戴 妮

子癇前期是孕婦妊娠期多見的并發(fā)癥，有調(diào)查表明，子癇前期在全球范圍的發(fā)生率約為2%～8%[1]。相關(guān)研究指出，胎盤核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)紊亂與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展具有密切聯(lián)系[2]。黃芪注射液具有擴(kuò)張血管、改善腎功能、降壓等功能，是治療子癇前期的有效藥物[3]。為進(jìn)一步明確黃芪注射液治療子癇前期的作用機(jī)理，本課題主要研究黃芪注射液對(duì)子癇前期大鼠尿蛋白、胎盤NF-κB、MMP-9及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試劑及設(shè)備 黃芪注射液 （哈爾濱圣泰制藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字號(hào)：Z23020822），N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME，Cayman 公司，批號(hào)：lot14H0135），尿蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒（江蘇晶美生物科技有限公司）；RT-PCR 儀（型號(hào)：ABI 7000型，上海朗賦實(shí)業(yè)有限公司）及配套試劑。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 妊娠 （妊娠第12 d）SD大鼠30只，購自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（豫）2008-1-003。 飼養(yǎng)條件：室溫 18～26 ℃，空氣濕度（55±5）%，環(huán)境安靜、通風(fēng)，予以自由飲食，充分給水。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 將實(shí)驗(yàn)鼠隨機(jī)分為模型組、黃芪組和對(duì)照組，在妊娠第13～15 d，模型組及黃芪組大鼠皮下注射L-NAME 50 mg/(kg·d)，以建立子癇前期大鼠模型；對(duì)照組大鼠注射等量生理鹽水。妊娠第16 d起，黃芪組腹腔注射黃芪注射液[0.024 ml/(g·d)+5%葡萄糖注射液共1 ml]，另外兩組注射同體積5%葡萄糖注射液。各組均1次/d，連續(xù)給藥5 d。

1.4 檢測(cè)指標(biāo) 分別在妊娠第15、20 d時(shí)，采集實(shí)驗(yàn)鼠24 h全尿，運(yùn)用鄰苯三酚法測(cè)量24 h尿蛋白量。血壓檢測(cè)：于安靜環(huán)境下，把實(shí)驗(yàn)用袖帶套入大鼠尾部檢測(cè)動(dòng)脈壓，每只檢測(cè)3次，每次隔60 s，取3次之和的平均值為動(dòng)脈壓。24 h尿標(biāo)本采集后，腹腔注射10%水合氯醛（3 ml/kg）麻醉大鼠，取出胎盤，用生理鹽水漂洗，-70℃保存?zhèn)溆?。以RT-PCR 法 檢 測(cè) 胎 盤 組 織 NF-κB、PLGF、NFAT-5、MMP-9、sFlt-1mRNA表達(dá)水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以x±s表示，多組比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)段動(dòng)脈壓和尿蛋白水平 在妊娠第15 d，對(duì)照組動(dòng)脈壓和尿蛋白水平明顯降低（P＜0.05），余下兩組間未見明顯差異（P＞0.05）；在妊娠第20 d與15 d相比，模型組和對(duì)照組的動(dòng)脈壓和尿蛋白水平未見明顯變化（P＞0.05），而黃芪組明顯低于模型組（P＜0.05），且與對(duì)照組比較無明顯差異（P＞ 0.05）。 見表 1。

2.2 各因子mRNA表達(dá)水平 在妊娠第20 d，各組各因子mRNA表達(dá)水平均有顯著差異（P＜0.05）；sFlt-1mRNA、NF-κB 表達(dá)水平：模型組最高，對(duì)照組最低（P＜0.05）；MMP-9 mRNA表達(dá)水平：模型組最低，對(duì)照組最高（P＜0.05）；模型組 NFAT-5 mRNA表達(dá)水平明顯升高，PLGF mRNA表達(dá)水平明顯降低（P＜ 0.05），且余下兩組間未見明顯差異（P＞ 0.05）。見表2。

3 討論

黃芪注射液屬于中藥制劑，具有顯著降壓效果。相關(guān)研究指出，黃芪能夠提高腎小球?yàn)V過及腎血流量，緩解免疫復(fù)合物對(duì)腎小球基底膜造成的損傷，有效清除氧自由基，促進(jìn)腎功能恢復(fù)，從而提高尿量，實(shí)現(xiàn)降壓、利尿的治療效果[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在妊娠第20 d，黃芪組尿蛋白水平、動(dòng)脈壓明顯比模型組低，表明黃芪注射液能顯著降低子癇前期大鼠血壓值和尿蛋白水平，與楊雙燕等[5]研究結(jié)果一致。

表1 各組不同時(shí)段動(dòng)脈壓和尿蛋白水平比較（n=10）

表2 各組各因子mRNA表達(dá)水平比較(n=10）

子癇前期母體胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力顯著降低，而MMP-9表達(dá)不足會(huì)弱化其侵襲子宮螺旋動(dòng)脈的能力，使得胎盤植入淺，血流灌注減少。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在妊娠第20 d，MMP-9 mRNA表達(dá)水平為：對(duì)照組＞黃芪組＞模型組，說明黃芪注射液能有效增加子癇前期大鼠胎盤組織MMP-9 mRNA的表達(dá)，與林娟[6]研究結(jié)論一致。

妊娠期胎盤低氧導(dǎo)致NF-κB被激活，不僅能降低滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤功能，同時(shí)誘發(fā)血管狹窄[7-8]。子癇前期孕婦滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡增加，PLGF mRNA表達(dá)隨之減少[9-11]。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，與空白組相比，子癇前期模型組胎盤組織內(nèi)sFlt-1因子水平明顯升高，表明sFlt-1與子癇前期發(fā)生具有相關(guān)性[12]。小鼠腎臟細(xì)胞之中，滲透壓升高能夠激活NFAT5，同時(shí)持續(xù)低氧影響，可能引起子癇前期或者胎兒生長受限等嚴(yán)重并發(fā)癥.并誘導(dǎo)NFAT5 mRNA表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)顯示，子癇前期大鼠胎盤組織sFlt-1 mRNA、NF-κB表達(dá)水平為：對(duì)照組＜黃芪組＜模型組，說明黃芪注射液可提高子癇前期大鼠胎盤組織Flt-1mRNA、NF-κB表達(dá)水平，與馬合紅等[11]研究觀點(diǎn)相符。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，在妊娠第20 d，模型組NFAT-5 mRNA表達(dá)水平明顯最高，PLGF mRNA表達(dá)水平明顯最低，且余下兩組未見顯著差異，提示黃芪注射液能抑制NFAT-5 mRNA表達(dá)，同時(shí)增強(qiáng)PLGF mRNA表達(dá)水平。

綜上所述，黃芪注射液能抑制子癇前期大鼠胎盤組織中 sFlt-1 mRNA、NFAT-5、NF-κB 的表達(dá)，增加PLGF mRNA、MMP-9表達(dá)，這可能是其治療子癇前期的作用機(jī)理。