于芳

（新疆獸藥飼料監(jiān)察所 830063）

1 試驗材料

1.1 樣品選取

本次試驗中選取的黃鱔樣品來源于當?shù)靥K果超市，經(jīng)過12d 的人工養(yǎng)殖，在養(yǎng)殖期間只投喂蚯蚓等飼料，養(yǎng)殖采用的水源經(jīng)過陽光暴曬清除內(nèi)部氯氣，經(jīng)過12d 后取出，將可以食用的部分肌肉粉碎，放入-20℃的冰箱中冷藏。

1.2 試劑制備

本次試驗使用的對照品中氯霉素為K0350706，濃度為99.5%；甲砜霉素為K0241009，濃度為99.7%；氟苯尼考為C13665000，濃度為99.0%；在本次試驗標準品中，d3-甲砜霉素為T344163，劑量為1mg；d3-氟苯尼考型號為F405751，劑量為1mg；標準液d5-氯霉素XA111200AC，劑量為100μg/ml；乙腈與甲醇均為色譜純；無水硫酸鈉為分析純；氯霉素類藥物的儲備液均稱取適量的氯霉素、氟苯尼考與甲砜霉素混合，經(jīng)過甲醇溶解定容后配制出100μg/ml 的儲備液，放置在-20℃下存儲；氯霉素工作液的制備：采用100μg/ml 的氯霉素藥物標準液，經(jīng)過甲醇稀釋后配制成標準工作液，放置在4℃溫度下存儲[1]。

1.3 儀器

本次試驗主要采用高速冷凍離心機、超聲波清洗器、渦旋混合儀、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀、氮吹機。

2 試驗方法

2.1 液相條件

色譜柱采用尺寸為2.1mm×50mm，直徑為1.7，型號為C18 柱；流速為0.4ml/min；柱體溫度控制在40℃左右；進樣量為10μL；其流動相條件如下：當時間為0 時，水含量為83%，乙腈含量為17%；當時間為3.0min 時，水含量為17%，乙腈含量為83%；當時間為4.0 時，水含量為17%，乙腈含量為83%；當時間為4.1 時，水含量為83%，乙腈含量為17%；當時間為5.0 時，水含量為83%，乙腈含量為17%。

2.2 質(zhì)譜條件

離子源采用電噴霧類型；毛細管電壓為2500V；監(jiān)測模式采用多反應、負離子模式；錐孔電壓為40V；離子源的溫度在500℃左右，對不同分析物的錐孔電壓、駐留時間、碰撞能量與離子對指標進行分析，結(jié)果如下：對氯霉素分析時母離子為321m/z、子離子為152m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為18eV、錐孔電壓為40V；對甲砜霉素進行分析時，母離子為354m/z、子離子為185m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為23eV、錐孔電壓為40V；對氟苯尼考分析時，母離子為356m/z、子離子為336m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為9eV、錐孔電壓為40V；對d3 甲砜霉素分析時，母離子為357m/z、子離子為188m/z、駐留時間為0.034s、碰撞能量為22eV、錐孔電壓為40V。

2.3 穩(wěn)定性

檢測儲備液時，取100μg/ml 氯霉素儲備液，放置在-20℃下存儲，分別存儲0、3、6 月去除，將其稀釋為濃度較低的工作液，即20μg/ml，將劑量為100μL 的內(nèi)標工作液混合后進行監(jiān)測，6 個月后檢驗其穩(wěn)定性。

2.4 檢測限與定量限

分別將3 種藥劑添加到空白餌料中，每個濃度重復5 次；檢測限為3 倍信噪比濃度；定量限為10 倍信噪比濃度[2]。

2.5 回收率與精密度

將高、中、低3 個濃度的混合溶液加入空白餌料中，通過加標回收試驗的方式，每個濃度采用5 個相同的樣品，連續(xù)測定3d，對回收率與精密度進行計算。

3 試驗結(jié)果

3.1 穩(wěn)定性

將氯霉素藥物儲備液分別放置0 月、3 月與6 月去除，從試驗數(shù)據(jù)可知，該藥物在-20℃環(huán)境下較為穩(wěn)定，相對標準偏差RSD 數(shù)值低于20%。由此可見，此類藥物在此溫度下至少可存儲6 個月。通過凍融穩(wěn)定性試驗可知，經(jīng)反復凍融后，濃度穩(wěn)定性較強，精密度RSD 的數(shù)值不超過15%，可見該樣品可以冷凍存儲，且不會對檢測結(jié)果產(chǎn)生不良影響。

3.2 檢測限與定量限

通過檢測結(jié)果可知，甲砜霉素、氯霉素與氟苯尼考在黃鱔中的檢測限為0.1μg/ml，定量限為0.3μg/ml。其中氯霉素檢測限與歐盟標準相比較低，另外兩種與規(guī)定相比均低于百倍以上，滿足藥物殘留靈敏度的要求。

3.3 精密度與回收率

試驗結(jié)果表明，黃鱔中氯霉素為0.3、0.45、0.6μg/kg 時，回收率為92.89%～111.26%；氟苯尼考的添加量為50、100、150μg/kg 時，回收率為86.76%～107.30%；甲砜霉素的添加量在25、50、75μg/kg 時，回收率為96.21%～104.14%。從整體來看，上述3 種藥物的回收率均值處于86.76%～111.26%，日精密度在2.16%～13.66%。

4 結(jié)語

綜上所述，UPLC-MS/MS 法的應用無需使用較多樣品與溶劑，且步驟較為簡便，檢測周期較短，色譜與質(zhì)譜中分離能力、離子化特性較為相似，可有效降低基質(zhì)效應的影響，可見UPLC-MS/MS 法具有較強的可靠性。