韓麗麗，韓性運

1周口市中心醫(yī)院呼吸內科，河南 周口 466000

2周口職業(yè)技術學院附屬醫(yī)院內科，河南 周口 466000

非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是臨床常見的一種惡性腫瘤，嚴重威脅著患者的生命健康，導致患者的生活質量明顯下降[1-2]。在揭示NSCLC發(fā)病機制的過程中可以發(fā)現，腫瘤調控相關因子的改變能夠通過影響肺上皮細胞的生物學特征，導致細胞增殖、分化及浸潤過程異常，進而促進惡性腫瘤的發(fā)生[3]。組蛋白乙酰轉移酶hMOF能夠通過參與上皮細胞的分化、DNA損傷性修復或癌基因的突變誘導過程，增加上皮細胞惡性病變的風險[4]；p53是一種重要的抑癌基因，能夠通過誘導腫瘤細胞凋亡相關蛋白的激活，抑制腫瘤細胞的持續(xù)性增殖，促進腫瘤細胞凋亡[5-6]。一項關于p53蛋白與生殖系統(tǒng)惡性腫瘤關系的研究發(fā)現，p53蛋白表達水平升高與晚期卵巢漿液性腺癌患者的臨床分期密切相關[7]。目前，關于hMOF、p53蛋白表達與NSCLC關系的研究尚少。本研究對hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表達情況進行分析，并對其與NSCLC患者臨床特征的關系進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2018年1月周口市中心醫(yī)院收治的NSCLC患者。納入標準：①經病理組織學檢查確診為NSCLC；②手術前未行放化療等抗腫瘤治療；③病歷資料及手術標本保存完整。排除標準：①合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤；②合并肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴重疾病。根據納入和排除標準，本研究共納入NSCLC患者89例作為NSCLC組，并收集患者的NSCLC組織標本。另外，選取同期于周口市中心醫(yī)院行手術切除的肺良性病變患者47例作為對照組，所有患者均經病理組織學確診，且均未合并肝腎功能障礙、免疫系統(tǒng)疾病、血液系統(tǒng)疾病等其他嚴重疾??；其中肺大皰14例，肺結核12例，炎性假瘤15例，支氣管擴張6例，收集肺良性病變患者的肺良性病變組織標本。NSCLC組和對照組患者的性別、年齡、體重指數比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。

表1 兩組患者的基本臨床特征

1.2 免疫組織化學法檢測hMOF和p53蛋白表達

采用免疫組織化學法對NSCLC組織和肺良性病變組織中hMOF和p53蛋白的表達情況進行檢測。石蠟包埋組織，行連續(xù)性切片，厚度為3 μm，60℃烤片60 min，常規(guī)脫水后，采用乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）進行抗原修復，加入 10 μl蒸餾水，加入 10%過氧化氫 5 μl，室溫下孵育30 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌3次，每次3 min，加 入hMOF、p53單克隆抗體（1∶1000，購自羅氏公司），37℃孵育60 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的hMOF、p53二抗（1∶2000，購自羅氏公司），37 ℃孵育20 min，PBS洗滌3次，每次3 min，加入二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）后，PBS沖洗和復染，脫水后在顯微鏡下進行觀察。

1.3 免疫組織化學法檢測結果判定

hMOF、p53蛋白定位于細胞核，呈黃色顆粒狀；隨機選取5個高倍鏡視野，每個視野計數100個細胞，總計500個細胞，采用半定量積分法對染色強度和陽性細胞比例進行評分。染色強度評分：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例評分：＜10%為1分，11%～30%為2分，31%～50%為3分，≥51%為4分。最終得分為染色強度和陽性細胞比例得分之積，分數≥4分為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數據分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；采用多元Logistic回歸分析法對影響NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達的因素進行分析；相關性分析采用Spearman秩相關分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 hMOF、p53蛋白表達水平的比較

hMOF、p53蛋白均定位于細胞核，呈黃色顆粒狀。NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽性表達率分別為58.4%（52/89）和61.8%（55/89），均高于肺良性病變組織的14.9%（7/47）和12.8%（6/47），差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=23.732、29.894，P＜0.05）。（圖1）

圖1 NSCLC 組織和肺良性病變組織中hMOF和p53蛋白的表達情況（免疫組化染色，×400）

2.2 hMOF、p53蛋白表達與NSCLC患者臨床特征的關系

TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=14.634、17.311，P＜0.05）；TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結轉移NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=21.515、18.495、11.855，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的表達情況（n=89）

2.3 NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達影響因素的多因素分析

多元Logistic回歸分析結果顯示：TNM分期、分化程度均為NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達的獨立影響因素（OR=2.67、2.39，P＜0.01）；TNM分期、分化程度、淋巴結轉移均為NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達的獨立影響因素（OR=2.41、2.49、2.63，P＜0.01）。（表3、表4）

表3 89例NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達影響因素的多因素分析

表4 89例NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達影響因素的多因素分析

2.4 NSCLC組織中hMOF和p53蛋白表達的相關性分析

NSCLC組織中hMOF和p53蛋白的表達呈正相關（rs=0.838，P＜0.05）。（表5）

表5 NSCLC組織中hMOF和p53蛋白表達的相關性

3 討論

遺傳易感因素、長期吸煙等均能夠促進肺泡上皮細胞的持續(xù)性病變，增加NSCLC的發(fā)生風險。在合并有呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤家族史的人群中，NSCLC的發(fā)病率可進一步上升[8]。NSCLC患者臨床預后較差，其中位生存時間不足34個月，采用綜合性措施治療后，NSCLC患者的病死率仍超過35%[9-11]。免疫靶向治療能夠在肺癌患者的輔助治療過程中發(fā)揮重要作用，而本研究對NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的表達情況進行探討，不僅能夠為深入揭示NSCLC的發(fā)病機制提供參考，同時還能夠為NSCLC患者免疫靶向治療的靶點選擇提供參考。

hMOF為組蛋白乙酰轉移酶家族成員，其能夠通過激活上皮細胞內的不同信號通路，促進腫瘤細胞的異常增殖和分化，進而導致上皮來源惡性腫瘤的發(fā)生。hMOF蛋白可以通過乙?；揎椖[瘤細胞的DNA，提高癌基因上游轉錄因子的活性，進而增加癌基因的擴增風險。hMOF蛋白表達水平升高時，能夠通過誘導癌基因突變，降低癌基因的錯配修復能力，促進惡性腫瘤的病情進展。p53是抑癌基因家族成員，能夠判斷DNA的變異程度。當DNA變異較小時，p53可以促進細胞的自我修復；但當DNA變異較大時，p53則會誘導細胞凋亡[12]。姜愛英等[13]對hMOF、p53蛋白在NSCLC患者中的表達情況進行研究，結果發(fā)現hMOF、p53蛋白表達水平升高與NSCLC的發(fā)生過程密切相關，但缺乏對hMOF、p53蛋白表達與NSCLC患者臨床特征關系的研究。

本研究通過免疫組織化學法檢測了hMOF、p53蛋白在NSCLC患者NSCLC組織中的表達情況，并探討了hMOF、p53蛋白表達與NSCLC患者臨床特征的關系，結果顯示NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽性表達率均高于肺良性病變組織，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示hMOF、p53蛋白的表達水平升高均能影響NSCLC的發(fā)生過程，究其原因可能與hMOF、p53蛋白的下述幾個方面的作用有關[14-16]：①hMOF表達水平升高會導致組蛋白酶的修飾異常，過度的乙?；揎椖軌蛱岣呱嫌螁幼釉谀[瘤細胞中的活性，提高腫瘤細胞的擴增速度；②p53蛋白具有抑癌作用，但在NSCLC患者中p53蛋白的表達水平升高，這主要由于腫瘤細胞的過度增殖，能夠反饋性誘導p53蛋白的釋放，從而參與到腫瘤細胞的增殖調控過程。郁俊[17]研究表明，NSCLC患者NSCLC組織中，p53蛋白的陽性表達率可平均上升40%以上，特別是在合并有遠處轉移或腫瘤病情進展較為明顯的患者中，p53蛋白的表達水平升高更為明顯。在探討hMOF、p53蛋白表達與NSCLC患者臨床特征的關系中發(fā)現，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白的陽性表達率均分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化的患者，有淋巴結轉移NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白的陽性表達率高于無淋巴結轉移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示hMOF、p53蛋白表達水平均與NSCLC患者的病情進展有關，究其原因可能為hMOF、p53蛋白的表達水平升高能夠影響肺泡上皮細胞分化成熟，從而導致腫瘤細胞低分化的發(fā)生；而hMOF和p53蛋白可使腫瘤細胞的浸潤及侵襲能力發(fā)生改變，從而促進肺癌患者臨床分期的進展。多因素分析結果顯示，TNM分期、分化程度均為NSCLC患者NSCLC組織中hMOF蛋白表達的獨立影響因素（P＜0.05），而TNM分期、分化程度、淋巴結轉移均為NSCLC患者NSCLC組織中p53蛋白表達的獨立影響因素（P＜0.05），提示不同臨床病理因素可能對hMOF、p53的表達水平產生影響，而這主要由于相關臨床病理特征的進展能夠促進腫瘤細胞內腫瘤信號通路的激活，最終導致hMOF、p53的異常表達。本研究結果還顯示，NSCLC組織中hMOF和p53蛋白的表達呈正相關，提示兩者在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮了一定的協同作用，但具體作用機制尚未明確。

綜上所述，NSCLC患者NSCLC組織中hMOF、p53蛋白表達水平均明顯升高，且hMOF、p53蛋白的表達水平均與NSCLC患者的臨床分期及腫瘤細胞分化程度有關。