張曉峰，崔玉寶，何 勇，韓菲菲※

(南京醫(yī)科大學附屬無錫人民醫(yī)院 a.醫(yī)學檢驗科，b.兒童呼吸科，江蘇 無錫 214023)

嬰幼兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育尚不完善，易發(fā)生肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae，MP)感染。我國流行病學調(diào)查顯示，兒童呼吸科門診患兒MP的感染率達16.1%～30.9%[1-3]。肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)是兒科的常見疾病，全年均可發(fā)病，冬春季節(jié)的發(fā)病率較高[4]。MPP通常起病較急，早期出現(xiàn)發(fā)熱、呼吸異常、咳嗽、頭痛、咽痛等非特異性癥狀，診斷難度較大，病情嚴重者可導致多臟器功能損傷，威脅患兒生命安全[5]。因此，早期診斷和治療是改善MPP患兒預后的關鍵。目前，MPP病因較復雜，發(fā)病機制尚不明確[6]。本研究旨在探討MPP與小兒免疫功能的關聯(lián)以及MP感染對小兒免疫功能指標的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年6月至2019年3月在南京醫(yī)科大學附屬無錫人民醫(yī)院兒童住院部就診的172例MPP患兒作為研究對象，其中男93例、女79例，年齡8～36個月，平均(22.8±5.6)個月。所有患兒入院后均進行肺炎特異性抗體檢測以及肺部X線、CT等檢查，根據(jù)入院時患兒一般狀況、體溫、精神狀態(tài)、呼吸進食情況及相關輔助檢查結(jié)果將患兒分為輕癥組105例，男57例、女48例，年齡8～35個月，平均(21.6±5.3)個月；重癥組67例，男36例、女31例，年齡9～36個月，平均(23.2±6.2)個月。同期選取性別、年齡相匹配的63名健康體檢者為對照組，男35名、女28名，年齡8～37個月，平均(23.1±5.5)個月。各組受試者性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學附屬無錫人民醫(yī)院倫理委員會批準，患兒家屬均簽署知情同意書。

1.2納入與排除標準 納入標準：①化學發(fā)光法檢測MP特異性抗體陽性；②肺部X線、CT等檢查結(jié)果支持肺炎診斷；③參考諸福棠《實用兒科學》(第7版)[7]確診支原體肺炎。排除標準：①存在其他嚴重疾病(如血液系統(tǒng)疾病、全身感染性疾病)等；②其他致病菌感染所致肺炎；③已實施抗菌或激素治療，或4周內(nèi)使用過激素等相關影響免疫功能的藥物；④存在免疫功能障礙；⑤有家族遺傳病史；⑥患有其他免疫性疾??；⑦不配合檢查者。

1.3檢測方法及評價指標 受試者入院后立即行空腹靜脈血檢測，采集血樣分別置于乙二胺四乙酸二鉀抗凝管(2 mL)和促凝管(2 mL)中，使用美國BD FACSCantoTMⅡ型流式細胞儀和CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色熒光單克隆抗體試劑盒(北京同生時代生物技術有限公司)測定抗凝管血液中T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+百分比；促凝管血液經(jīng)自然凝集取離心分離血清后，采用速率散射免疫比濁法使用IMMAGE 800特定蛋白分析系統(tǒng)及其配套試劑(BECKMAN COULTER公司)檢測血清免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)G、IgA、IgM水平。所有操作均在同一實驗室完成，嚴格遵守操作規(guī)程，室內(nèi)質(zhì)控顯示儀器性能狀態(tài)穩(wěn)定，檢測結(jié)果可信。

2 結(jié) 果

2.1各組T淋巴細胞亞群流式檢測結(jié)果比較 各組T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+及CD4+/CD8+表達比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。輕癥組和重癥組CD3+、CD4+及CD4+/CD8+均顯著低于對照組，重癥組低于輕癥組(P<0.05)；各組CD8+亞群T細胞比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。1例男性23月齡健康兒童CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達量分別為71.3%、45.2%、24.6%、1.83；1例男性23月齡輕癥MPP患兒CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達量分別為57.2%、25.6%、26.8%、0.96；1例男性23月齡重癥MPP患兒CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表達量分別為41.3%、14.3%、24.4%、0.59，見圖1。

組別例數(shù)CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/CD8+對照組6373.3±18.348.4±9.424.7±8.41.96±0.43輕癥組10555.3±18.8a24.3±8.1a25.1±7.70.97±0.29a重癥組6743.1±16.7ab16.1±6.8ab25.0±7.30.64±0.28abF值45.770280.3000.053284.012P值<0.001<0.0010.948<0.001

MPP：肺炎支原體肺炎；a與對照組比較，P<0.05；b與輕癥組比較，P<0.05

MPP：肺炎支原體肺炎

2.2免疫球蛋白檢測結(jié)果 各組血清IgG、IgA、IgM比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與對照組相比，輕癥組和重癥組MPP患兒血清IgG、IgA、IgM水平均明顯升高(P<0.01)，且重癥組血清IgG、IgA、IgM水平高于輕癥組(P<0.05)，見表 2。

3 討 論

MP是一種能獨立生活的無細胞壁原核細胞微生物，其結(jié)構(gòu)和大小介于細菌和病毒之間，主要經(jīng)飛沫傳播，通過呼吸道侵入機體后，可緊密黏附于呼吸道黏膜表面上皮組織和上皮細胞。Waites等[8]認為，

表2 正常兒童和輕癥、重癥MPP患兒IgG、IgA、IgM水平檢測結(jié)果比較 [g/L，M(P25，P75)]

MPP：肺炎支原體肺炎；Ig：免疫球蛋白；a與對照組比較，P<0.05；b與輕癥組比較，P<0.05

MP對于呼吸道黏膜的強黏附力主要與其表面多種黏附蛋白的作用有關，其中黏附蛋白P1的作用最重要，它能夠破壞呼吸道黏膜上皮的完整性，并與上皮細胞神經(jīng)氨酸受體相結(jié)合，釋放過氧化氫等有害物質(zhì)導致上皮細胞壞死。研究認為，MP可直接激活機體免疫系統(tǒng)，作用于包括T淋巴細胞為主的細胞免疫和B淋巴細胞為主的體液免疫，該過程可有多種免疫細胞和免疫因子參與[9-12]?？垢腥舅幬锖图に貙C體免疫狀態(tài)造成干擾，很多MPP患兒收治前常已接受抗感染藥物治療，嚴重影響和干預了患兒細胞免疫和體液免疫，因此，患兒體內(nèi)免疫細胞和免疫球蛋白水平并不能確切反映MP感染后的天然免疫狀態(tài)。本研究排除了就診前藥物治療病例，通過檢測初診MPP患兒實驗室免疫指標，分析機體細胞和體液免疫機能狀態(tài)，以期為臨床準確把握MPP患兒的癥狀和體征提供重要依據(jù)。

T淋巴細胞是參與和調(diào)節(jié)機體細胞免疫的重要免疫細胞，CD3+分子是所有成熟活化T淋巴細胞的標志性抗原，可反映T淋巴細胞活化的比例[13-14]。本研究中，輕癥和重癥MPP感染組淋巴細胞和非淋有核細胞較對照組均出現(xiàn)不同程度升高，而CD3+淋巴細胞隨病情加重呈下降趨勢。根據(jù)免疫效應功能和表面分子表達不同可將T淋巴細胞分為CD4+(CD3+CD4+)輔助性T細胞、CD8+(CD3+CD8+)細胞毒性T細胞和CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞等亞群，其中CD4+細胞占T淋巴細胞總數(shù)的60%～65%，CD8+細胞占T淋巴細胞總數(shù)的30%～35%[15](186)。CD4+T細胞可分泌表達于細胞表面的細胞因子，其可調(diào)節(jié)免疫網(wǎng)絡中其他細胞的生物學活性，對激活免疫反應過程、促進反應進展、調(diào)節(jié)反應強度起重要作用；而CD8+T細胞可直接殺傷靶抗原。在正常機體免疫狀態(tài)下，T淋巴細胞中CD4+和CD8+的比例以及CD4+/CD8+保持相對穩(wěn)定，可保證機體的正常免疫應答和免疫自穩(wěn)功能[16]。當CD4+/CD8+升高時，免疫過度可引起機體自身免疫性損傷；當CD4+/CD8+下降時，免疫功能下降導致機體感染風險升高[17]。初診MPP患兒CD4+、CD8+占總CD3+T細胞的比例可直接反映機體MP感染后的細胞免疫狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示，初診輕癥組和重癥組MPP患兒CD3+T淋巴細胞中的CD4+明顯下調(diào)，CD8+無顯著性變化，可見CD4+作為MP感染后的免疫應答功能標志物[18]，其水平隨患兒臨床癥狀加重而明顯下調(diào)，提示CD4+與MP感染有一定潛在聯(lián)系，MPP患兒的細胞免疫應答受到抑制，Redisic等[19]研究報道結(jié)論與上述研究一致。以上研究結(jié)果表明，MPP患兒細胞免疫功能低下可能與其基礎CD4+細胞比例降低有關，還可能與MPP患兒機體產(chǎn)生免疫應答導致CD4+T細胞大量消耗有關；而CD3+T細胞占淋巴細胞比例降低可能預示B淋巴細胞的相對增多，表明MPP患兒的體液免疫反應更劇烈。

Ig具有抗體活性和抗體樣結(jié)構(gòu)，由B淋巴細胞產(chǎn)生，主要存在于血液中，約占血漿蛋白總量的20%，參與中和抗原和調(diào)理作用，是評估機體體液免疫功能的重要指標。外周血中IgM、IgG、IgA含量因年齡不同存在一定變化。新生兒IgG水平較高，接近于成人水平；其他年齡段嬰幼兒體液免疫功能尚不成熟，Ig水平低于成人。感染性疾病患兒體內(nèi)Ig水平受基礎Ig和感染后體液免疫產(chǎn)生Ig的影響?；純焊腥綧P后5～7 d即出現(xiàn)特異性IgM，若機體免疫系統(tǒng)不能快速有效地清除病原體，則造成機體持續(xù)反復感染，在感染3～4周時，IgM水平達到高峰，血清特異性IgG開始出現(xiàn)，感染局部產(chǎn)生分泌型IgA，但仍不能對機體起到完全保護作用[15](262)。本研究中，輕癥組和重癥組MPP患兒血清IgG、IgA、IgM水平均較對照組升高，且血清IgG、IgA、IgM水平隨MPP患兒病情加重而逐漸升高，表明MMP可引起機體的較強體液免疫應答；此外，重癥組血清IgG、IgA水平均較對照組升高約40%，而IgM水平升高近1倍，提示重癥MPP患兒體內(nèi)MP可能為持續(xù)復制狀態(tài)。MP特異性抗體IgG和IgM可與MP表面相應抗原結(jié)合，從而激活補體，引發(fā)抗體依賴的細胞毒效應。MP表面某些抗原與人體細胞部分表面結(jié)構(gòu)相似，可造成對人體組織細胞誤殺的免疫損傷，導致組織器官的嚴重病變，可能是重癥MPP患兒病程遷延的重要原因[20]。Stelmach等[21]研究證實，與健康對照組相比，MPP患兒外周血IgG、IgA、IgM水平顯著升高，本研究結(jié)果與其一致。

綜上所述，未接受藥物治療初診的MPP患兒T淋巴細胞亞群和Ig水平可反映機體感染MP基礎免疫的即時應激狀態(tài)。未接受藥物治療初診重癥MPP患兒T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較健康對照和輕癥患兒明顯降低，Ig水平升高。由此可見，未接受藥物治療初診MPP患兒的免疫狀態(tài)檢測對輔助MPP的臨床癥狀評估以及制訂相應個體化免疫治療方案具有重要的參考價值。