★ 黎艷剛 李麗云 沈加永 丁江生 羅小泉 楊武亮

(1.云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心/云南省藥物研究所/云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 昆明 650111；2．江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南昌 330004)

布洛芬口服溶液是專為兒童設(shè)計(jì)的感冒退燒藥，主要用于兒童減輕中度疼痛，減輕普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱。因抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛效果確切、不良反應(yīng)少、口服易吸收等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用。因其處方中含有多種輔料，過量攝入會增加臨床不良反應(yīng)，因此控制其含量至關(guān)重要。藥用甘油為潤滑性瀉藥，可用作助溶劑、保濕劑等，還是常用的透皮吸收促進(jìn)劑[1]。研究表明：甘油的藥用作用伴有腹瀉等不良反應(yīng)，因此需通過控制其含量，以便達(dá)到更好的臨床療效。文獻(xiàn)報(bào)道甘油含量測定方法較多，有快速酶法[2]、紫外分光光度法[3]、高效液相色譜聯(lián)合示差折光檢測器法[4]等。山梨醇是一種重要的醫(yī)藥、化工、輕工、食品工業(yè)原料，在很多方面都有廣泛的應(yīng)用[5]。可作為甜味劑、保濕劑、賦形劑、防腐劑等使用。目前山梨醇的測定方法主要有熒光分光光度法[6]、碘量法、高效毛細(xì)管電泳法[7]等。

由于本品說明書中藥用輔料非常多，檢測時(shí)不易分離，干擾較大，專屬性不強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確度不高，色譜法相對更準(zhǔn)確。目前，高效液相色譜聯(lián)合示差折光檢測器法(HPLC-RID)同時(shí)測定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇的含量的方法未查詢到。本文在大量文獻(xiàn)及實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上建立了HPLC-RID法同時(shí)測定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇含量的方法，該方法便捷、靈敏度高，可作為布洛芬口服溶液中檢測甘油和山梨醇質(zhì)量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(美國Agilent，1260型)；示差折光檢測器(美國Agilent，G1362A型)；電子天平(梅特勒-托里多公司，AL104型)。

1.2 試藥 布洛芬口服溶液(神威藥業(yè)有限公司，批號：1111241，1109201，1109202)；甘油對照品(南昌白云制藥有限公司，批號：20120904，純度99.2%)；山梨醇對照品(北京風(fēng)禮精求商貿(mào)有限責(zé)任公司，批號：F372F，純度99.5%)；乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：NH2色譜柱(Waters Spherisorb)(4.6mm×250mm，5.0μm)；流動相：乙腈-水(73∶27)，流速1mL/min；柱溫：25℃；示差折光檢測器溫度：35℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液 將甘油、山梨醇對照品減壓干燥至恒重，分別稱取甘油和山梨醇對照品2.5g、1g，精密稱定，至100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取神威藥業(yè)生產(chǎn)的布洛芬口服溶液約5mL，置50mL容量瓶中，加水稀釋并定溶至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 按布洛芬口服溶液說明書中組成成分，制備不含山梨醇、甘油的樣品，按2.2.2項(xiàng)下供試品制備方法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 精密量取上述三種溶液各10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，對上述3種溶液色譜圖進(jìn)行對比分析，結(jié)果見圖1。從圖譜中可知甘油和山梨醇能被較好的分離，分離度大于1.5，且無其他峰干擾，說明該方法專屬性較好。

A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.甘油；2.山梨醇

2.3.2 線性范圍考察 精密量取2.2.1制備的對照品儲備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mL，分別置于10mL的容量瓶中，用水稀釋至刻度線，搖勻，即得不同濃度的對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各10μL進(jìn)樣，按2.1項(xiàng)色譜條件測定，以對照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y甘油=74575X-1262.4(r=0.9999)、Y山梨醇=91463X-41541(r=0.9995)，對照品線性范圍分別為25～150μg，10～60μg；結(jié)果表明：甘油和山梨醇分別在25～150μg，10～60μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn)

2.3.3.1 日內(nèi)精密度 精密吸取上述對照品溶液10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算得山梨醇、甘油峰面積的RSD分別為0.97%，0.26%。結(jié)果表明該方法的日內(nèi)精密度良好。

2.3.3.2 日間精密度 精密吸取上述對照品溶液10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件每天重復(fù)進(jìn)樣2次，連續(xù)進(jìn)樣3天，計(jì)算得甘油、山梨醇峰面積的RSD分別為0.35%，0.84%。結(jié)果表明該方法的日間精密度良好。

2.3.4 檢測限與定量限 將對照品儲備液進(jìn)行稀釋，按2.1項(xiàng)下色譜條件測定，當(dāng)信噪比約為3時(shí)，測得甘油、山梨醇的檢測限分別為0.25μg，1μg；當(dāng)信噪比約為10時(shí)，測得甘油、山梨醇的定量限分別為2.5μg，20μg。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取神威藥業(yè)生產(chǎn)的布洛芬口服溶液約5mL，精密量取，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于室溫下放置，分別于0，2，4，6，12，24h，精密吸取各10μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果甘油和山梨醇峰面積的RSD分別為0.69%，1.01%，表明供試品溶液于室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 準(zhǔn)確度 精密量取已知山梨醇和甘油含量的布洛芬口服溶液(批號為1111241)0.25mL的80%，100%，120%的體積，各3份，分別加入80%，100%，120%的甘油、山梨醇對照品。按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，結(jié)果見表1。

2.4 樣品測定 取神威藥業(yè)生產(chǎn)的布洛芬口服溶液，按2.2.2項(xiàng)下方法配制供試品溶液，分別精密吸取10μL，按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 含量測定結(jié)果

3 討論

本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定布洛芬口服溶液中甘油、山梨醇含量的方法，按處方比例與工藝，制成不含甘油和山梨醇的陰性供試品進(jìn)行測定，在與樣品同樣保留時(shí)間處未出現(xiàn)色譜峰，對甘油和山梨醇的測定無干擾。本法考察了幾種流動相，其中以乙腈:水(73∶27)為流動相的分離效果和出峰時(shí)間最為理想，故選此為流動相。通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本法具有回收率高、精密度高、重復(fù)性好、方法簡單的優(yōu)點(diǎn)，可用于布洛芬口服溶液中甘油和山梨醇的質(zhì)量控制。