡萄球菌、單核細胞增生李斯特菌、大腸桿菌、沙門氏菌等多種食源性致病菌的生長和繁殖[11-12]。Brevilaterin作為新型生物抑菌物質(zhì)除具有安全性高、抑菌譜廣的優(yōu)點外，還具有高度熱及pH值穩(wěn)定性，在食品防腐中具有較高的工業(yè)化應(yīng)用潛力。然而，brevilaterin對革蘭氏陽性菌抑菌效果好，對革蘭氏陰性菌抑菌效果較弱，在食品防腐中需要加大使用劑量才能實現(xiàn)廣譜抑菌(同時抑制革蘭氏陽性菌和陰性菌)作用，導(dǎo)致使用成本較高。抑菌物質(zhì)的聯(lián)合使用主要存在3種效應(yīng)：協(xié)同、無關(guān)、拮抗[13]，其中抑菌物質(zhì)間的協(xié)同作用可以降低單一抑菌物質(zhì)的用量，提高抑菌效果[14-15]，因此可篩選與brevilaterin存在協(xié)同抑菌效應(yīng)的防腐劑，通過復(fù)配降低添加劑用量，從而降低使用成本。

細菌性食源性疾病是食品安全的核心問題[16]，我國每年發(fā)生的細菌性食物中毒事件占食物中毒事件總數(shù)的30%～90%，因此，控制細菌性食源性疾病對于保障食品安全至關(guān)重要。據(jù)報道全世界引發(fā)食源性疾病的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌和沙門氏菌[17]。因此，本研究以金黃色葡萄球菌和單核細胞增生李斯特菌作為革蘭氏陽性致病菌指示菌，以大腸桿菌和鼠傷寒沙門氏菌作為革蘭氏陰性致病菌指示菌，首先篩選與brevilaterin具有協(xié)同抑菌作用的抑菌物質(zhì)，然后考察復(fù)配組合中各抑菌物質(zhì)的添加量，并通過時間殺菌曲線驗證殺菌效果，為抗菌肽復(fù)合食品防腐劑在食品防腐中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

StaphylococcusaureusATCC 25923、Listeriamonocytogenes10403s、EscherichiacoliATCC 44752、SalmonellaATCC 14028，河北科技大學(xué)食品生物技術(shù)與安全實驗室保藏?？咕腷revilaterin(白色粉末，1 AU=1 μg/mL)為本實驗室制備[18]。丁香酚、肉桂醛、檸檬酸、ε-聚賴氨酸、茶多酚、魚精蛋白、EDTA-Na2、乳酸鏈球菌素(nisin)，上海麥克林生化科技有限公司；檸檬酸和磷酸三鈉，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；山梨酸鉀，北京科百奧生物科技有限公司；苯甲酸鈉，西隴化工股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Scan1200全自動菌落計數(shù)儀，法國Interscience公司；Spectramax plus 384酶標儀，美國Molecular Devices；Evolution 220紫外分光光度計，美國Thermo Scientific公司。

1.3 方法

1.3.1 食品防腐劑儲備液的配制

丁香酚和肉桂醛溶于5%的吐溫-20，配制成質(zhì)量濃度為100 mg/mL的儲備液；乳酸鏈球菌素(nisin)、檸檬酸、苯乳酸、ε-聚賴氨酸、茶多酚、魚精蛋白、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、EDTA-Na2、磷酸三鈉均溶于無菌水，配置成質(zhì)量濃度為10、20、20、1、10、20、200、250、160、100 mg/mL的儲備液；抗菌肽brevilaterin溶于水制備為1280 AU/mL的儲備液。

1.3.2 最小抑菌濃度測定

采用96孔板微量二倍稀釋法考察各抑菌物質(zhì)的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)。參照WIEGAND等[19]的方法進行適當修改：在96孔板的2～11孔分別加入100 μL培養(yǎng)基，第12孔加入200 μL培養(yǎng)基作為空白對照；在第1、2孔中分別加入100 μL抗菌溶液，第2孔混勻后吸取100 μL至第3孔，重復(fù)此操作至第10孔，第10孔混合均勻后吸取100 μL棄去；在1～11孔中接種100 μL菌懸液，使每孔菌體終濃度為5×105CFU/mL；將96孔板置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h，最小抑菌濃度為培養(yǎng)前后ΔOD600≤0.05 的抑菌劑的最低濃度，結(jié)合肉眼觀察即可判定為最低抑菌濃度MIC。

1.3.3 聯(lián)合抑菌效應(yīng)評價

參考SEGAL等[20]的微量棋盤法利用96孔板進行聯(lián)合抑菌試驗。將brevilaterin和食品防腐劑濃度配置為8～1/8 MIC；在孔板的A2～H2孔中分別加入8 MIC-brevilaterin，A3～H3孔中分別加入4 MIC-brevilaterin，依次進行；在H1～H8孔中分別加入8MIC-防腐劑，G1～G8孔中分別加入8MIC-防腐劑，依次進行；在A1孔中加入200 μL培養(yǎng)基，做空白對照；在其它孔中加入菌懸液，使每孔最終菌濃約為5×105CFU/mL；將96孔板置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h，根據(jù)澄清孔中2種抑菌劑聯(lián)用時的最終MIC計算聯(lián)合抑菌指數(shù)FICI。聯(lián)合抑菌作用評價根據(jù)下列公式1：

(1)

通過計算聯(lián)用時的聯(lián)合抑菌指數(shù)FICI，判斷兩者的聯(lián)用關(guān)系：FICI≤0.5，判定為協(xié)同作用；0.52，為拮抗作用。

1.3.4 Brevilaterin和食品防腐劑復(fù)配配方篩選

基于聯(lián)合抑菌效應(yīng)評價結(jié)果，選取與brevilaterin具有協(xié)同抑菌效果的抑菌劑及兩者的復(fù)配比例。分別向添加有抑菌物質(zhì)和培養(yǎng)基的試管中分別接入對數(shù)生長期的E.coliATCC 44752和S.aureusATCC 25923，使最終菌體濃度為105CFU/mL。各試管置于 37 ℃培養(yǎng)18 h時，取樣進行菌落計數(shù)，每組平行測定3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 Brevilaterin與食品防腐劑的最小抑菌濃度

首先考察了brevilaterin與11種食品添加劑對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最小抑菌濃度，結(jié)果(表1)顯示，brevilaterin對革蘭氏陰性菌的MIC為160 AU/mL(大腸桿菌)和320 AU/mL(沙門氏菌)，顯著高于革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌(10 AU/mL)和單核細胞增生李斯特菌(20 AU/mL)。8種天然食品防腐劑中除了丁香酚外均呈現(xiàn)對革蘭氏陽性菌抗菌活性優(yōu)于革蘭氏陰性菌的結(jié)果，且brevilaterin和ε-聚賴氨酸的效果最佳。肉桂醛對革蘭氏陽性菌和陰性菌的抑菌效果相當，檸檬酸對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果優(yōu)于單核細胞增生李斯特菌和沙門氏菌。關(guān)于革蘭氏陰性菌的抑制，天然防腐劑中ε-聚賴氨酸對革蘭氏陰性菌的抑菌效果最好，MIC值為0.125 mg/mL；其次為丁香酚、肉桂醛和茶多酚，MIC值均小于1 mg/mL。4種化學(xué)防腐劑中僅有EDTA-Na2對革蘭氏陽性菌的抑菌效果最好(MIC值小于1 mg/mL)，其他化學(xué)防腐劑對4種致病菌抑菌效果較差，MIC均大于 10 mg/mL?？傊?，以上結(jié)果表明天然防腐劑的抑菌效果優(yōu)于化學(xué)防腐劑，且天然防腐劑對革蘭氏陽性菌的抑菌效果普遍優(yōu)于革蘭氏陰性菌。

表1 Brevilaterin與食品防腐劑對食源性致病菌的最小抑菌濃度Table 1 MICs of brevilaterin and food preservatives against foodborne pathogens

注：“-”代表無抑菌活性。

2.2 Brevilaterin與食品防腐劑的聯(lián)合抑菌效應(yīng)

2.2.1 Brevilaterin與食品防腐劑聯(lián)用對金黃色葡萄球菌和單核細胞增生李斯特菌的聯(lián)合抑菌作用

首先，考察了brevilaterin和食品添加劑聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的聯(lián)合抑菌效應(yīng)，結(jié)果(表2)顯示brevilaterin和ε-聚賴氨酸聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的分級抑菌指數(shù)FICI為0.5，判定為協(xié)同作用。

表2 Brevilaterin與食品防腐劑對金黃色葡萄球菌的聯(lián)合抑菌作用Table 2 Combined antibacterial effect of Brevilaterin with food preservatives against S. aureus

Brevilaterin-nisin和brevilaterin-魚精蛋白對金黃色葡萄球菌的分級抑菌指數(shù)FICI介于0.5～1之間，均表現(xiàn)為部分協(xié)同抑菌，brevilaterin分別與ε-聚賴氨酸、nisin和魚精蛋白聯(lián)用可以降低單一添加劑的使用劑量，發(fā)揮協(xié)同增效作用。brevilaterin-丁香酚、brevilaterin-肉桂醛對金黃色葡萄球菌的分級抑菌指數(shù)FICI為1，均表現(xiàn)為相加作用。brevilaterin分別與檸檬酸、茶多酚、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、磷酸三鈉和EDTA-Na2聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的分級抑菌指數(shù)FICI均為2，表現(xiàn)為無關(guān)。

其次，考察了brevilaterin和食品添加劑聯(lián)用對單核細胞增生李斯特菌的聯(lián)合抑菌效應(yīng)，結(jié)果(表3)顯示brevilaterin分別與ε-聚賴氨酸、丁香酚、魚精蛋白、苯甲酸鈉、磷酸三鈉、EDTA-Na2的分級抑菌指數(shù)FIC均在0.5～1之間，表明聯(lián)合作用為部分協(xié)同關(guān)系；brevilaterin與肉桂醛的FICI為1，表明兩者為相加作用；brevilaterin分別與nisin、茶多酚、檸檬酸、山梨酸鉀的FIC均為2，表明聯(lián)用為無關(guān)作用。上述結(jié)果表明brevilaterin分別與ε-聚賴氨酸和魚精蛋白聯(lián)用對革蘭氏陽性致病菌具有協(xié)同或部分協(xié)同抑菌作用，brevilaterin與nisin聯(lián)用對金黃色葡萄球菌具有部分協(xié)同效應(yīng)?？紤]到ε-聚賴氨酸和nisin為GB 2760食品添加劑使用標準中規(guī)定使用的添加劑，且應(yīng)用范圍較廣，因此brevilaterin與ε-聚賴氨酸和nisin聯(lián)用對于食品中革蘭氏陽性致病菌的控制具有較高的應(yīng)用潛力。

表3 Brevilaterin與食品防腐劑對單增李斯特菌的聯(lián)合抑菌作用Table 3 Combined antibacterial effect of Brevilaterin with food preservatives against L. monocytogenes

2.2.2 Brevilaterin與食品防腐劑聯(lián)用對大腸桿菌和沙門氏菌的聯(lián)合抑菌作用

進一步考察了brevilaterin與食品防腐劑聯(lián)用對革蘭氏陰性致病菌的聯(lián)用作用效應(yīng)，其中對大腸桿菌的聯(lián)合抑菌效應(yīng)結(jié)果(表4)顯示：brevilaterin分別與EDTA-Na2和檸檬酸聯(lián)用對大腸桿菌的FICI分別為0.141和0.5，屬于協(xié)同抑菌。盡管EDTA-Na2與brevilaterin聯(lián)用的協(xié)同抑菌效應(yīng)更強，但是由于EDTA-Na2對大腸桿菌的MIC是檸檬酸的8倍，因此brevilaterin與檸檬酸的協(xié)同效應(yīng)更值得推廣應(yīng)用。Brevilaterin-磷酸三鈉對大腸桿菌的FICI為0.625，表明brevilaterin-磷酸三鈉對大腸桿菌呈現(xiàn)部分協(xié)同關(guān)系。Brevilaterin分別與肉桂醛、苯甲酸鈉和山梨酸鉀聯(lián)用對大腸桿菌的FICI均為1，表現(xiàn)為相加關(guān)系。Brevilaterin分別與ε-聚賴氨酸、茶多酚和丁香酚聯(lián)用對大腸桿菌的FICI均為2，表現(xiàn)為無關(guān)作用。

表4 Brevilaterin與食品防腐劑對大腸桿菌的聯(lián)合抑菌作用Table 4 Combined antibacterial effect of brevilaterin with food preservatives against E. coli

Brevilaterin對沙門氏菌的聯(lián)合抑菌效應(yīng)結(jié)果(表5)顯示：brevilaterin分別與EDTA-Na2和磷酸三鈉聯(lián)用對沙門氏菌的FIC為0.1875和0.5，表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)；brevilaterin分別與檸檬酸和苯甲酸鈉聯(lián)用對沙門氏菌的FIC均為0.75，表現(xiàn)為部分協(xié)同效應(yīng)；brevilaterin與肉桂醛聯(lián)用FIC為1，表現(xiàn)為相加作用；brevilaterin與ε-聚賴氨酸、魚精蛋白、茶多酚、丁香酚、山梨酸鉀聯(lián)用的FIC均為2，表現(xiàn)為無關(guān)作用。上述研究表明brevilaterin與EDTA-Na2聯(lián)用對2種革蘭氏陰性菌食源性致病菌均呈現(xiàn)協(xié)同抑菌效應(yīng)，與檸檬酸聯(lián)用均呈現(xiàn)部分協(xié)同抑菌效應(yīng)，與磷酸三鈉聯(lián)用呈現(xiàn)部分協(xié)同抑菌效應(yīng)。由于EDTA-Na2是螯合劑，通常添加于食品中從發(fā)揮防止油脂氧化、果蔬褐變等作用[21]，因此可在添加有EDTA-Na2的食品中加入brevilaterin來發(fā)揮協(xié)同抑菌作用。陳歷水等[22]也發(fā)現(xiàn)EDTA-Na2可同其他防腐劑聯(lián)用對沙雷氏菌發(fā)揮協(xié)同抑菌作用。另外，磷酸三鈉常用于肉制品生產(chǎn)中以改善食品持水性等品質(zhì)[23]，因此可以考慮在添加有磷酸三鈉的食品體系中使用brevilaterin作防腐劑來提高食品的保藏性。檸檬酸常作為酸度調(diào)節(jié)劑用于飲料、濃縮果汁等食品的生產(chǎn)中[24]，因此在brevilaterin與檸檬酸復(fù)配在飲料和濃縮果汁等食品生產(chǎn)中具有較高的應(yīng)用潛力。林琳等[25]也發(fā)現(xiàn)檸檬酸鈉與桂皮提取物對食品中常見的革蘭氏陰性致病菌具有協(xié)同抑菌效果。

表5 Brevilaterin與食品防腐劑對鼠傷寒沙門氏菌聯(lián)合抑菌作用Table 5 Combined antibacterial effect of brevilaterin with food preservatives against S. typhimurium

2.3 Brevilaterin和食品防腐劑復(fù)配配方篩選

基于聯(lián)合抑菌效應(yīng)的研究結(jié)果：brevilaterin與nisin聯(lián)用對革蘭氏陽性菌具有部分協(xié)同作用，與檸檬酸、EDTA-Na2聯(lián)用對革蘭氏陰性菌具有協(xié)同抑菌效應(yīng)，但由于EDTA-Na2在食品中的應(yīng)用范圍較檸檬酸窄，因此最終選取brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)和檸檬酸(0.625 mg/mL)三者進行復(fù)配，以考察三者聯(lián)用對革蘭氏陽性菌和陰性菌的抑菌效果。結(jié)果(圖1)顯示brevilaterin、nisin和檸檬酸3者復(fù)配組合對沙門氏菌呈現(xiàn)抑制作用，對其他3株致病菌均呈現(xiàn)不同程度殺菌效應(yīng)。

圖1 Brevilaterin-nisin-檸檬酸復(fù)配對食源性致病菌的抑菌效果Fig.1 Brevilaterin-nisin-citrate against foodborne pathogenic bacteria

為了進一步驗證三者復(fù)配后的抑菌效果，進一步選取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌作為指示菌，考察三者對2株致病菌的時間殺菌曲線。brevilaterin、nisin和檸檬酸三者聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的時間殺菌曲線如圖2所示。

1-對照；●-brevilaterin(20 AU/mL)；▲-nisin(0.312 5 mg/mL)；▼-檸檬酸(0.625 mg/mL)；?-Brevilaterin(20 AU/mL)-nisin(0.312 5 mg/mL)；?-brevilaterin(20 AU/mL)-檸檬酸(0.625 mg/mL)；◆-nisin(0.312 5 mg/mL)-檸檬酸(0.625 mg/mL)；(Brevilaterin(20 AU/mL)-nisin(0.312 5 mg/mL)-檸檬酸(0.625 mg/mL)(下同)圖2 Brevilaterin-nisin-檸檬酸復(fù)配對金黃色葡萄球菌的時間殺菌曲線Fig.2 Time-kill curve for brevilaterin-nisin-citrate against S. aureus

結(jié)果顯示，單一添加檸檬酸(0.625 mg/mL)8 h后菌落數(shù)達到7.77 lg CFU/mL，之后隨著時間延長菌落數(shù)無顯著變化；單獨使用brevilaterin(20 AU/mL)和brevilaterin(20 AU/mL)-檸檬酸(0.625 mg/mL)復(fù)合聯(lián)用時，菌落數(shù)變化趨勢相同，2 h內(nèi)菌落數(shù)迅速降至3.64 lg CFU/mL和3.02 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持不變，此結(jié)果與試驗前期得到的brevilaterin-檸檬酸聯(lián)用對金黃色葡萄球菌沒有聯(lián)合抑菌效果結(jié)論一致；單獨使用nisin(0.312 5 mg/mL)菌落數(shù)在2 h內(nèi)降至4.76 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)不變；brevilaterin(20 AU/mL)與nisin(0.312 5 mg/mL)聯(lián)用組菌落數(shù)在2 h內(nèi)降至2.31 lg CFU/mL，比單獨使用nisin組菌落數(shù)降低了2.45 lg CFU/mL，比單獨使用brevilaterin菌落數(shù)降低1.33 lg CFU/mL，由此證明brevilaterin-nisin對金黃色葡萄球菌具有部分協(xié)同抑菌效果，與表2中結(jié)果一致；brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)和檸檬酸(0.625 mg/mL)聯(lián)用，2 h內(nèi)菌落數(shù)迅速降至2.14 lg CFU/mL，2～4 h菌落數(shù)降至1.65 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持不變。brevilaterin、nisin和檸檬酸三者聯(lián)用比單獨使用brevilaterin菌落數(shù)降低了1.99 lg CFU/mL，比單獨使用檸檬酸菌落數(shù)降低了6.12 lg CFU/mL，比單獨使用nisin菌落數(shù)降低了3.11 lg CFU/mL，比brevilaterin-檸檬酸聯(lián)用菌落數(shù)降低了1.37 lg CFU/mL，比brevilaterin-nisin聯(lián)用菌落數(shù)降低了0.66 lg CFU/mL。Brevilaterin、nisin和檸檬酸上述結(jié)果驗證了三者聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的協(xié)同抑菌效應(yīng)。

進一步考察了brevilaterin、nisin、檸檬酸三者對大腸桿菌的時間殺菌曲線，結(jié)果(圖3)顯示單獨使用brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)，8 h后菌落數(shù)分別增至8.40 lg CFU/mL和8.42 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持相對穩(wěn)定；單獨使用檸檬酸(0.625 mg/mL)，6 h后菌落數(shù)增至8.29 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持不變；brevilaterin(20 AU/mL)和nisin(0.312 5 mg/mL)聯(lián)用，8 h后菌落數(shù)增至8.29 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持相對穩(wěn)定；brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)、檸檬酸(0.625 mg/mL)三者單獨使用與brevilaterin(20 AU/mL)和nisin(0.312 5 mg/mL)兩者組合的最終菌落數(shù)均與對照組菌落數(shù)一致，表明不能有效控制大腸桿菌生長。

圖3 Brevilaterin-nisin-檸檬酸復(fù)配對大腸桿菌的時間-殺菌曲線Fig.3 Time-kill curve for brevilaterin-nisin-citrate against E. coli

Brevilaterin-檸檬酸聯(lián)用，0～12 h菌落數(shù)增至8.00 lg CFU/mL，最終菌落數(shù)與空白組比菌落數(shù)降低0.66 lg CFU/mL,證實了brevilaterin-nisin聯(lián)用對大腸桿菌沒有協(xié)同抑菌效果，brevilaterin-檸檬酸對大腸桿菌有協(xié)同抑菌效果，但是菌落數(shù)降低幅度較小。nisin-檸檬酸聯(lián)用，8 h后菌落數(shù)增至7.08 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持穩(wěn)定，比空白對照組菌落數(shù)降低了1.59 lg CFU/mL。brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)、檸檬酸(0.625 mg/mL)3者聯(lián)用，0～2 h菌落數(shù)迅速降至4.52 lg CFU/mL，2～6 h菌落數(shù)增至5.63 lg CFU/mL，之后菌落數(shù)保持相對穩(wěn)定，與空白對照組相比菌落數(shù)降低了3.04 lg CFU/mL。所以，brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)和檸檬酸(0.625 mg/mL)3者聯(lián)用對大腸桿菌有協(xié)同抑菌效果，可有效降低抗菌肽添加量。

3 結(jié)論

本研究全面評價了brevilaterin與化學(xué)防腐劑和生物防腐劑的聯(lián)用抑菌效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)brevilaterin分別與ε-聚賴氨酸、nisin聯(lián)用對革蘭氏陽性菌具有協(xié)同抑菌效應(yīng)，分別與EDTA-Na2、Na3PO4和檸檬酸聯(lián)用對革蘭氏陰性菌具有協(xié)同或部分協(xié)同效應(yīng)。brevilaterin(20 AU/mL)、nisin(0.312 5 mg/mL)、檸檬酸(0.625 mg/mL)三者聯(lián)用對革蘭氏陽性菌和陰性菌均可實現(xiàn)抑菌作用，而brevilaterin的添加劑量僅為原來MIC的1/8，表明通過對協(xié)同抑菌物質(zhì)的復(fù)配有效地降低了brevilaterin使用劑量，且所開發(fā)的抑菌配方對食源性致病菌具有廣譜抑菌活性。