亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        UPLC-MS/MS測定葡萄酒中29 種單體酚方法的建立

        2020-01-07 03:18:16楊志偉王圣儀齊鵬宇張進杰
        食品科學 2019年24期
        關鍵詞:濾膜兒茶素甲酸

        楊志偉,王圣儀,齊鵬宇,張 昂*,李 響,王 飛,張進杰

        (秦皇島出入境檢驗檢疫局技術中心,河北 秦皇島 066004)

        多酚類化合物是葡萄的重要次生代謝產物和葡萄酒中重要組成成分,主要來源于葡萄、微生物發(fā)酵和橡木桶,直接關系著葡萄酒的貯藏時間、色澤、苦味、回斂性等特性[1],同時具有抗癌、清除自由基及預防心血管疾病等多種功能[2-4],是葡萄酒中營養(yǎng)成分的主要來源。因此分析葡萄酒中酚類物質的種類和含量,建立同時快速、準確分析葡萄酒中多種酚類物質的方法,可以為葡萄酒行業(yè)及相關檢測機構提供真?zhèn)舞b別和等級評定新方法,對全面評價葡萄酒品質有重要意義[5-6]。

        酚類化合物是含有酚官能基團的物質,葡萄酒中酚類化合物根據(jù)結構不同主要分為非類黃酮類和類黃酮類[7],其中類黃酮類根據(jù)其分子結構可分為黃酮醇、花色素、黃烷醇類;非類黃酮類主要為酚酸類化合物[8-9]。葡萄酒中酚類物質種類和含量受選用葡萄品種、釀造方式、陳釀方式等因素影響[10-11]。

        目前國內關于葡萄酒中單體酚的定性和定量檢測,主要有高效液相色譜[12](high performance liquid chromatography,HPLC)法、高效液相色譜-串聯(lián)質譜(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)技術[13-15]和超高效液相色譜[16-17](ultra-high performance liquid chromatography,UPLC)法等。許婷婷等[18]利用HPLC法研究了葡萄酒中9 種單體酚的檢測方法,檢測單體酚種類少且回回率較低;孫翔宇等[19]利用反相-HPLC法和HPLC-MS法同時測定葡萄酒中16 種單體酚含量,檢測單體酚種類較少且時間長;張星星等[16]利用UPLC法測定葡萄酒中17 種酚類物質,該方法檢測時間較短,但由于葡萄酒中受多種成分影響,很難將全部單體酚分離,因此僅通過保留時間色譜圖分析對定量結果影響較大。

        UPLC-MS/MS技術可以在HPLC-MS基礎上進行2 次質量數(shù)篩選,盡可能降低背景噪音。這種技術的檢測靈敏度高,近年來以縮短檢測時間、分離能力強等優(yōu)點迅速發(fā)展[20-21]。目前國內外學者利用UPLC-MS/MS在檢測藥物[22-23]或食品[24]中酚類物質的研究較多。Maric等[25]使用UPLC-MS/MS建立了從植物粗提物中原花青素的快速定性定量方法;羅益遠等[26]利用UPLC-MS/MS技術建立測定何首烏中二苯乙烯、蒽醌、黃酮和酚酸等共14 種目標成分的方法;Ortega等[27]對UPLC-MS/MS和HPLC-MS/MS測定可可樣品中原花青素和生物堿進行比較,結果表明,UPLC-MS/MS技術能夠在12.5 min內以低濃度水平測定原花青素含量。

        故本實驗采用UPLC-MS/MS技術建立快速定性定量分析葡萄酒中29 種單體酚的測定方法,以期為葡萄酒中多種單體酚類化合物的同時檢測提供新方法,為葡萄酒相關研究提供方法學基礎。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        單體酚標準品(純度≥95%):沒食子酸(gallic acid,GA)、原兒茶酸(protocatechuate acid,PA)、(+)-兒茶素((+)-catechin,CA)、(-)-表兒茶素((-)-epicatechin,EC)、(-)-表沒食子兒茶素((-)-epigallocatechin,EGC)、(-)-表沒食子兒茶素沒食子酸酯((-)-epigallocatechin gallate,EGCG)、(-)-表兒茶素沒食子酸酯((-)-epicatechin gallate,ECG)、咖啡酸(caffeic acid,CAA)、反式阿魏酸(trans-ferulic acid,F(xiàn)A)、對香豆酸(trans-p-coumaric acid,p-CA)、綠原酸(chlorogenic acid,CGA)、順式白藜蘆醇(cis-resveratrol,cis-Res)、反式白藜蘆醇(trans-resveratrol,trans-Res)、順式白藜蘆醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(resveratrol-3-O-β-D-glycoside,Res-3-Gly)、山柰酚(kaemperol,Kae)、槲皮素(quercetin,Que)、槲皮素-3-O-葡萄糖苷(quercetin-3-glucoside,Que-3-Glu)、楊梅素(myricetin,Myr)、桑色素(morin hydrate,Mor)、漆黃素(fisetin,F(xiàn)is)、芹菜素(apigenin,Api)、木犀草素(luteolin,Lut)、牡荊素-2-O-鼠李糖苷(vitexin,Vit)、原花青素B1(procyandin B1,Pro B1)、原花青素B2(procyandin B2,Pro B2)白皮杉醇(piceatannol,Pic)、香草酸(vanillic acid,VA)、葡萄素(viniferin,Vin)、紫鉚因(butein,But) 德國Sigma-Aldrich公司。

        1.2 儀器與設備

        30-AD液相色譜儀 日本島津公司;Triple Quad?4500三重四極桿-線性離子阱復合質譜儀(配有電噴霧離子源、Turbo V離子源和Analyst 1.5數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)) 美國AB Sciex公司;ACQUITY UPLC?BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm) 美國Waters公司;Milli-Q去離子水機 美國Millipore公司;3-30KS超高速離心機 美國熱電公司。

        1.3 方法

        1.3.1 UPLC條件

        柱溫為30 ℃,進樣體積10 μL,流速0.25 mL/min,C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)分離,根據(jù)單體酚性質確定流動相A為0.1%甲酸水;流動相B為0.1%甲酸乙腈。洗脫程序:0.00~3.00 min,5% B;3.00~6.00 min,30% B;6.00~9.00 min,50% B;9.00~12.00 min,70% B;12.00~17.00 min,5% B。

        1.3.2 MS條件

        電噴霧離子源,負離子模式;多反應監(jiān)測;離子源溫度500 ℃;電噴霧電壓-4 500 V;氣簾氣壓力40 psi;碰撞氣:Medium;霧化氣壓力60 psi;輔助加熱氣壓力50 psi。

        1.3.3 單體酚標準溶液和基質液配制

        將29 種單體酚的標準品使用0.1%甲酸-甲醇溶液配制成100 mg/L的標準儲備液,于-20 ℃保存。使用時將單體酚標準儲備液使用10%甲醇(含有0.1%甲酸)溶液逐級稀釋成所需質量濃度標準工作液或混合標準工作液。

        將150 mL乙醇和3 g酒石酸移入1 L的容量瓶中,去離子水定容,得到模擬酒樣,使用時取出適量模擬酒樣,再加入目標質量濃度的單體酚的單標或混標使用。

        1.3.4 樣品前處理

        取1 mL待測酒樣用10%甲醇溶液(含0.1%甲酸)稀釋100 倍,26 000 r/min離心5 min后取上清液進行測定,根據(jù)測定結果重新取樣1 mL稀釋至適當濃度重復離心,離心后取上清液至進樣瓶待測。

        2 結果與分析

        2.1 前處理優(yōu)化

        圖1 3 種濾膜與直接進樣比較Fig. 1 Comparison of 3 filter membranes with direct injection

        由于直接進樣中雜質會對儀器造成影響,而微孔濾膜過濾會對單體酚產生吸附,本實驗采用尼龍66濾膜、親水性聚丙烯濾膜、聚醚砜濾膜和超高速離心沉淀去除雜質后對進樣結果進行比較,結果見圖1。每種濾膜對不同單體酚的吸附程度存在差異,其中尼龍66濾膜對29 種單體酚的吸附率為36.99%~67.59%,親水性聚丙烯濾膜的吸附率為39.12%~71.03%,聚醚砜濾膜的吸附率為31.56%~77.39%,由于3 種不同材質微孔濾膜均會對樣品產生明顯吸附作用,因此為實現(xiàn)標準物質對目標物準確定性定量,本實驗選擇超高速離心沉淀后直接進樣的前處理方法。

        2.2 質譜參數(shù)優(yōu)化

        采用注射泵直接將標準溶液注入離子源的方式對29 種單體酚質譜參數(shù)進行優(yōu)化。分別將29 種單體酚質量濃度為1 mg/L標準工作液以0.01 mL/min流速將標準工作液注入離子源,負離子化模式下對每種單體酚進行一級質譜分析(Q1),得到母離子峰。在進行目標離子二級掃描(MS2),得到碎片離子。

        選取響應最高的2 個碎片離子用于定性與定量,進行條件優(yōu)化得到相關參數(shù),見表1。

        表1 29 種單體酚質譜參數(shù)Table 1 Mass spectrometric parameters for 29 monomeric phenols

        2.3 色譜條件優(yōu)化

        由表1可知,通過質譜參數(shù)已經可以將大部分單體酚進行定性定量分析,但仍有少部分同分異構體結構無法通過離子對區(qū)分,因此需要選擇最佳色譜柱和流動相進行分離,通過不同保留時間對目標化合物進行定性定量測定。在1.3.1節(jié)條件下,29 種單體酚測定結果見圖2和表2、3。如圖2所示,使用C18色譜柱對29 種單體酚混合標準液的分離條件進行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)其中3 對離子對質量數(shù)相同的化合物,trans-Res與Res-3-Gly、CA與EC、Pro B1與Pro B2能夠良好分離。對流動相組成和甲酸等條件進行優(yōu)化,結果表明采用0.1%甲酸-乙腈和0.1%甲酸水作為流動相進行梯度洗脫,得到良好峰形,基質干擾小。

        圖2 29 種單體酚總離子流圖Fig. 2 Total ion current chromatograms of 29 monomeric phenols

        表3 單體酚結構Table 3 Structural formulas of monomeric phenols

        續(xù)表3

        2.4 線性關系、檢出限及定量限測定結果

        表4 方法學驗證Table 4 Methodological validation

        續(xù)表4

        在1.3.3節(jié)模擬酒基質液中定量加入29 種單體酚的混合標準溶液,分別在0.00、0.001、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500 mg/L水平下測定,分別以目標化合物峰面積(y)對其相應質量濃度(x)繪制標準曲線。按照1.3.4節(jié)樣品前處理方法制備樣品,平行實驗6 次,分別在0.01、0.10 mg/L和1.00 mg/L 3 個質量濃度進行添加,計算加標回回率和相對標準偏差,按信噪比3∶1得到目標化合物檢出限,10∶1得到目標化合物的定量限,結果見表4。29 種單體酚的定量限在0.001~0.01 mg/L之間,線性相關系數(shù)R2均大于0.99,加標回回率在90.8%~104.5%之間,相對標準偏差(relative standard deviation,RSD)在0.26%~7.54%之間。

        2.5 實際樣品的檢測結果

        表5 實際樣品中單體酚測定結果及稀釋倍數(shù)(n=27)Table 5 Results of determination and corresponding dilution folds of monomeric phenol in actual samples (n= 27)

        為驗證方法可行性,對市售的27 種干紅、干白與桃紅葡萄酒進行檢測,其中干紅葡萄酒19 種,桃紅葡萄酒1 種,干白葡萄酒7 種。由于葡萄酒中的每種單體酚含量相差過大,需先將樣品稀釋100 倍進行預實驗,再根據(jù)結果分別將酒樣成倍稀釋,以保證每種單體酚測定結果都在線性范圍內,測定結果及稀釋倍數(shù)見表5,部分酒樣總離子流圖與標準品對照見圖3。

        圖3 3 種不同類型葡萄酒總離子流與標準品對照圖Fig. 3 Comparative total ion current chromatograms of three different types of wine and reference standards

        大多數(shù)的干紅葡萄酒與桃紅葡萄酒可以檢出PA、p-CA、VA、GA、CAA、FA、Res-3-Gly、trans-Res、Pic、CA、EC、Que、EGC、Myr、Pro B1、Pro B2、Res-3-Gly、Que-3-Glu這18 種單體酚,與張協(xié)光[28]和Leonhard[5]等的檢測結果比較,利用UPLC-MS/MS建立的方法能檢出更多單體酚類物質,且檢出限和定量限更低,能同時對3 組同分異構體進行測定。

        這18 種單體酚化合物在葡萄酒中總量在75.560~331.243 mg/L之間,其中兒茶素在多數(shù)干紅葡萄酒中含量最高。干白葡萄酒所檢出的單體酚種類在11~17 種之間,cis-Res、trans-Res、Pic、Myr、Res-3-Gly、Que-3-Glu、Pro B2在部分干白葡萄酒中未檢出,且檢出這17 種單體酚化合物總量在8~40 mg/L之間,其中GA、PA和Res在干紅葡萄酒中的檢測結果范圍與李巍[29]和趙建勇[30]等測定結果接近。

        3 結 論

        本實驗采用UPLC-MS/MS技術建立了葡萄酒中29 種單體酚定性定量的檢測方法,通過儀器條件、流動相等優(yōu)化考察,最終得到方法檢出限在0.000 3~0.003 mg/L之間,定量限在0.001~0.01 mg/L之間,加標回回率在90.8%~104.5%之間。

        這種檢測方法操作簡便、靈敏度高、實用性強,相比于已有方法,檢測時間短且檢出限低,經方法學驗證,該方法能滿足葡萄酒中29 種單體酚的日常檢測要求,可應用于葡萄酒監(jiān)測工作。

        猜你喜歡
        濾膜兒茶素甲酸
        超高效液相色譜法測定茶葉中的兒茶素
        溶膠-凝膠法制備高性能ZrO2納濾膜
        陶瓷學報(2020年3期)2020-10-27 02:08:12
        A case report of acupuncture of dysphagia caused by herpes zoster virus infection
        甲酸治螨好處多
        甲酸鹽鉆井液完井液及其應用之研究
        荷負電手性殼聚糖納復合濾膜的制備與性能研究
        應用化工(2014年1期)2014-08-16 13:34:08
        基于環(huán)己烷甲酸根和2,2′-聯(lián)吡啶配體的雙核錳(Ⅱ)配合物的合成與表征
        全甲基化沒食子兒茶素沒食子酸酯的制備
        光氣法合成二乙二醇雙氯甲酸酯
        河南科技(2014年12期)2014-02-27 14:10:32
        1種荷正電納濾膜的制備
        少妇人妻一区二区三飞| 国产在线精品成人一区二区三区| 久久人人玩人妻潮喷内射人人| 亚洲AV无码久久久一区二不卡 | 看日本全黄色免费a级| 日本一本二本三本道久久久| 国产精品一区二区三区四区亚洲| 亚洲国产精品一区二区成人片国内 | 国产午夜精品av一区二区三| 精品国产亚洲第一区二区三区| 国产av天堂亚洲国产av天堂| 国产乱子伦农村叉叉叉| 欧美伊人亚洲伊人色综| 中文字幕无线精品亚洲乱码一区| 偷拍韩国美女洗澡一区二区三区 | 亚洲AⅤ乱码一区二区三区| 99麻豆久久精品一区二区| 日本黄网色三级三级三级| 亚洲中文久久精品字幕| 欧美人妻少妇精品久久黑人| 国产亚洲精久久久久久无码77777| 中文字幕在线观看乱码一区| 日本一区二区三区清视频| 国产极品视觉盛宴| 久久久亚洲精品无码| 国产午夜福利短视频| 伊人久久一区二区三区无码| 亲少妇摸少妇和少妇啪啪 | 国产三级精品美女三级| 国产理论亚洲天堂av| 日韩中文字幕不卡在线| 人妻中文字幕在线网站| 国产精品三级在线观看无码| 亚洲AV无码国产精品久久l| 亚洲福利一区二区不卡| 狂猛欧美激情性xxxx大豆行情| 骚片av蜜桃精品一区| 国产亚洲精品福利在线| www.尤物视频.com| 亚洲视频在线观看第一页| 国产精品无码av无码|