付小瓊，李超，李楚逸，彭軍*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所/ 棉花生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河南安陽(yáng)455000；2.鄭州大學(xué)，鄭州450001）

筆者多年利用簡(jiǎn)單重復(fù)序列（Simple sequence repeat，SSR）分子標(biāo)記檢測(cè)國(guó)家棉花區(qū)試參試品種的真實(shí)性和純度， 同時(shí)也協(xié)助部分省種子管理站檢測(cè)省級(jí)棉花區(qū)試品種的純度，積累了一些經(jīng)驗(yàn)。2017年、2018年繼續(xù)承擔(dān)了一些種子企業(yè)的雜交種和親本純度檢測(cè)的工作，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2017年受9 家棉種企業(yè)和科研單位等的委托，承擔(dān)了雜交種和親本純度鑒定工作，接受雜交棉樣品100 份，親本樣品161 份。

2018年受13 家棉種企業(yè)和科研單位等的委托，承擔(dān)了雜交種、常規(guī)種和親本純度鑒定工作，接受雜交棉樣品152 份，親本樣品21 份及常規(guī)品種樣品13 份。

1.2 檢測(cè)方法

水磨棉仁，離心后抽提上清液作模板，采用15對(duì)核心引物進(jìn)行檢測(cè)，具有快速、低污染的特點(diǎn)[1]。

1.3 判別方法

15 對(duì)核心引物擴(kuò)增的圖譜有2 對(duì)以上的圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜不一致判定為雜株。通過(guò)圖譜與親本比對(duì)可以判斷雜株的不同類(lèi)型，有母本、父本，有雜交雜株，也有混入的其他常規(guī)棉種子。 SSR 標(biāo)記純度為符合標(biāo)準(zhǔn)圖譜的種子數(shù)占總檢測(cè)數(shù)的百分率。 根據(jù)多年的檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)， 雜交種在80%以上為合格，在生產(chǎn)上優(yōu)勢(shì)表現(xiàn)明顯。 如果母本與雜交種形態(tài)差異較大的品種，母本漏制種的比例需要嚴(yán)格控制，SSR標(biāo)記純度應(yīng)保證在90%以上才能判定為合格[2-5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 雜交棉SSR純度檢測(cè)結(jié)果

2017年檢測(cè)的100 份雜交種SSR 標(biāo)記純度均在80%以上， 均達(dá)到合格水平， 其中有82 份SSR標(biāo)記純度在90%以上（表1）；2018年檢測(cè)的152 份雜交種均在80%以上， 均達(dá)到合格水平， 其中有132 份在90%以上（表2），總體制種質(zhì)量較好。各制種公司所有雜交種批次中沒(méi)有用F2冒充F1現(xiàn)象，沒(méi)有人為摻雜現(xiàn)象，純度較差的種子均是由自交造成的。

2.2 2013―2018年種子企業(yè)雜交種純度檢測(cè)的比較

由表3 可知，2013年雜交種純度差，SSR 標(biāo)記純度在80%以上僅占39.9%；2014、2015年各批次的SSR 標(biāo)記純度均在80%以上；2016年有2 個(gè)批次SSR 純度在80%以下，98.7%的批次在80%以上；2017、2018年各批次SSR 標(biāo)記純度均在80%以上，其中2018年SSR 標(biāo)記純度大于90%的比例為86.8%，為6年中最高。 可見(jiàn)，近幾年生產(chǎn)上雜交棉種子質(zhì)量不斷提高， 純度明顯優(yōu)于2014年之前的雜交種[2-5]。

表1 2017年各棉種企業(yè)委托鑒定雜交種的SSR 標(biāo)記純度檢測(cè)結(jié)果

表2 2018年各棉種企業(yè)委托鑒定雜交種的SSR 標(biāo)記純度檢測(cè)結(jié)果

表3 2013―2018年送檢雜交種樣品的純度分布

2.3 制種親本的檢測(cè)結(jié)果

2017年檢測(cè)了3 個(gè)公司的161 個(gè)批次的親本純度，SSR 標(biāo)記純度在 83.3%～100.0%，7 個(gè)批次的純度在90%以下（表4）；2018年檢測(cè)了4 個(gè)公司的21 個(gè)批次的親本純度，SSR 標(biāo)記純度在83.3%～100.0%，90%以下的批次僅為 2 個(gè)（表 5），總體情況較好。對(duì)純度90%以下的親本在制種前要加強(qiáng)去雜的工作。

表4 2017年雜交制種的親本檢測(cè)結(jié)果

2.4 常規(guī)品種的SSR純度檢測(cè)結(jié)果

2018年檢測(cè)常規(guī)棉品種批次13 個(gè)，SSR 標(biāo)記純度在83.3%～100.0%，SSR 標(biāo)記純度在90%以下的批次有3 個(gè)（表6）。 常規(guī)棉保純相對(duì)簡(jiǎn)單，但也要注意收獲前的去雜，保證棉種的純度，保持品種的種性，延長(zhǎng)品種的使用年限。

表5 2018年雜交制種的親本檢測(cè)結(jié)果

表6 2018年棉花常規(guī)品種檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)論與建議

3.1 親本的純度是保證雜交種純度的前提條件

在親本繁殖過(guò)程中要提純復(fù)壯，收獲時(shí)要單收、單曬和單軋，加工中的各個(gè)環(huán)節(jié)要注意清理機(jī)器，貯存時(shí)標(biāo)簽應(yīng)詳細(xì)。檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，某些公司由于親本純度不高或發(fā)放親本時(shí)發(fā)生錯(cuò)誤，導(dǎo)致雜交種報(bào)廢不能用作商品種子。 因此，來(lái)年制種前要認(rèn)真去雜，保證制種時(shí)親本的純度高。

3.2 適度控制制種戶的制種面積，減少自交鈴

近幾年純度偏低的批次主要原因均為自交鈴偏多，是由早晨剝大花現(xiàn)象導(dǎo)致的。 在人力缺少的情況下，應(yīng)減少制種戶的制種面積，以利于保證質(zhì)量。而且制種地塊布局應(yīng)適當(dāng)分散，以便解決用工問(wèn)題。

3.3 職責(zé)分明，建立互信互利的制種合作機(jī)制

在親本純度較高的前提下制種，年終收種子時(shí)進(jìn)行分子檢測(cè)，合格的回收，不合格的不收，嚴(yán)格按合同執(zhí)行，保障雙方的利益。 種子公司適當(dāng)減少一些監(jiān)控環(huán)節(jié)，節(jié)省成本，讓利于制種農(nóng)戶，提高農(nóng)戶的自覺(jué)性。

3.4 提高F1的質(zhì)量，利于科學(xué)合理利用F2

目前西北內(nèi)陸棉區(qū)為主栽棉區(qū)，有很大一部分為風(fēng)險(xiǎn)棉區(qū)，前期氣溫不穩(wěn)定，后期降霜早，生產(chǎn)上要推廣早發(fā)早熟的品種，雜交棉為首選類(lèi)型，早熟品種（雜交種）易脫葉雜質(zhì)少，有利于機(jī)采棉的發(fā)展。 但目前人工制種成本過(guò)高，在雜交一代不能滿足生產(chǎn)需求的情況下，可考慮利用F2的剩余優(yōu)勢(shì)。而F2較大面積的應(yīng)用依賴(lài)于F1的質(zhì)量。

3.5 培養(yǎng)種子流通環(huán)節(jié)的誠(chéng)信意識(shí)

種子企業(yè)在收獲種子時(shí)送樣檢測(cè)，監(jiān)控種子的制種質(zhì)量是有必要的。 而在后期的流通經(jīng)營(yíng)環(huán)節(jié)中，一經(jīng)換手又存在檢測(cè)問(wèn)題，這種互不信任的現(xiàn)象增加了檢測(cè)的工作量， 增加了種子經(jīng)營(yíng)的成本。種子經(jīng)營(yíng)要以誠(chéng)信為本， 避免中途調(diào)包或以次充好，形成良好的經(jīng)營(yíng)流通合作方式。