張愛華　任志成　王壯等

摘要：采用菌絲生長速率法測定12種生物農(nóng)藥對西洋參（Panax quiquefolium L.）主要病害病原菌的抑制作用，并進(jìn)行了4種藥劑對西洋參根病的田間防效試驗(yàn)。室內(nèi)抑菌測定結(jié)果表明，嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌4種農(nóng)藥對西洋參黑斑病菌菌落生長均有較好的抑制作用。嘧菌酯、2%氨基寡糖素水劑對西洋參疫病菌的抑制效果較好。多黏類芽孢桿菌、熒光假單胞桿菌對西洋參銹腐病病原菌的抑制效果較好。田間試驗(yàn)結(jié)果表明，熒光假單胞桿菌250倍液對西洋參病害的田間防治效果最好，防效最高可達(dá)95.17%。

關(guān)鍵詞：生物農(nóng)藥；西洋參病害；室內(nèi)抑菌；田間防效

中圖分類號： S435.675文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2015）11-0197-04

收稿日期：2014-10-21

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號：31070316、31100239、31200224）；吉林省科技發(fā)展計(jì)劃 （編號：20110926、20130206030YY、20140520159JH）。

作者簡介：張愛華（1978—），女，山東泰安人，博士，副教授，研究方向?yàn)橹兴庂Y源生物技術(shù)。E-mail：blueice20021230@163.com。

通信作者：張連學(xué)，博士，教授，主要從事藥用植物資源研究。 E-mail：zlx863@163.com。西洋參（Panax quiquefolium L.）是五加科人參屬多年生草本植物，西洋參病害特別是西洋參根病是影響西洋參產(chǎn)量、質(zhì)量的重要因素[1-4]。導(dǎo)致西洋參根腐爛的主要包括銹腐病、黑斑病、疫病等，通稱根腐病[5-7]。西洋參根腐病研究在國內(nèi)外均有較多報道，目前生產(chǎn)上多采用化學(xué)農(nóng)藥防治西洋參根腐病，1年需施藥14次以上，病害高發(fā)期5 d左右即須噴藥1次，不但造成環(huán)境污染，而且?guī)磙r(nóng)藥殘留問題[8-9]。目前參農(nóng)仍然主要用代森類等化學(xué)源農(nóng)藥防治人參、西洋參根部病害，防治效果不理想，過度用藥造成的藥害現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生。如何有效控制人參、西洋參病害，保護(hù)生態(tài)環(huán)境，成為人參、西洋參生產(chǎn)中亟需解決的問題。用生物源農(nóng)藥防治人參、西洋參病害，具有無毒、無污染等優(yōu)點(diǎn)，可以明顯減輕農(nóng)藥對環(huán)境的污染，提高人參、西洋參的產(chǎn)量及品質(zhì)。但是目前中藥材病害防治中還沒有已成型的生物制劑可以大面積應(yīng)用。本研究對生物源農(nóng)藥進(jìn)行了篩選，以期對推動人參、西洋參產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試藥劑

107個/g多黏類芽孢桿菌細(xì)粒劑 （上海澤元海洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）；25%嘧菌酯懸浮劑[先正達(dá)（中國）投資有限公司生產(chǎn)]；2 %氨基寡糖素水劑（大連凱飛化學(xué)股份有限公司產(chǎn)）；3 000億個/g熒光假單胞桿菌粉劑（常州市蘭陵制藥有限公司生產(chǎn)

；2%春雷霉素液劑（南京柏藍(lán)科技有限公司生產(chǎn)

；80%乙蒜素乳油（河南科邦化工有限公司

；3%多抗霉素水劑（陜西康澤華工科技有限公司

；5%丙烯酸·香芹酚水劑（河北徐水縣農(nóng)藥廠

；88%水合霉素可溶性粉劑[華潤（上海

生物科技有限公司]；2%寧南霉素水劑（黑龍江強(qiáng)爾生化技術(shù)開發(fā)有限公司

；3%中生菌素可濕性粉劑（福建省凱立生物制品有限公司

；10%井岡霉素水劑（浙江省桐廬匯豐生物化工有限公司）；80%代森錳鋅可濕性粉劑[先正達(dá)（中國）投資有限公司生產(chǎn)]。

1.2供試菌種

西洋參疫病菌（Phytophthora cactorum）、黑斑病菌（Alternaria panax）、銹腐病菌（Cylindrocarpon destructans）均由筆者所在實(shí)驗(yàn)室提供，用馬鈴薯瓊脂固體培養(yǎng)基（PDA）培養(yǎng)病菌。

1.3方法

1.3.1西洋參病原菌抑菌活性測定采用生長速率法[10]測定西洋參病原菌抑菌活性。

1.3.1.1菌種的培養(yǎng)和菌餅的制備選皿底平坦、直徑為90 mm的潔凈培養(yǎng)皿，干燥滅菌，在無菌操作條件下，倒入PDA培養(yǎng)基，制成平板，待冷凝后接入供試菌種。置于25 ℃恒溫箱培養(yǎng)，待菌片均勻布滿培養(yǎng)皿時，用直徑為6 mm的打孔器在菌落邊緣切下帶菌培養(yǎng)基即為菌餅。

1.3.1.2帶毒培養(yǎng)基的制備在無菌條件下，待滅菌后的PDA培養(yǎng)基溫度降至55 ℃左右時，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基自然分布均勻時，用移液槍迅速加入相應(yīng)濃度的農(nóng)藥，小心搖勻，靜置等待培養(yǎng)基冷卻凝固。

1.3.1.3菌餅的移植待上述含菌培養(yǎng)基冷凝后，把打孔器中的菌餅（銹腐菌、黑斑菌、疫病菌）移入不同處理的帶毒培養(yǎng)基中，置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.3.1.4菌落直徑的測量及計(jì)算方法由于疫病病原菌生長速度較快，所以疫病病原菌菌落初始直徑為0.2 cm，12 h測量1次菌落直徑。24 h測量1次銹腐病原菌、黑斑病原菌的菌餅直徑，連續(xù)測量4次。 每個菌落按十字交叉法測量3次，取其平均數(shù)代表菌落直徑。抑菌率計(jì)算公式如下：

抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%。

1.3.2田間藥效試驗(yàn)

1.3.2.1試驗(yàn)地點(diǎn)及試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)在吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)藥用植物園進(jìn)行，試驗(yàn)地肥力中等，前茬作物為大豆，從移栽開始進(jìn)行試驗(yàn)。所有小區(qū)管理水平一致，藥后24 h無降雨，日平均氣溫在25 ℃左右。采取拉丁方隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，以更好地控制誤差。

1.3.2.2施藥與調(diào)查統(tǒng)計(jì)方法將藥劑稀釋成不同濃度，每7 d噴施1次農(nóng)藥，空白對照噴施等量清水。第3次噴藥前和最后1次噴藥后10 d分別調(diào)查并記錄每小區(qū)總株數(shù)、病株數(shù)。病株率、防治效果計(jì)算公式如下：

病株率=病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%；

防治效果=（空白對照區(qū)病株率-處理區(qū)病株率）/空白對照區(qū)病株率×100%。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2結(jié)果與分析

2.1農(nóng)藥的室內(nèi)抑菌篩選試驗(yàn)結(jié)果

農(nóng)藥的室內(nèi)抑菌篩選試驗(yàn)結(jié)果（表1）表明：化學(xué)源農(nóng)藥中，效果較好的是代森類藥，這與生產(chǎn)中所用農(nóng)藥相一致，因此本試驗(yàn)確定防治西洋參病害的主要農(nóng)藥為代森錳鋅。同時對生物源農(nóng)藥也進(jìn)行了篩選，其中春雷霉素、嘧菌酯、乙蒜素、多抗霉素、真菌凈、水合霉素、多黏芽孢桿菌、寧南霉素、中生菌素、井岡霉素、氨基寡糖素、熒光假單胞桿菌等13種農(nóng)藥均具有較好的室內(nèi)抑菌作用。筆者重點(diǎn)選用了嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌進(jìn)行了田間防治試驗(yàn)。定期噴施各種農(nóng)藥，調(diào)查發(fā)病率，防治蟲害的主要農(nóng)藥是辛硫磷。

2.24種農(nóng)藥對西洋參疫病病原菌的室內(nèi)抑制效果

由圖1可知，4種農(nóng)藥中，嘧菌酯、2%氨基寡糖素水劑各稀釋度藥液對西洋參疫病菌菌落的生長均具有一定的抑制作用，其中以高濃度300倍稀釋液抑菌效果較好，對西洋參疫病菌菌落生長的抑制率最高。多黏類芽孢桿菌300～500倍稀

表1不同農(nóng)藥的室內(nèi)抑菌篩選試驗(yàn)

處理抑菌圈直徑（cm）銹病黑斑病2%春雷霉素100倍液0B25%嘧菌酯100倍液B+A+80%乙蒜素100倍液AA+3%多抗霉素100倍液0A5%丙·香水劑600倍液B-A-88%水合霉素100倍液0A-107個/g多黏類芽孢桿菌100倍液0B+2%寧南霉素100倍液003%中生菌素100倍液B-B+10%井岡霉素100倍液002%氨基寡糖素水劑250倍液A-A-3 000億個/g熒光假單胞桿菌250倍液A-A-80%代森錳鋅600倍液AA+注：“A+”代表抑菌圈直徑>6 cm，“A-” 代表6≥抑菌圈直徑>3 cm，“B+” 代表3≥抑菌圈直徑>2 cm，“B-” 代表2≥抑菌圈直徑>1.5 cm。

釋液具有抑菌效果。各稀釋度的熒光假單胞桿菌藥液對疫病菌菌落生長均無抑制作用，這可能與熒光假單胞桿菌這類微生物農(nóng)藥的抑菌機(jī)理有關(guān)，由于熒光假單胞桿菌的生長速度遠(yuǎn)不及疫病病原菌，所以田間防治疫病應(yīng)該早防早治，以防為主。

2.34種農(nóng)藥對西洋參黑斑病病原菌的室內(nèi)抑制效果

由圖2可知，4種農(nóng)藥中嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、熒光假單胞桿菌對西洋參黑斑病菌菌落的生長均具有一定的抑制作用，其中嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌以1 000倍液、1 500倍液抑菌效果較好，熒光假單胞桿菌以300倍液抑菌效果較好。嘧菌酯、多黏類芽孢桿菌、2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌對西洋參黑斑病菌菌落生長的最高抑制率分別為6862%、55.52%、52.38%、55.52%。

2.44種農(nóng)藥對西洋參銹腐病原菌的室內(nèi)抑制效果

由圖3可知，多黏類芽孢桿菌、熒光假單胞桿菌500倍液對西洋參銹腐病病原菌的抑制效果較好，對西洋參銹腐病菌菌落生長的抑制率最高分別為45.59%、31.21%。多黏類芽孢桿菌對西洋參銹腐病病原菌的抑制作用和嘧菌酯相當(dāng)，處于較高水平。2%氨基寡糖素水劑1 000倍液對西洋參銹腐病病原菌的抑制效果較好，抑制率為15.61%。

2.5不同生物農(nóng)藥對西洋參病害的田間防治效果

由表2可以看出，第2次施藥后20 d，2%氨基寡糖素水劑500倍液、熒光假單胞桿菌250倍液與多黏類芽孢桿菌500倍液的防效均值差異顯著。第2次施藥后20 d，2%氨基寡糖素水劑各濃度對西洋參病害的田間防效均高于嘧菌酯。2%氨基寡糖素水劑500倍液對西洋參病害的防效均值最高達(dá)86.97%，嘧菌酯500倍液防效均值最高達(dá)76.65%。熒光假單胞桿菌250倍液的防效均值在4種農(nóng)藥各濃度防效均值中均最大。熒光假單胞桿菌250倍液初始防效為95.17%，最終防效為76.03%。多黏類芽孢桿菌500倍液的田間防效均值與嘧菌酯2 000倍液相當(dāng)，多黏類芽孢桿菌1 500倍液、嘧菌酯500倍液和嘧菌酯1 000倍液的防效均值相當(dāng)。4種農(nóng)藥對西洋參病害防治效果由強(qiáng)到弱依次是：熒光假單胞桿

菌> 2%氨基寡糖素水劑> 嘧菌酯> 多黏類芽孢桿菌。其中熒光假單胞桿菌250倍液效果最好，其次是2%氨基寡糖素水劑500倍液。

3結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，各濃度2%氨基寡糖素水劑、熒光假單胞桿菌對西洋參病害的田間防效比嘧菌酯稍好，多黏類芽孢桿菌500倍液、1 500倍液與各濃度嘧菌酯的防效均值接近，嘧菌酯各濃度的初始防效與其他3種生物農(nóng)藥的初始值較為接近，最終防效卻與3種生物農(nóng)藥產(chǎn)生了較大差異，這可能是因?yàn)?種生物農(nóng)藥對西洋參植株的防治效果較為持久，也有可能因?yàn)?種生物農(nóng)藥提高了西洋參植株對病害的抗性。

本研究的施藥頻率是依據(jù)常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥來確定的，由于化學(xué)農(nóng)藥與生物農(nóng)藥防病機(jī)理不同，可以嘗試減少生物農(nóng)藥的施藥次數(shù)來防治病害，不僅可以降低農(nóng)藥成本，還可以降低勞動強(qiáng)度。

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