向丹 喻娜 趙靜 羅巧 向洋

【摘 要】以紅掌阿拉巴馬為研究對(duì)象，運(yùn)用正交試驗(yàn)，探討取材部位、消毒劑種類、消毒劑浸泡時(shí)間對(duì)紅掌外植體消毒影響作用，篩選紅掌外植體消毒的最佳方案。結(jié)果表明，取材部位和消毒劑浸泡時(shí)間對(duì)外植體消毒的污染程度有顯著影響，消毒劑浸泡時(shí)間對(duì)外植體消毒的死亡率有顯著影響，三個(gè)因素對(duì)外植體消毒作用效果依次為消毒劑浸泡時(shí)間﹥?nèi)〔牟课哗兿緞┓N類，紅掌外植體消毒的最佳組合方案方案：以葉片作為外植體，用0.1%升汞浸泡8min。

【關(guān)鍵詞】正交試驗(yàn);紅掌;外植體;消毒

紅掌（Anthurium andraeanum），又名大葉花燭、安祖花、幸運(yùn)花等，是天南星科花燭屬的多年生常綠草本植物，原產(chǎn)于熱帶南美洲。紅掌花色艷麗多彩，花朵為佛焰苞片，葉形獨(dú)特且有光澤，花期長(zhǎng)，是國(guó)內(nèi)花卉市場(chǎng)的熱銷產(chǎn)品，需求量大[1]。傳統(tǒng)的紅掌繁殖方式不能滿足市場(chǎng)對(duì)紅掌的需求供應(yīng)[2]，常借助組織培養(yǎng)技術(shù)實(shí)現(xiàn)紅掌的快速繁殖[3]。污染是組織培養(yǎng)過(guò)程中較難控制的問(wèn)題，有效的進(jìn)行外植體消毒，是降低組培污染率的一個(gè)關(guān)鍵因素。本研究借助正交試驗(yàn)探討取材部位、消毒劑種類和浸泡時(shí)間對(duì)外植體消毒效果的影響，為紅掌快繁體系的建立提供依據(jù)。

1.材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

從廣安市花卉市場(chǎng)購(gòu)買的紅掌阿拉巴馬植株，選取生長(zhǎng)健壯植株的相應(yīng)部位作為外植體。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體的處理：從生長(zhǎng)健壯的植株取下材料，流水沖洗30 min，無(wú)菌水沖洗3次，吸水，70%酒精浸泡30s，再用無(wú)菌水沖洗3次后，置于超凈臺(tái)盛有無(wú)菌水的無(wú)菌瓶中備用。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，設(shè)3個(gè)因子、3個(gè)水平，每瓶接種3個(gè)外植體，每個(gè)處理接種20瓶，3次重復(fù)。統(tǒng)計(jì)外植體的污染率和死亡率。

1.3 培養(yǎng)條件

以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添加激素6-BA和2，4-D，pH5.8，組培室內(nèi)溫度為（25±2）℃，光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)間12h/d。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)在Excel軟件上處理后，再用SPSS軟件進(jìn)行分析。

污染率（%）=污染的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)×100%

死亡率（%）=死亡的外植體數(shù)/接種的外植體數(shù)×100%

2.結(jié)果與分析

2.1 取材部位對(duì)紅掌外植體消毒的影響

分別選取紅掌的莖段、葉柄、葉片作為外植體進(jìn)行消毒試驗(yàn)，正交試驗(yàn)結(jié)果分析表明，以死亡率為指標(biāo)時(shí)，取材部位對(duì)外植體的消毒效果不存在顯著差異，以污染率為指標(biāo)時(shí)，取材部位對(duì)外植體的消毒效果存在顯著差異（p﹤0.05），消毒效果依次為葉片﹥?nèi)~柄﹥莖段（表1），表明以葉片作為外植體進(jìn)行紅掌外植體消毒的效果最好。

2.2 消毒劑種類對(duì)紅掌外植體消毒的影響

以0.1%升汞、0.2%升汞、1%新潔爾滅作為消毒劑，正交試驗(yàn)結(jié)果分析表明，以死亡率為指標(biāo)時(shí)，取材部位對(duì)外植體的消毒效果不存在顯著差異，以污染率為指標(biāo)時(shí)，消毒劑種類對(duì)外植體的消毒效果存在顯著差異（p﹤0.05），消毒效果依次為0.1%升汞﹥1%新潔爾滅﹥0.2%升汞（表1），表明以0.1%升汞作為消毒劑進(jìn)行紅掌外植體消毒的效果最好。

2.3 消毒劑浸泡時(shí)間對(duì)紅掌外植體消毒的影響

消毒劑的浸泡時(shí)間分別為3min、5min、8min，正交試驗(yàn)結(jié)果分析表明，以死亡率為指標(biāo)時(shí)，消毒劑的浸泡時(shí)間對(duì)外植體的消毒效果存在顯著差異（p﹤0.05），消毒效果依次為3min﹥5min﹥8min，以污染率為指標(biāo)時(shí)，消毒劑的浸泡時(shí)間對(duì)外植體的消毒效果存在顯著差異（p﹤0.05），消毒效果依次為3min﹥8min﹥5min（表1），表明消毒劑浸泡時(shí)間為5min時(shí)對(duì)紅掌外植體消毒的效果最好。

由極差分析可知（表1），以污染率為指標(biāo)時(shí)，取材部位、消毒劑種類、消毒劑浸泡時(shí)間這3個(gè)因素的極差值大小為C﹥A﹥B（表1），表明消毒劑浸泡時(shí)間是對(duì)外植體消毒效果影響最大的因素，消毒劑種類是對(duì)外植體消毒效果影響最小的因素，這3個(gè)因素對(duì)外植體消毒效果影響的順序依次為消毒劑浸泡時(shí)間﹥?nèi)〔牟课哗兿緞┓N類。以死亡率為指標(biāo)時(shí)，取材部位、消毒劑種類、消毒劑浸泡時(shí)間這3個(gè)因素的極差值大小為C﹥B﹥A，表明消毒劑浸泡時(shí)間是對(duì)外植體消毒效果影響最大的因素，取材部位是對(duì)外植體消毒效果影響最小的因素，這3個(gè)因素對(duì)外植體消毒效果影響的順序依次為消毒劑浸泡時(shí)間﹥消毒劑種類﹥?nèi)〔牟课?。結(jié)合方差分析結(jié)果，以死亡率為指標(biāo)時(shí)，取材部位和消毒劑種類對(duì)外植體消毒效果無(wú)顯著影響，毒劑浸泡時(shí)間對(duì)外植體消毒效果存在顯著影響，與以污染率為指標(biāo)時(shí)的顯著效果一致。綜合上述正交試驗(yàn)結(jié)果，紅掌外植體消毒的最佳方案組合為C3A3B1，即以葉片作為外植體，用0.1%升汞浸泡8min。

表1 紅掌外植體消毒正交試驗(yàn)污染率數(shù)據(jù)分析表

3.討論

在植物組培快繁的過(guò)程中，外植體自身攜帶的微生物是引起污染的主要原因，因此，外植體消毒是組培快繁的關(guān)鍵一環(huán)。正交試驗(yàn)已廣泛用于優(yōu)化影響組織培養(yǎng)的各種因素，本試驗(yàn)借助正交設(shè)計(jì)探討取材部位、消毒劑種類和消毒劑浸泡時(shí)間對(duì)紅掌外植體消毒的作用效果。通過(guò)極差分析和方差分析可知，消毒劑浸泡時(shí)間和外植體取材部位是影響紅掌組培污染率的主要因素，消毒劑浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)會(huì)增加外植體的死亡率。試驗(yàn)結(jié)果表明，紅掌外植體消毒的最佳組合即，以葉片作為外植體，用0.1%升汞浸泡8min，消毒劑種類和消毒時(shí)間與已有的報(bào)道結(jié)果一致。

【參考文獻(xiàn)】

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作者簡(jiǎn)介：向丹（1990-），女，碩士，助教，研究方向：植物組織培養(yǎng)。

基金項(xiàng)目：四川省教育廳項(xiàng)目（編號(hào) 18ZB0262）。