王小莉

[摘要] 目的 探討細(xì)胞塊石蠟包埋切片和細(xì)胞涂片在良、惡性胸腹腔積液鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值，探尋提升腫瘤診斷水平的制片方式。 方法 選取2018年5月～2020年5月在我院就診的胸腹腔積液患者110例為研究對(duì)象，采集其胸腹腔積液標(biāo)本，制備石蠟包埋切片及細(xì)胞涂片，采取雙盲法閱片，比較兩種診斷方式在惡性胸腹腔積液診斷中的陽性率。 結(jié)果 病理學(xué)診斷結(jié)果提示，70例胸腔積液的標(biāo)本中，惡性胸腔積液39例，良性胸腔積液31例;40例腹腔積液標(biāo)本中，惡性腹腔積液27例，良性腹腔積液13例。細(xì)胞塊石蠟包埋切片在惡性胸腔積液診斷中的陽性率為79.49%，明顯高于細(xì)胞涂片的58.97%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;細(xì)胞塊石蠟包埋切片在惡性腹腔積液診斷中的陽性率為81.48%，明顯高于細(xì)胞涂片的62.96%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;細(xì)胞塊石蠟包埋切片在惡性胸腹腔積液診斷中的準(zhǔn)確度、靈敏度及特異度均高于細(xì)胞涂片，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;兩種診斷方式的組織學(xué)分型中均以腺癌發(fā)生率最高，分別為81.13%、75.00%。 結(jié)論 細(xì)胞塊石蠟包埋切片在良、惡性胸腹腔積液診斷中的應(yīng)用價(jià)值高，與細(xì)胞涂片相比，具有更高的陽性率，且靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度均較高，是細(xì)胞學(xué)診斷和鑒別良、惡性胸腹腔積液較好的制片方式。

[關(guān)鍵詞] 胸腹腔積液;良、惡性鑒別;細(xì)胞塊石蠟包埋切片;細(xì)胞涂片

[中圖分類號(hào)] R561 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-9701（2020）31-0134-04

[Abstract] Objective To investigate the application value of paraffin-embedded section of cell block and cell smear in the diagnosis and differentiation of benign and malignant pleural and peritoneal effusion and investigate the section making method to improve the diagnostic level of tumor. Methods A total of 110 patients with pleural and peritoneal effusion admitted to our hospital from May 2018 to May 2020 were selected as the research objects， and samples of pleural and peritoneal effusion and peritoneal effusion were collected， paraffin embedded sections and cell smears were prepared， which were read by double-blind method， and the positive rates of the two diagnostic methods in the diagnosis of malignant pleural and peritoneal effusion were compared. Results Pathological diagnosis showed that among 70 samples of pleural effusion， there were 39 cases of malignant pleural effusion and 31 cases of benign pleural effusion. Among 40 samples of peritoneal effusion， there were 27 cases of malignant peritoneal effusion and 13 cases of benign peritoneal effusion. The positive rate of paraffin section of cell block in the diagnosis of malignant pleural effusion was 79.49%， which was significantly higher than 58.97% of cell smear， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The positive rate of paraffin section of cell block in the diagnosis of peritoneal effusion was 81.48%， which was significantly higher than 62.96% of cell smear， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The accuracy， sensitivity and specificity of paraffin section in the diagnoses of malignant pleural and peritoneal effusion were higher than those of cell smear， and the differences were statistically significant（P<0.05）. The incidence of adenocarcinoma was the highest in the histological classification of the two diagnostic methods， which were 81.13% and 75.00%， respectively. Conclusion The paraffin embedded section of cell block has high application value in the diagnosis of benign and malignant pleural and peritoneal effusion. Compared with cell smear， it has higher positive rate， and high sensitivity， specificity and accuracy. Meanwhile， it is a better section making method for cytological diagnosis and differentiation of benign and malignant pleural and peritoneal effusion.

[Key words] Pleural and peritoneal effusion; Differentiation of benign and malignant; Paraffin section of cell block; Cell smear

人體正常狀態(tài)下，腹腔內(nèi)通常有少量液體（<200 mL），對(duì)腸道起潤(rùn)滑作用，一旦人體出現(xiàn)病理改變，導(dǎo)致腹腔內(nèi)液體量增加至200 mL以上，就稱之為腹腔積液;同理，在病理狀態(tài)下，如人體胸膜腔內(nèi)液體超過正常范圍，就稱之為胸腔積液[1]。胸腹腔積液是臨床常見的癥狀、體征，多種疾病均可產(chǎn)生胸腹腔積液。在臨床實(shí)踐中，一些腫瘤和炎癥都可導(dǎo)致胸腹腔積液，胸腹腔積液也可能是惡性腫瘤的警報(bào)，對(duì)胸腹腔積液的良、惡性鑒別對(duì)早期發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤具有重要意義[2]。細(xì)胞學(xué)診斷是臨床鑒別良、惡性胸腹腔積液的常用方式，細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)對(duì)細(xì)胞學(xué)診斷的陽性檢出率有重要影響，本研究以我院收治的胸腹腔積液患者為研究對(duì)象，對(duì)其積液標(biāo)本分別采取細(xì)胞塊石蠟包埋切片與細(xì)胞涂片法進(jìn)行制片，觀察兩種制片方式在良、惡性胸腔積液診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2018年5月～2020年5月在我院就診的胸腹腔積液患者110例為研究對(duì)象，其中男58例，女52例;年齡38～76歲，平均（58.32±7.98）歲;胸腔積液70例，腹腔積液40例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①對(duì)本研究知情同意。②具有獨(dú)立清醒意識(shí)，治療依從性強(qiáng)，能配合研究。③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。②合并語言功能或認(rèn)知功能障礙。③合并全身感染性疾病。④合并心腦血管疾病及重要臟器嚴(yán)重器質(zhì)性損害。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

患者行B超檢查，確定積液位置，在超聲引導(dǎo)下根據(jù)積液位置進(jìn)行穿刺獲取檢測(cè)標(biāo)本，采集完成后立即送檢。細(xì)胞涂片的制備：首先進(jìn)行標(biāo)本預(yù)處理，將送檢標(biāo)本在室溫環(huán)境下靜置150 min，廢棄上層液體，剩余約100 mL標(biāo)本，震蕩試管將底部沉淀物混合后，分別倒入2個(gè)50 mL離心管中，離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)為2500 r/min，離心3～5 min，棄去上清液后保留離心管中的沉淀物。將其中1管沉淀物中間細(xì)胞進(jìn)行涂片，使用95%乙醇固定細(xì)胞以保持細(xì)胞形態(tài)，防止其溶解和腐敗，同時(shí)方便后續(xù)染色，固定時(shí)間15 min以上[3-4]。細(xì)胞涂片固定后進(jìn)行巴氏染色，具體方法：①水化：將固定好的涂片置于蒸餾水中進(jìn)行水洗，使細(xì)胞充分水化，方便著色，共水洗兩次，2 min/次。②核染：將涂片放置在蘇木精液中，觀察到涂片上細(xì)胞成分出現(xiàn)明顯著色后，采用流動(dòng)水對(duì)涂片進(jìn)行1 min持續(xù)沖洗，涂片核染過程通常需要3～5 min。③分色：將涂片放置在鹽酸酒精中1～5 s，然后以流水沖洗涂片，以去除核染殘留的染液，方便后續(xù)操作。④藍(lán)化：將涂片浸泡在鉻酸鋰溶液中，直至涂片反藍(lán)后取出。⑤脫水：首先用70%乙醇浸泡涂片，持續(xù)3 min，取出后置入95%乙醇中繼續(xù)浸泡3 min。⑥漿染：涂片放置于早橘黃G6中，持續(xù)10 s，采用95%乙醇快速?zèng)_洗涂片3次，將多余染液去除，然后再置入AE50中1～2 min，取出涂片，再放置于95%乙醇中，連續(xù)放置2次，每次持續(xù)1～2 min。⑦脫水：將涂片浸泡于無水乙醇中2 min進(jìn)行脫水，連續(xù)浸泡2次。⑧透明：將涂片在二甲苯中浸泡2 min，連續(xù)浸泡2次。⑨封片：使用中性樹脂對(duì)細(xì)胞涂片進(jìn)行封固[5-8]。

細(xì)胞塊石蠟包埋切片制備：①首先對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理法同細(xì)胞涂片，對(duì)于血性胸腹水，應(yīng)當(dāng)離心棄去上清液后，采用50%乙醇進(jìn)行再處理后使用。②取材：取其中一管沉淀物進(jìn)行震蕩，使其與離心管分離，采用無菌吸管吸取沉淀物，使用兩層擦鏡紙對(duì)沉淀物進(jìn)行包裹后，置入脫水盒。③固定：將標(biāo)本放置在10%福爾馬林中進(jìn)行浸泡，持續(xù)3～4 h，以保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常、硬度適當(dāng)。④脫水：采用梯度酒精脫水法，將細(xì)胞塊依次置入濃度為50%、70%、80%、90%的酒精中進(jìn)行逐級(jí)脫水，各2 h，然后分2次置入100%酒精中脫水，每次1.5 h，使細(xì)胞中的水分完全去除，利于透明劑浸入。⑤透明：將細(xì)胞塊置入1∶1的100%酒精+二甲苯中20 min，取出后浸入二甲苯15 min，取出再次浸入二甲苯15 min。⑥浸蠟：首先將細(xì)胞塊置入1∶1的二甲苯+石蠟混合溶液中浸泡30 min，然后放入純石蠟中浸泡，共浸泡2次，2 h/次，此過程需在54～56℃條件下進(jìn)行。⑦包埋與切片：完成浸蠟后將細(xì)胞塊封存在小蠟塊中，包埋之后的細(xì)胞塊能夠進(jìn)行反復(fù)切片和長(zhǎng)期保存[9]。⑧HE染色：將石蠟包埋切片放入二甲苯2次（20 min/次）、無水乙醇2次（5 min/次）、80%乙醇5 min、蒸餾水5 min進(jìn)行脫蠟和水化，然后將水化的切片放入蘇木精液5 min進(jìn)行核染，取出后流水沖洗4 s、鹽酸乙醇2 s，流水沖洗11～15 min，蒸餾水浸泡2 s;使用0.5%伊紅液中進(jìn)行漿染，使用蒸餾水快速?zèng)_洗2～3 s。漿染后的切片放入濃度為80%、95%的乙醇中進(jìn)行脫水，完成后使用無水乙醇浸泡切片2次，5～15 min/次。脫水后使用二甲苯和中性樹膠完成透明和封片[10-12]。

制片完成后，由兩名細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行同時(shí)閱片，取一致意見為診斷結(jié)果。

1.3觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

以《漿膜腔積液細(xì)胞病理學(xué)》為診斷依據(jù)進(jìn)行細(xì)胞病理診斷，采取3級(jí)分類法制作診斷報(bào)告：Ⅰ級(jí)：未發(fā)現(xiàn)惡性細(xì)胞，判定為良性胸腹腔積液;Ⅱ級(jí)：發(fā)現(xiàn)有可疑的惡性細(xì)胞，細(xì)胞具備部分惡性細(xì)胞的特征，但尚缺乏有診斷意義的細(xì)胞，疑似是惡性細(xì)胞，判定為良性胸腹腔積液;Ⅲ級(jí)：發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，包括鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、大細(xì)胞未分化癌、小細(xì)胞未分化癌、腺鱗癌等類型，診斷為惡性胸腹腔積液。根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、粘附性及不典型性進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：陰性，細(xì)胞彌散分布、形態(tài)溫和、無不典型性;陽性，細(xì)胞成團(tuán)分布，形態(tài)及細(xì)胞核表現(xiàn)為重度不典型性[13]。靈敏度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%;特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%;準(zhǔn)確度=（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)診斷結(jié)果

病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，70例胸腔積液標(biāo)本中，惡性胸腔積液39例，良性胸腔積液31例;40例腹腔積液標(biāo)本中，惡性腹腔積液27例，良性腹腔積液13例。

2.2兩種診斷方式在惡性胸腔積液診斷中的陽性率比較

細(xì)胞塊石蠟包埋切片在惡性胸腔積液診斷中的陽性率為79.49%（31/39），明顯高于細(xì)胞涂片的58.97%（23/39），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.920，P<0.05）。見表1。

2.3兩種診斷方式在惡性腹腔積液診斷中的陽性率比較

細(xì)胞塊石蠟包埋切片在腹腔積液診斷中的陽性率為81.48%（22/27），明顯高于細(xì)胞涂片的62.96%（17/27），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.069，P<0.05）。見表2。

2.4兩種診斷方式在惡性胸腹腔積液中的診斷價(jià)值比較

細(xì)胞塊石蠟包埋切片在惡性胸腹腔積液診斷中的準(zhǔn)確度、靈敏度及特異度均高于細(xì)胞涂片，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.5兩種診斷方式的細(xì)胞病理學(xué)診斷組織學(xué)分型比較

兩種診斷方式的組織學(xué)分型中均以腺癌發(fā)生率為最高。見表4。

3討論

胸腹腔積液是一種常見的臨床表現(xiàn)，產(chǎn)生胸腹腔積液的原因眾多，常見原因包括結(jié)核菌感染、肝臟疾病、腹膜疾病、營(yíng)養(yǎng)障礙、締結(jié)組織疾病、惡性腫瘤轉(zhuǎn)移等疾病[14]。相關(guān)研究指出，惡性胸腹腔積液是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的主要表現(xiàn)，胸腹腔積液中的細(xì)胞成分頗為復(fù)雜，良性積液中可見淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、間皮細(xì)胞與嗜酸性細(xì)胞等，惡性積液中可見鱗癌細(xì)胞、腺癌細(xì)胞、惡性淋巴瘤細(xì)胞等，對(duì)胸腹腔積液的良、惡性進(jìn)行鑒別是診斷腫瘤疾病的重要方式[15]。

惡性胸腹腔積液是腫瘤患者的重要臨床體征，惡性胸腹積液產(chǎn)生的機(jī)制一般包括：①淋巴系統(tǒng)引流障礙：如果腫瘤細(xì)胞阻塞胸腹膜表面淋巴管，可破壞其正常循環(huán)，導(dǎo)致體液吸收障礙，積聚后成為胸腹腔積液[16]。②腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移：當(dāng)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到胸腹膜時(shí)，可對(duì)毛細(xì)血管產(chǎn)生損害，導(dǎo)致血液或體液從血管中滲出，此種情況引起的積液通常為血性積液。③胸腹膜滲透性增加：腫瘤細(xì)胞侵襲胸腹膜后，可引起局部炎癥反應(yīng)，增高毛細(xì)血管滲透性，增加體液滲出。細(xì)胞病理學(xué)診斷在良、惡性胸腹腔積液中的診斷歷史可以追溯到19世紀(jì)末，至今在胸腹腔積液細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的診斷方式已成為惡性積液診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[17-19]。

細(xì)胞學(xué)診斷的高準(zhǔn)確率有賴于細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量，細(xì)胞涂片法是臨床用于胸腹腔積液細(xì)胞檢查診斷的經(jīng)典制片方式，該方式操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少，且制作成本不高，因此在臨床得到廣泛開展，但由于該種制片方式受各種主客觀因素的影響較大，容易出現(xiàn)誤診、漏診[20]。石蠟包埋切片技術(shù)要點(diǎn)在于取材后將標(biāo)本采取甲醛固定液進(jìn)行固定，制成組織塊后再進(jìn)行包埋、切片與染色，細(xì)胞塊石蠟包埋切片收集的細(xì)胞成分更多，且受胸腹水易凝塊影響小，細(xì)胞成分集中，因此在較大程度上能夠縮短閱片時(shí)間[21]。

本研究結(jié)果顯示，細(xì)胞塊石蠟包埋切片法在惡性胸腹腔積液診斷中的陽性率明顯高于細(xì)胞涂片，且其診斷符合率、靈敏度及特異度均高于細(xì)胞涂片，此外，石蠟包埋切片法在顯微鏡下能夠觀察組織結(jié)構(gòu)，例如腺細(xì)胞呈腺腔樣排列，因此更加利于組織學(xué)的分型。

綜上所述，細(xì)胞塊石蠟包埋切片在鑒別良、惡性胸腹腔積液中的應(yīng)用價(jià)值高，檢出率高于細(xì)胞涂片，且更利于組織學(xué)分型，其作為細(xì)胞病理學(xué)診斷鑒別胸腹腔積液良、惡性較好的制片方式，值得推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2020-06-23）