徐春雨　金建麗　于成文　張雋勝　邢嚴(yán)　金志民

摘要：用聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳的方法對(duì)大倉(cāng)鼠（Cricetulus triton）消化系統(tǒng)中的SOD、EST和AMY 3種酶的酶譜進(jìn)行分析。結(jié)果表明，大倉(cāng)鼠消化系統(tǒng)中共分離出SOD1～SOD11、電泳遷移率0.909～0.023的11條譜帶;共分離出EST1～EST12、電泳遷移率0.742～0.188的12條譜帶;共分離出AMY1～AMY8、電泳遷移率0.564～0.154的8條譜帶。大倉(cāng)鼠消化系統(tǒng)中SOD、EST和AMY 3種酶均有表達(dá)，組織內(nèi)和組織間譜帶的表達(dá)強(qiáng)度和活性均有差異，并存在明顯的組織特異性。

關(guān)鍵詞：大倉(cāng)鼠（Cricetulus triton）;SOD;EST;AMY;電泳;譜帶

中圖分類號(hào)：S443.3;Q55? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）22-0152-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.22.036? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Study on distribution of enzymes in the digestive system of Cricetulus triton

XU Chun-yu1，JIN Jian-li1，YU Cheng-wen1，ZHANG Jun-sheng1，XING Yan2，JIN Zhi-min1

（1.Mudanjiang Normal College，Mudanjiang 157011，Heilongjiang，China;2.Mudanjiang No.2 Middle School，Mudanjiang 157012，Heilongjiang，China）

Abstract： To provide basic research data for big hamster（Cricetulus triton） experimental animal research and pest control. The enzyme profiles of SOD， EST and AMY in digestive system of hamster were analyzed by means of polyacrylamide gel vertical plate electrophoresis. Results showed that eleven bands of SOD1～SOD11 and electrophoretic mobility of 0.909～0.023 were isolated from the digestive system of hamsters;twelve bands of EST1～EST12 and electrophoretic mobility of 0.742～0.188 were isolated.eight spectral bands of EST1～EST11 and electrophoretic mobility of 0.564～0.154 were isolated. The three enzymes SOD， EST and AMY were expressed in the digestive system of hamster， and the expression intensity and activity of tissue and intertissue bands were different， with obvious tissue specificity.

Key words： big hamster（Cricetulus triton）; SOD; EST; AMY; electrophoresis; band

大倉(cāng)鼠（Cricetulus triton），屬倉(cāng)鼠科倉(cāng)鼠屬，是中國(guó)華北平原旱作區(qū)農(nóng)田主要害鼠之一[1]。研究消化酶的分布是探究動(dòng)物攝食、消化吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)，其活性強(qiáng)弱決定機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化的能力，從而影響機(jī)體的發(fā)育[2-5]。關(guān)于大倉(cāng)鼠已有較多研究報(bào)道[6，7]，但是對(duì)于大倉(cāng)鼠消化系統(tǒng)中酶的分布研究未見報(bào)道。本研究采用聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳方法，對(duì)大倉(cāng)鼠胃、小腸、大腸和肝臟4種組織中SOD、EST和AMY 3種酶的活性及分布進(jìn)行研究，為大倉(cāng)鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化研究及害鼠防治提供依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

大倉(cāng)鼠：2018年10月中旬至11月初捕于牡丹江三道關(guān)林場(chǎng)。

1.2? 方法

1.2.1? 樣品制備? 將大倉(cāng)鼠胃、大腸、小腸、肝臟4種組織與磷酸緩沖液（m∶V=1∶10）進(jìn)行混合研磨制成勻漿，然后在4 ℃、8 000 r/min的條件下離心20 min，留上清液4 ℃保存，待測(cè)。

1.2.2? 電泳方法? 采用常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠垂直板電泳方法將大倉(cāng)鼠胃、大腸、小腸、肝臟4種組織中SOD、EST、AMY進(jìn)行分離分析。

1.2.3? 染色方法? SOD、EST、AMY 3種酶的染色參照文獻(xiàn)[8]。

2? 結(jié)果與分析

2.1? SOD電泳結(jié)果分析

大倉(cāng)鼠4種組織SOD電泳譜帶分布及電泳遷移率見表1、圖1。由表1、圖1可知，大倉(cāng)鼠胃、小腸、大腸、肝臟4種組織共分離出SOD1～SOD11。胃分離出SOD2、SOD5～SOD7，遷移率分別為0.884、0.379～0.265的4條譜帶;小腸分離出SOD2、SOD5～SOD8、SOD10～SOD11，遷移率分別為0.884、0.379～0.091、0.030～0.023的7條譜帶;大腸分離出SOD1、SOD5～SOD8、SOD10～SOD11，遷移率分別為0.909、0.379～0.091、0.030～0.023的7條譜帶;肝臟分離出SOD2～SOD9，遷移率分別為0.884～0.038的8條譜帶。

大倉(cāng)鼠4種組織之間SOD酶活性表達(dá)強(qiáng)度為肝臟>大腸>小腸>胃，其中SOD5～SOD7為共有譜帶，遷移率0.379～0.265，肝臟表達(dá)活性最強(qiáng)。SOD1為大腸的特有譜帶，遷移率0.909;SOD9為肝臟的特有譜帶，遷移率0.038。

2.2? EST電泳結(jié)果分析

大倉(cāng)鼠4種組織EST酶電泳譜帶分布及電泳遷移率見圖2、表2。由圖2、表2可知，大倉(cāng)鼠胃、小腸、大腸、肝臟4種組織共分離出EST1～EST12。胃分離出EST2～EST5、EST7、EST9～EST12，遷移率分別為0.714～0.679、0.382、0.259～0.188的9條譜帶;小腸分離出EST1～EST5、EST7、EST9～EST12，遷移率分別為0.742～0.679、0.382、0.259～0.188的10條譜帶;大腸分離出EST2～EST5、EST9～EST12，電泳遷移率分別為0.714～0.679、0.259～0.188的8條譜帶;肝臟分離出EST3～EST6、EST8～EST12，電泳遷移率分別為0.696～0.661、0.321～0.188的9條譜帶。

大倉(cāng)鼠4種組織之間SET酶活性表達(dá)強(qiáng)度為小腸>肝臟>大腸>胃，其中EST9～EST12和EST3～EST5為共有譜帶，遷移率0.259～0.188和0.696～0.679，且小腸表達(dá)活性最強(qiáng)。EST1為小腸特有譜帶，遷移率0.742;EST6和EST8為肝臟特有譜帶，遷移率0.661、0.321。

2.3? AMY電泳結(jié)果分析

大倉(cāng)鼠的4種組織AMY酶電泳譜帶分布及電泳遷移率見圖3、表3。由圖3、表3可知，大倉(cāng)鼠胃、小腸、大腸、肝臟4種組織共分離出AMY1～AMY8。胃分離出AMY1～AMY8，電泳遷移率為0.565～0.154的9條譜帶;小腸分離出AMY5～AMY8，電泳遷移率為0.231～0.154的4條譜帶;大腸分離出AMY5～AMY8，電泳遷移率為0.231～0.154的4條譜帶;肝臟分離出AMY5～AMY6，電泳遷移率為0.231～0.205的2條譜帶。

大倉(cāng)鼠4種組織之間AMY酶活性表達(dá)強(qiáng)度為大腸>小腸>胃>肝臟，其中AMY5～AMY6為共有譜帶，遷移率0.231～0.205，大腸活性表達(dá)最強(qiáng)。AMY1～AMY4為胃的特有譜帶，遷移率0.564～0.496。

3? 小結(jié)與討論

SOD是生物機(jī)體抗氧化防御的酶，能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，能清除體內(nèi)產(chǎn)生的自由基。這因?yàn)楦闻K不但是機(jī)體消化腺，能夠分泌參與食物消化的酶，還是生物體內(nèi)最大的解毒組織，保護(hù)機(jī)體免受超氧陰離子自由基的損傷。大倉(cāng)鼠4種組織均有SOD分布，肝臟SOD的譜帶分布廣且SOD活性最強(qiáng)，這與肝臟功能相關(guān)。

EST參與生命活動(dòng)的基礎(chǔ)代謝，存在于各種組織中。小腸是機(jī)體消化食物和營(yíng)養(yǎng)吸收的主要場(chǎng)所，大量的酯類化合物在小腸進(jìn)行水解反應(yīng)，這需要大量的EST酶進(jìn)行催化，肝臟在糖類、脂類、蛋白質(zhì)等物質(zhì)代謝中起著重要作用。大倉(cāng)鼠小腸中EST酶的譜帶表現(xiàn)出較強(qiáng)的活性，這與小腸的功能相適應(yīng)。肝臟中EST酶的譜帶表達(dá)活性較強(qiáng)，而且分離出來(lái)的譜帶數(shù)多于胃和大腸，這與肝臟功能有關(guān)。

AMY是以淀粉或糖原為底物。食物進(jìn)入體內(nèi)先經(jīng)過胃的初步分解成可溶性淀粉，再到小腸進(jìn)行主要的消化和分解。大倉(cāng)鼠胃分離出的AMY譜帶最多，這與胃作為機(jī)體消化過程中的重要場(chǎng)所物質(zhì)代謝旺盛相符。肝臟參與淀粉的消化過程，經(jīng)腸道消化吸收的單糖到達(dá)肝臟轉(zhuǎn)化為肝糖原貯存，本研究小腸和大腸中AMY活性高于肝臟中AMY活性，這與周健愷等[9]關(guān)于銀鯧不同消化器官中消化酶活性的研究結(jié)果不同，但與于洋[10]關(guān)于平貝母不同階段培養(yǎng)體淀粉酶研究結(jié)果相同，有待于進(jìn)一步研究。

SOD、EST、AMY在大倉(cāng)鼠體內(nèi)均有表達(dá)，4種組織表達(dá)強(qiáng)弱不同，但在小腸中均有較強(qiáng)的表達(dá)。在4種組織中存在譜帶缺失的現(xiàn)象，這些差異是由有關(guān)基因表達(dá)和調(diào)控的差異造成的，酶活性存在的差異與組織的功能相關(guān)，顯示出4種組織功能及代謝活躍程度。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鄭智民，姜志寬，陳安國(guó).嚙齒動(dòng)物學(xué)[M].第2版.上海：上海交通大學(xué)出版社，2012.

[2] SABAT P，RIVEROS J M，L？譫PEZPINTO C. Phenotypic flexibility in the intestinal enzymes of the African clawed frog Xenopus laevis[J].Comparative biochemistry & physiology part A molecular & integrative physiology，2005，140（1）：135-139.

[3] 白曉慧.黑尾近紅鲌消化酶活性分布及其性質(zhì)研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[4] 王梅芳，余祥勇，楊榮權(quán).二色裂江珧EST和SOD同工酶組織特異性研究[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，20（1）：5-8.

[5] 金春華，鐘愛華，張海琪，等.大彈涂魚不同組織組織的同工酶研究[J].海洋科學(xué)，2004，28（3）：35-40.

[6] 王振龍，王大偉，張知彬.雄性大倉(cāng)鼠體重對(duì)其斗毆行為及社會(huì)等級(jí)的作用[J].獸類學(xué)報(bào)，2007（1）：26-32.

[7] 張建軍，梁? 虹，張知彬.食物限制對(duì)異性大倉(cāng)鼠氣味選擇的影響[J].動(dòng)物學(xué)雜志，2003，38（3）：33-37.

[8] 韓? 慶，魯密芳，張建平，等.池蝶蚌與三角帆蚌不同組織SOD及EST酶的比較研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，52（15）：3615-3618.

[9] 周健愷，徐善良.銀鯧不同消化器官中消化酶活性的分布及其比較[J].寧波大學(xué)學(xué)報(bào)（理工版），2014（4）：1-6.

[10] 于? 洋.組培平貝母不同階段培養(yǎng)體淀粉酶電泳及其活力的研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（7）：52-54.