鄧麗娟

摘要：為比較研究選擇性雌激素受體調節(jié)劑OBHS和雷洛昔芬（RAL）抗腫瘤作用效果。采用MTT法檢測了不同濃度的OBHS和RAL對非洲綠猴腎細胞系（VERO）、乳腺癌細胞系（MCF-7）、卵巢癌細胞系（SK-O-V3）以及前列腺癌細胞系（DU145）的細胞活性的影響。實驗結果表明，OBHS和RAL均可以抑制MCF-7、SK-OV-3及DU145的活性，但是OBHS對正常細胞VERO基本無毒副作用。

關鍵詞：OBHS;雷洛昔芬;抗腫瘤

中圖分類號：Q291 文獻標識碼：A 文章編號：1674-9944（2019）22-0193-03

1 引言

雌激素受體a（ER（x）和雌激素受體β（ERβ）是參與調節(jié)人體多種輔助生理學反應的轉錄因子[1]。有研究表明ERα與乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌以及子宮內膜癌等密切相關[2～4]，因此ERα被認為是癌癥治療中的主要治療靶標。選擇性雌激素受體調節(jié)劑（SERMs）是一類可以與雌激素受體（ER）高親和力結合的化合物，在不同組織中表現(xiàn)出類雌激素作用或抗雌激素的活性，其組織特異性使它在血管、子宮、乳腺和骨骼等組織中發(fā)揮著不同的作用[5～7]。

OBHS是人工合成的ERa選擇性的拮抗劑，與第二代SERMs雷洛昔芬（RAL）的拮抗作用機制相薣8]??？研究發(fā)現(xiàn)OBHS在子宮內膜癌細胞系HEC-1-A和子宮內膜異位模型中均表現(xiàn)出拮抗雌激素轉錄激活作用[8，9]，但OBHS對其他類型的腫瘤細胞的作用則有待進一步研究。

2 材料與方法

2.1 材料

細胞系VERO、MCF-7、SK-OV-3以及DU145均購自武漢大學保藏中心。

2.2 方法

2.2.1 MTT法檢測細胞活力

用含有10%活性炭處理的胎牛血清（CS-FBS）的無酚紅DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞3d，收集處于對數(shù)生長期的細胞制成細胞懸浮液，并以1⁴個細胞/mL左右的濃度接種到96孔細胞培養(yǎng)板中，于二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h左右。當細胞密度達到50%時，加入不同濃度的藥物，繼續(xù)培養(yǎng)3d，然后分別加入MTT溶液（終濃度為1mg/mL），37℃培養(yǎng)4h。去除96孔板中的培養(yǎng)基后，每孔加入100μL的二甲亞砜，震蕩10min，用酶標儀檢測待測樣品在570nm波長處的吸光值，并計算藥物的半抑制率（IC50值）。

2.2.2 統(tǒng)計學方法

所有實驗數(shù)據(jù)均用平均值±SD表示（n=3）。其中，IC50采用公式Y=100%抑制+（0%抑制-100%抑制）/（1+10[（logIC50-X）×斜率]），Y為光吸收值，X為log[抑制劑濃度]，通過Origin 8.0統(tǒng)計軟件分析獲得。

3 結果

3.1 OBHS和RAL抑制人乳腺瘤細胞MCF-7的活性

取不同濃度的RAL和OBHS分別作用乳腺癌細胞MCF-7和非洲綠猴腎的正常細胞VERO，3d后檢測細胞活性。實驗結果表明，當OBHS和RAL工作濃度上升至20μmol/ L時，MCF-7的細胞活性下降到50%以下（圖1a），RAL和OBHS對MCF-7的抑制作用均具有濃度依耐性，其IC50值分別為15.9±0.30和20.1±1.16。此外，RAL對VERO的細胞活性也具有一定的抑制作用（圖1b），其IC50為36.4±0.27;而OBHS對正常細胞的毒性較小，IC50值大于100（圖1b），這表明OBHS的體外治療指數(shù)要高于RAL。

3.2 OBHS和RAL抑制人卵巢癌細胞系SK-OV-3的活性

將不同工作濃度的OBHS和RAL分別作用SK-OV-3細胞系3d，檢測細胞活性。實驗結果顯示，當RAL工作濃度上升到20μmol/L時，SK-OV-3細胞活性可以降至50%以下;而同樣工作濃度的OBHS對細胞活性并無影響，只有當OBHS工作濃度上升至80μmol/L時，才具有類似的抑制效果（圖2）。

3.3 OBHS和RAL抑制人前列腺癌細胞系DU145的活性

不同工作濃度的OBHS和RAL分別處理DU145細胞系3d，檢測細胞活性。實驗發(fā)現(xiàn)：RAL和OBHS對DU145細胞活性均有不同程度的抑制，其IC50值分別為：21.2±0.79和62.2±0.15。這表明OBHS只有在較高濃度時才對DU145細胞具有抑制細胞活性的作用（圖3）。

4 討論

選擇性雌激素受體調節(jié)劑（SERMs）在不同的組織中通常表現(xiàn)出較為復雜的藥理學特效。RAL是第二代SERM，被美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準用于預防和治療乳腺癌和男、女性的骨質疏松癥[10]。OBHS是一種人工合成的選擇性雌激素受體調節(jié)劑，它對ERa的選擇性與雷洛昔芬（RAL）類似[8]，因此本研究比較了這兩種藥物對3種腫瘤細胞MCF-7、SK-OV-3和DU145的細胞活性的影響。

MCP-7、SK-OV-3以及DU145分別是人的乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌細胞系。在這3種細胞系中，它們的雌激素受體的表達情況并不相同。在MCF-7中ERα高表達，ERβ低表達;而在SK-OV-3和DU145細胞中，ERβ表達相對較高，ERα低表達或者幾乎無表達。事實上，大量研究表明，ERα與腫瘤的惡性增殖、炎癥及腫瘤的發(fā)展有關[11，12];而ERβ對細胞增殖的影響與ERα相反，有促進細胞凋亡的作用[13，14]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌和前列腺細胞，RAL也能選擇激活ERβ，從而發(fā)揮抑制細胞增殖的作用[15，16]。而在本研究中，RAL對SK-OV-3、DU145和MCF-7細胞活性均有較強的抑制作用。因此推測，RAL在ERp高表達的SK-OV-3和DU145細胞中也具有抑制活性，可能與其選擇性ERβ激活的特性有關。但有意思的是，在體外轉錄激活實驗中，OBHS屬于ERβ的拮抗劑[8]。雖然低濃度的OBHS對DU145和SK-OV-3的細胞活性無明顯影響，但是當OBHS濃度逐漸增大，OBHS也出現(xiàn)抑制腫瘤細胞活性的現(xiàn)象。由此可見，在前列腺癌和卵巢癌細胞中，OBHS的抗腫瘤細胞活性的作用機制可能與雷洛昔芬并不相同，具體的作用機制還有待進一步研究。