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        一例抗-G抗體引起交叉配血不合原因分析

        2020-01-09 11:35:53劉鑫路吳運萍
        黑龍江醫(yī)藥 2020年9期
        關(guān)鍵詞:血清

        劉鑫路,周 秀,吳運萍

        1.連云港市第二人民醫(yī)院輸血科,江蘇 連云港 222002;2.天津市武警醫(yī)療中心輸血科,天津 300000

        抗-G抗體通常只與帶有D或/和C抗原紅細胞反應(yīng),也被稱為抗-DC,抗-G常伴隨抗-D出現(xiàn)?;純撼錾延?7天,血清中抗-G抗體已減弱,最開始只檢出抗-D抗體,選用ABO同型RhD陰性血進行交叉配血時,主側(cè)發(fā)生凝集反應(yīng)考慮還存在其他同種抗體,分別用PEG增強方法、酶處理試劑紅細胞方法后檢出抗-D抗體和抗-C抗體,經(jīng)用兩次吸收方法鑒定為抗-D合并抗-G,報告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        患者為新生兒,女,27天,末次輸血時間2019年11月15日,Hb:125g/L,為糾正貧血,申請輸血。

        1.2 儀器與試劑

        抗-A,抗-B,抗-D(IgM),抗-D(IgG),抗-C,抗-c,抗-E,抗-e(批 號: 20171227, 20181810,20183001,20180626,20183101,20183201,20183301);抗球蛋白(IgG、C3d)試劑(批號:20185001);ABO細胞及篩選細胞(批號:20195326,20197031);聚凝胺試劑(批號:20197502);均由上海市血液生物醫(yī)藥有限責任公司提供。酸釋放劑(批號:20180423)由上海申型醫(yī)學科技有限公司提供。抗-D(IgM+IgG)(批號:8000249683);進口譜細胞(批號:8000260167)來自荷蘭sanquin公司??谷饲虻鞍卓ǎㄅ枺?0531.38.18)購自DiaMed公司。

        1.3 方法

        1.3.1 血型鑒定:采用鹽水法按照文獻[1]操作。

        1.3.2 不規(guī)則抗體篩查及鑒定:抗體篩查采用鹽水法、聚凝胺法、抗人球蛋白法(凝膠卡)按生產(chǎn)廠家使用說明書進行操作和判讀,設(shè)置自身對照,根據(jù)與進口譜紅細胞的反應(yīng)格局判定抗體特異性。

        1.3.3 抗體效價檢測:根據(jù)血清稀釋度標記10支試管(如1,2,4等)。1代表1體積未稀釋血清,2代表1體積血清被稀釋至2體積。除第1管,其余每支試管中加50 ul生理鹽水。前兩管(1和2)中,各加50 ul待檢血清,用移液槍頭吹吸、混勻2中的液體數(shù)次,轉(zhuǎn)移50 ul至下一支試管,重復(fù)相同的步驟,直至完成所有倍比稀釋。每管加50 ul,2%~3%紅細胞懸液,充分混勻,37℃孵育30 min,以1 000離心15 s觀察記錄結(jié)果。

        1.3.4 PEG增強方法做抗體鑒定:依據(jù)進口譜細胞的數(shù)量取16只潔凈試管,分別標記序號,另取一支潔凈試管記為自身對照。加2滴待檢血清,4滴20%PEG,加入1滴2%~5%的紅細胞懸液。37℃孵育15 min。用生理鹽水洗滌紅細胞3次,棄上清液。加入2滴抗人球蛋白1 g G試劑(具體請參照說明書)混勻,1 000 g離心15 s后觀察結(jié)果。

        1.3.5 酶處理試劑紅細胞方法做抗體鑒定:將木瓜酶稀釋液轉(zhuǎn)移至粉劑瓶中,充分溶解后,按日常工作量用潔凈試管分裝成數(shù)個小包裝,置-20℃凍存。每次可用1個小包裝,當天剩余液體應(yīng)棄去(酶的實際用量和孵育時間遵照試劑說明書)。取1體積進口譜細胞和自身細胞,用生理鹽水洗滌3遍,最后遍棄去上清液,留紅細胞沉淀;輕輕搖散紅細胞沉淀,加入1體積步驟一配制的酶液。經(jīng)37℃孵育15 min。用大量生理鹽水洗滌酶處理過的紅細胞3次,然后制成2%~3%的紅細胞生理鹽水懸液。取17支潔凈試管分別做好標記。每支試管中加入2滴患者血清(或血漿)。分別于對應(yīng)試管加入1滴對應(yīng)的酶處理過的2%~5%的進口譜細胞和自身紅細胞,混勻。經(jīng)37℃,孵育1 min。經(jīng)1 000 g離心15 s,觀察有無凝集和溶血,記錄結(jié)果。如有凝集反應(yīng)則為陽性結(jié)果,不必進行以下程序。如未觀察到凝集反應(yīng),應(yīng)繼續(xù)進行以下程序。用生理鹽水洗滌4遍,最后一遍徹底棄去上清液。加入抗人球蛋白試劑(劑量參照試劑說明書),混勻。經(jīng)1 000 g離心15 s,觀察反應(yīng)結(jié)果。如為陰性反應(yīng),則加IgG致敏的紅細胞進行驗證。

        1.3.6 吸收放散試驗及抗體效價測定:吸收實驗操作按照文獻[2]操作。酸放散試驗按照生產(chǎn)廠家使用說明書進行操作,放散液與標準紅細胞作用離心后觀察結(jié)果。

        1.3.7 直接抗人球蛋白實驗:按照文獻[3]直接Coombs’實驗試管法標準操作規(guī)程操作。

        2 結(jié)果

        2.1 ABO和Rh血型

        患兒血型為O型,Rh陰性,經(jīng)Rh血型確認試驗后仍為陰性。紅細胞直接抗人球蛋白試驗陰性,血清抗體篩查試驗陽性,Rh血型其他因子為抗-c和抗-e陽性,因此Rh表型為dce/dce。

        2.2 譜細胞反應(yīng)格局

        為明確血清中的不規(guī)則抗體,應(yīng)用16只一組的進口譜細胞對抗體進行鑒定,初步分析血清中含有抗-C+D抗體,效價為32。

        2.3 直抗結(jié)果

        患兒直接抗人球蛋白實驗陰性。

        2.4 交叉配血結(jié)果

        選擇三例O型dCe/dCe獻血者和三例dce/dce獻血者紅細胞與患者的血清進行交叉配血主側(cè)反應(yīng),結(jié)果顯示該患者血清能凝集dCe/dCe獻血者的紅細胞,而與dce/dce獻血者紅細胞沒有凝集,說明該患者含有抗-C抗體。我們選用O型Rh分型dce/dce獻血者紅細胞0.5單位治療,效果良好。

        2.5 抗-G抗體鑒定

        患兒父親Rh分型為DcE/dce,患兒母親血清(O型Rh分型dce/dce)與患兒血型分型一致,患兒母親正常分娩不能產(chǎn)生抗-C抗體。故患兒血清可能存在抗-G抗體而不是抗-C抗體。我們用血清分別Dce/Dce和dCe/dCe壓積紅細胞做吸收試驗,結(jié)果用和Dce/Dce壓積紅細胞吸收后的血清不能與dCe/dCe及Dce/Dce紅細胞發(fā)生凝集。再將用和Dce/Dce壓積紅細胞進行酸放散試驗,放散液仍可以和dCe/dCe及Dce/Dce紅細胞發(fā)生凝集。說明血清中不含有單獨的抗-C抗體。結(jié)果用和dCe/dCe和dCe/dCe紅細胞吸收后的血清不能與dCe/dCe紅細胞發(fā)生凝集,但仍能與Dce/Dce紅細胞發(fā)生凝集。再將用和dCe/dCe和dCe/dCe壓積紅細胞進行酸放散試驗,放散液仍可以和dCe/dCe及Dce/Dce紅細胞發(fā)生凝集。說明血清中含有單獨的抗-D抗體。因此可以證實患兒血清中為-D+G抗體[4]。

        3 結(jié)論

        一般情況下,抗-G只與帶有D或/和C抗原的紅細胞反應(yīng),RHD和RHCE的C等位基因所編碼的Ser103是G活性的關(guān)鍵,一般帶有D和/或C紅細胞均為G陽性[5]。抗-G可以應(yīng)用rG/dce或r/G/dce細胞經(jīng)吸收/放散實驗分離出來,但這類紅細胞非常少見和難以得到[6]。本例患兒我們采用Dce/Dce和dCe/dCe壓積紅細胞進行兩次吸收放散,確定患兒血清中的抗體為-D+G抗體。本例患兒母親之前既有輸血史又有妊娠史,而妊娠和輸血的同種免疫是Rh同種抗體產(chǎn)生的主要原因。本例患兒母親產(chǎn)生-D+G抗體與輸血史及妊娠史有關(guān)。在妊娠期間由于反復(fù)的“經(jīng)胎盤出血”,胎兒紅細胞進入母體,刺激母體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒紅細胞不配合的IgG性質(zhì)的血型抗體,這些抗體可通過胎盤屏障回到胎兒體內(nèi),最終導致胎兒紅細胞溶血被破壞。若是受血者或者是孕婦血漿中存在Rh抗體,當與含相應(yīng)抗原的血液相遇后,便會導致嚴重的輸血反應(yīng)或者新生兒溶血病的發(fā)生。由于本例患兒ABO血型及Rh分型與母親相同,母親體內(nèi)Rh血型抗體雖然通過胎盤屏障回到胎兒體內(nèi)但并不會導致新生兒溶血的發(fā)生。因此患兒貧血可能由于其他疾病原因造成的。由于患兒血清中含有Rh血型抗體,在輸血時要選擇不含對應(yīng)抗原的紅細胞進行輸注。如果只輸注RhD陰性血,仍有可能因為抗原抗體相遇后會造成溶血反應(yīng),影響輸血效果。從免疫血液學角度看,Rh血型系統(tǒng)最主要的5個抗原中,免疫原性強弱順序依次為D,E,C,c,e,這5種抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合均能引起嚴重的血液免疫學反應(yīng),如溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病(HDN)和自身免疫性溶血性貧血等。如今人們對于RhD抗原的認識已較充分,其余抗原則重視程度不高。在RhD抗原陰性患者,多次妊娠育齡期婦女,需要多次輸血治療的患者要常規(guī)檢測RhC、Rhc、RhE、Rhe抗原,進行Rh血型系統(tǒng)分型,進行ABO血型系統(tǒng)與Rh血型系統(tǒng)同型輸注,減少因Rh血型系統(tǒng)不同型輸注引起的Rh血型系統(tǒng)抗體的產(chǎn)生率,減少由于回憶性免疫應(yīng)答引起的遲發(fā)性溶血反應(yīng);避免臨床輸血中由于Rh血型系統(tǒng)抗體產(chǎn)生引起的交叉配血不合貽誤搶救輸血時機,及時挽救患者生命。因此在臨床單獨常規(guī)檢測Rh血型系統(tǒng)RhD抗原是不能滿足臨床合理安全輸血要求的。而對Rh主要的五個抗原常規(guī)進行檢測,并給與Rh分型進行同型血液輸注,可有效避免因輸血而產(chǎn)生Rh同種抗體,減少輸血風險,這也是未來精準輸血的要求。

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