徐達(dá)勛 李衛(wèi)星

摘要：為了篩選出防效較好的藥劑，給生產(chǎn)上防治黃瓜靶斑病提供合理有效的用藥方案，采用離體試驗和田間試驗相結(jié)合的方式，進(jìn)行3種不同的殺菌劑對黃瓜靶斑病病原菌的離體抑制試驗以及田間防效試驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，黃瓜產(chǎn)量與藥劑的防效能力呈極顯著正相關(guān)，其中3種不同的單一殺菌劑中以35%苯甲·咪鮮胺水乳劑500倍液防控黃瓜靶斑病效果最佳，最高防效達(dá)到87%，其對棒孢菌的生長抑制也是最強(qiáng);其次是43%氟菌·肟菌酯懸浮劑1 000倍液和甲基硫菌靈可濕性粉劑1 000倍液;三者以1 ∶3 ∶1的比例混配后對黃瓜靶斑病病原菌生長抑制效果最好，病害防控效果最高;3種藥劑對黃瓜植株的生長發(fā)育及果實的商品性均沒有明顯影響，即藥劑的安全性良好。所以在實際的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中適當(dāng)噴施安全性好的藥劑是避免經(jīng)濟(jì)損失的一種良好的防控措施。

關(guān)鍵詞：黃瓜靶斑病;病原菌生長抑制;田間防效;離體試驗;經(jīng)濟(jì)效益

中圖分類號： S436.421.1?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2019）20-0138-04

近年來，我國設(shè)施農(nóng)業(yè)發(fā)展迅速，蔬菜的種植方式也逐漸向設(shè)施方向發(fā)展。設(shè)施農(nóng)業(yè)有很多優(yōu)勢，例如可以有效地控制各種植物生長發(fā)育所需要的條件，然而在我國很多地方由于設(shè)施農(nóng)業(yè)技術(shù)和設(shè)備不夠發(fā)達(dá)，無法完全擺脫傳統(tǒng)自然條件的束縛，如控制光照、溫度等，在很多不良的條件下易發(fā)生各種病害[1]。黃瓜作為普遍且重要的蔬菜，其種植面積逐年增加，其中保護(hù)地栽培越來越占主導(dǎo)地位。近年來，在黃瓜的設(shè)施栽培中，靶斑病（俗稱“黃點子病”）日趨嚴(yán)重，嚴(yán)重影響黃瓜的產(chǎn)量和品質(zhì)，目前全國近20個?。ㄊ小^(qū)）已有靶斑病發(fā)生危害的報道，已成為黃瓜生產(chǎn)上最嚴(yán)重的病害之一。

黃瓜靶斑病名稱來源于其主要的發(fā)病癥狀，即在病斑的中間部位有1個淺色的靶心[2-3]。黃瓜靶斑病的主要病原菌是棒孢菌，這是半知菌亞門的一種真菌[4]，這種真菌喜歡溫度高、濕度大的環(huán)境，所以多發(fā)生在黃瓜生物量大的結(jié)瓜盛期，直接侵染黃瓜葉片，一旦條件適宜該病原菌會大量繁殖，成功定殖到黃瓜葉片后便迅速大量產(chǎn)孢，一般在5～7 d便會全面侵染大棚內(nèi)所有黃瓜植株，發(fā)生速度很快，田間發(fā)病率一般為10%～25%，嚴(yán)重時可達(dá)70%以上，大量葉片壞死、脫落，嚴(yán)重影響光合作用，使黃瓜產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降[5-7]。要防控靶斑病就要殺滅棚中的病菌孢子，防治措施就是種植前清園滅殘，利用熏蒸劑熏棚滅菌;選育優(yōu)良的抗性品種;適時輪作，2～3年就要輪換其他科的作物種植，讓病原菌失去寄主;加強(qiáng)條件管理，適時通風(fēng)換氣、控水排濕;化學(xué)治療，噴施已批準(zhǔn)的安全殺菌劑。要很好地防控發(fā)病，所有措施應(yīng)相互配合，但很多地方設(shè)施農(nóng)業(yè)條件有限，所以目前黃瓜靶斑病還是以化學(xué)防治為主。據(jù)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織（food and agriculture organization of the united nations，簡稱FAO）統(tǒng)計，包括農(nóng)藥在內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)對20世紀(jì)至今的糧食增產(chǎn)的貢獻(xiàn)率達(dá)到20%。

目前國內(nèi)針對黃瓜靶斑病已批準(zhǔn)登記的藥劑主要有35%氟菌·戊唑醇、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑（拜耳公司）、12%苯甲·氟酰胺（巴斯夫歐洲公司）、35%苯甲·咪鮮胺（青島泰生生物科技有限公司）、30%苯甲·嘧菌酯（山東億嘉農(nóng)化有限公司）、熒光假單胞桿菌（山東海利萊化工科技有限公司）。由于靶斑病會由真菌和細(xì)菌混合侵染發(fā)生，當(dāng)黃瓜靶斑病發(fā)生較重時普通藥劑效果不顯著，所以菌劑混配或選擇廣譜殺菌劑與特效藥聯(lián)合使用是最佳選擇。

無論選擇哪種藥劑，農(nóng)民希望病害得到控制的同時必須不影響黃瓜本身的生長及經(jīng)濟(jì)效益。本研究選用防治黃瓜靶斑病的特效藥35%苯甲·咪鮮胺水乳劑、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑、廣譜殺菌劑70%甲基硫菌靈可濕性粉劑進(jìn)行菌體和田間藥效聯(lián)合試驗，篩選出防效較好且對黃瓜安全的藥劑，或者合理有效的混配方案，為生產(chǎn)上防治黃瓜靶斑病提供科學(xué)依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

黃瓜品種為津優(yōu)三號（由天津市黃瓜研究所培育）。

供試菌種：黃瓜靶斑病菌棒孢菌（Corynespora cassiicola），從鹽城生物工程高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校園藝實習(xí)場的黃瓜靶斑病發(fā)病植株上采集病葉，采用常規(guī)組織分離方法分離純化菌株[8]，用柯赫氏法則回接鑒定，所得純培養(yǎng)物在馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基斜面上4 ℃保存。

供試藥劑：35%苯甲·咪鮮胺水乳劑（青島泰生生物科技有限公司）;43%氟菌·肟菌酯懸浮劑（拜耳公司）;70%甲基硫菌靈可濕性粉劑（陜西美邦農(nóng)藥有限公司）。

1.2?試驗方法

1.2.1?試驗設(shè)計

試驗共設(shè)5個處理：35%苯甲·咪鮮胺水乳劑500倍液（A）、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑1 000倍液（B）、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑1 000倍液（C）、A、B、C按1 ∶1 ∶3配比（D）;無菌水作空白對照（CK）。

1.2.2?殺菌劑對菌體的室內(nèi)抑制試驗

采用菌絲生長速率法測定供試藥劑等幾個處理對上述純化得到的黃瓜靶斑病菌菌絲生長的影響[9]。將PDA培養(yǎng)基高溫滅菌后冷卻至不燙手（40～50 ℃），把配好的藥劑加入培養(yǎng)基充分混勻，制成含藥劑10%的平板，以加入無菌水的PDA培養(yǎng)基作為對照。打取5 mm純化后培養(yǎng)的棒孢菌菌餅于PDA培養(yǎng)基中心，每個處理設(shè)5次重復(fù)，于黑暗、25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)6 d。采用十字交叉法測量每個處理的菌落直徑，按如下公式計算不同藥劑對靶斑病菌棒孢菌的菌絲生長抑制率：

菌絲生長抑制率=對照組菌落直徑-處理組菌落直徑對照組菌落直徑-0.5 cm×100%。

采用孢子萌發(fā)法測定不同藥劑對靶斑病菌棒孢菌孢子萌發(fā)的影響。將供試藥劑按10%的量加入到滅好菌冷卻（40～50 ℃）的PDB培養(yǎng)基中，加入無菌水作為對照，充分搖勻，每個處理重復(fù)5次。用移液器吸取100 μL孢子懸浮液（105個/mL）接種到不同PDB培養(yǎng)基中，于25 ℃恒溫條件下黑暗培養(yǎng)6 d，所得懸浮液經(jīng)4層滅菌紗布過濾，得到孢子懸浮液，用血球計數(shù)板法計數(shù)，按如下公式計算萌發(fā)抑制率：

孢子萌發(fā)抑制率=對照組孢子萌發(fā)數(shù)-處理組孢子萌發(fā)組對照組孢子萌發(fā)數(shù)×100%。

1.2.3?殺菌劑的田間防效試驗

田間試驗于2016年4月至2017年11月在鹽城生物工程高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校園藝實習(xí)場的日光溫室內(nèi)進(jìn)行，采用完全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計，每個處理重復(fù)3次，小區(qū)面積為16 m2，種植4行黃瓜，每行12株，株間距為40 cm，共48株。大棚管理按當(dāng)?shù)卦O(shè)施蔬菜常規(guī)管理方式進(jìn)行，所有小區(qū)在管理水平上均保持一致性。施藥次數(shù)為2次，第1次在花后期初果期，間隔7 d后進(jìn)行第2次配施，噴水作為對照。噴施藥液量為800 L/hm2。根據(jù)農(nóng)藥田間藥效試驗準(zhǔn)則[10]于施藥前和每次施藥7 d后調(diào)查發(fā)病率，共調(diào)查3次。調(diào)查采用隨機(jī)抽樣方法，每個小區(qū)5點取樣，每點分別調(diào)查2株，按照病害分級標(biāo)準(zhǔn)計算病情指數(shù)（disease index，簡稱DI）。按下面公式計算病情指數(shù)和防治效果（control efficacy，簡稱CE）：

病情指數(shù)=∑（發(fā)病級數(shù)×各級病葉數(shù)）調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級的值×100;

防治效果=1-對照組施藥前病情指數(shù)×處理組施藥后病情指數(shù)對照組施藥后病情指數(shù)×處理組施藥前病情指數(shù)×100%。

1.2.4?黃瓜植株生物學(xué)特性及商品性的測定

黃瓜植株的主蔓長、莖粗、節(jié)間長等用卷尺測量;葉面積用便攜式葉面積儀進(jìn)行測定，本研究中所涉及的葉面積均為葉片單面的面積;葉綠素含量的測定采用便攜式一型SPAD儀。

1.2.5?數(shù)據(jù)分析方法

本試驗采用IBM SPSS 20.0軟件及Excel 2007對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析并作圖。

2?結(jié)果與分析

2.1?不同殺菌劑對靶斑病菌棒孢菌的抑制作用

由圖1、表1可知，與對照（不添加藥劑的PDA）處理E相比，添加不同藥劑均明顯降低靶斑病菌棒孢菌的菌落直徑和產(chǎn)孢數(shù)。其中3種藥劑混配的抑制效果最好，菌絲生長抑制率達(dá)84%，菌絲產(chǎn)孢能力抑制率達(dá)84%。其他單一菌劑抑制效果以35%苯甲·咪鮮胺水乳劑500倍液最好，菌絲生長抑制率為71%，菌絲產(chǎn)孢能力抑制率達(dá)69%。其次是70%甲基硫菌靈可濕性粉劑1 000倍液、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑 1 000 倍液，菌絲生長抑制率分別為65%、53%，菌絲產(chǎn)孢能力抑制率分別為61%、50%。說明這些藥劑無論是靶斑病特效藥35%苯甲·咪鮮胺水乳劑、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑，還是廣譜殺菌劑70%甲基硫菌靈可濕性粉劑，對靶斑病菌棒孢菌生長的抑制率均在50%以上，所以只要在發(fā)病前期或者發(fā)病初期及時噴施農(nóng)藥，即使是廣譜殺菌劑，均會有效抑制靶斑病菌棒孢菌的生長，從而減少孢子數(shù)量，有效預(yù)防靶斑病的發(fā)生。假如病害已發(fā)生，最好采取多種殺菌劑混配使用的方法，這樣可以有效控制病害的進(jìn)一步擴(kuò)大侵染。

2.2?不同殺菌劑對黃瓜靶斑病的田間防治效果

由表2可知，在黃瓜靶斑病發(fā)生初期，使用35%苯甲·咪鮮胺水乳劑500倍液、43%氟菌·肟菌酯懸浮劑1 000倍液、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑1 000倍液單一菌劑或者三者混配，每隔7 d噴施1次，連續(xù)噴施2次就能有效控制病害發(fā)生，相對于施藥前的病情指數(shù)雖然沒有明顯降低，但防效明顯提高，而且田間觀察發(fā)現(xiàn)不同的藥劑處理不會影響黃瓜的生長發(fā)育，可正常生長結(jié)果。

相比不同殺菌劑對黃瓜靶斑病菌棒孢菌的生長抑制試驗，田間試驗取得相似的結(jié)果。相對于單一噴施其他2種菌劑的處理，噴施35%苯甲·咪鮮胺水乳劑處理的黃瓜植株第1次和第2次藥后7 d的發(fā)病指數(shù)均較低，防效最高。3種單一菌劑按一定比例混配后的防效最好，黃瓜植株發(fā)病率最低，防效可達(dá)到90.8%，比施用單一菌劑防效高4%～22%，可見抑制病原菌的生長才是防控的重點，預(yù)防很重要。

2.3?噴施不同殺菌劑對黃瓜植株生長及商品性的影響

田間防效試驗發(fā)現(xiàn)，噴施不同殺菌劑后的2～3 d內(nèi)會使植株葉片稍微皺縮，過幾天便會緩解皺縮癥狀。由表3可知，與不噴施藥劑的植株相比，噴施不同的藥劑對黃瓜植株的植物學(xué)性狀，如主蔓長、莖粗、節(jié)間長、SPAD值均沒有明顯影響，只會稍微降低葉面積。而不同藥劑處理之間各項指標(biāo)也沒有明顯差異。

不同藥劑對于植株生長沒有影響，是否會對黃瓜的商品性造成影響，則要測定黃瓜果長、橫莖粗、單果質(zhì)量以及表面特性。由表4可知，與不噴施藥劑的植株果實相比，噴施不同的藥劑對黃瓜的各項商品性指標(biāo)均沒有明顯影響，但噴施藥劑會稍微增加單果質(zhì)量。不同藥劑處理之間的其他各項指標(biāo)也沒有明顯差異。

2.4?噴施不同殺菌劑對黃瓜產(chǎn)量的影響

由表3、表4可知，噴施不同的藥劑后并不會對黃瓜植株的生長及果實商品性造成明顯影響，即不同藥劑的安全性良好。由圖2可知，與不噴藥劑相比，噴施藥劑后會明顯提高黃瓜產(chǎn)量。3種單一的藥劑噴施會提高約22%～29%的產(chǎn)量，3種藥劑混配后產(chǎn)量可提高約36%，即噴施安全性好、量適宜的藥劑會帶來良好的經(jīng)濟(jì)效益，避免一定的經(jīng)濟(jì)損失。

由圖3可知，黃瓜產(chǎn)量的提高與靶斑病的防控有直接關(guān)系，產(chǎn)量與病情指數(shù)呈極顯著負(fù)相關(guān)（P<0.01），與防效呈極顯著正相關(guān)的關(guān)系（P<0.01）。所以噴施安全性良好的藥劑是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中值得推廣的一種防控措施。

3?討論

早在20世紀(jì)60年代已經(jīng)有人報道黃瓜靶斑病的危害[11]，但未引起重視。目前隨著農(nóng)業(yè)的發(fā)展，黃瓜種植面積的不斷擴(kuò)大，黃瓜靶斑病呈日趨嚴(yán)重的態(tài)勢，特別是在保護(hù)地栽培中，在高溫、高濕條件下病害發(fā)生迅速。目前黃瓜靶斑病的特效藥種類并不多，常見的有苯甲·咪鮮胺，氟菌·肟菌酯、苯甲·嘧菌酯等。其中，35%苯甲·咪鮮胺水乳劑主要的防效機(jī)制是干擾病菌的正常生長，抑制孢子形成。本研究的病原菌離體試驗結(jié)果與此一致。42.8%氟菌·肟菌酯懸浮劑是一種呼吸鏈抑制劑，其主要的防效機(jī)制是作用于琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素bc1復(fù)合體[12-13]，抑制真菌生長。甲基硫菌靈是一種廣譜殺菌劑，其作用機(jī)制是結(jié)合病原菌的β微管蛋白，抑制真菌細(xì)胞分裂。

本研究發(fā)現(xiàn)3種殺菌劑對防治黃瓜靶斑病效果很好，可以有效控制黃瓜靶斑病的發(fā)生與發(fā)展，而且對黃瓜的生長和果實的商品性沒有不良影響，可以作為防治黃瓜靶斑病的有效藥劑推廣應(yīng)用。已有部分研究報道，苯甲·咪鮮胺可以防治黃瓜靶斑病[14]、香蕉葉斑病[15];氟菌·肟菌酯可以很好地防治黃瓜靶斑病[16-17];甲基硫菌靈作為廣譜殺菌劑可以防控多種植物病害，例如辣椒炭疽病[18]、黃瓜白粉病[19]、小麥散黑穗病[20]。

結(jié)果表明，3種藥劑混配使用防效最好。因此，對于黃瓜靶斑病的防治，在黃瓜花后期、果前期主要的病發(fā)初期對病葉和新葉噴施甲基硫菌靈等廣譜殺菌劑進(jìn)行保護(hù)性噴藥預(yù)防，一旦病害發(fā)生或者病害流行期使用特效藥或者不同藥劑按適當(dāng)比例混配，對植株進(jìn)行治療性殺菌防治，以便有效地控制該病的發(fā)生和危害，促使保產(chǎn)保收[21-22]，當(dāng)然配合良好的田間管理措施會取得更好的防治效果。

4?小結(jié)

本試驗施用的3種藥劑以35%苯甲·咪鮮胺水乳劑500倍液防控黃瓜靶斑病效果最好，其次是70%甲基硫菌靈可濕性粉劑1 000倍液，再次是43%氟菌·肟菌酯懸浮劑1 000倍液。但三者以1 ∶3 ∶1的比例混配后對黃瓜靶斑病病原菌生長抑制效果最好，病害防控效果最高。而且藥劑不會影響植株的生長發(fā)育及果實的商品性，良好的防效即可得到良好的經(jīng)濟(jì)效益，所以在農(nóng)業(yè)實際生產(chǎn)中可以施用以上不同的殺菌劑或者按照合理的比例混配。

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