陸常輝，張?jiān)圃?/p>

（1.瀚暉制藥有限公司，浙江 杭州 310000；2.杭州和澤醫(yī)藥科技有限公司，浙江 杭州 310000）

普伐他汀鈉片為他汀類(lèi)降脂藥物，適用于飲食限制仍不能控制的原發(fā)性高膽固醇血癥（Ⅱa型和Ⅱb型）[1]。有關(guān)物質(zhì)是藥品質(zhì)量控制中重要的項(xiàng)目之一，為了嚴(yán)格控制藥物的質(zhì)量，對(duì)雜質(zhì)必須能夠有效分離，故對(duì)現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)檢查方法進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，從而保證有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定存在的問(wèn)題

1.1 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定要求[2]

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《中國(guó)藥典》2015年版藥品標(biāo)準(zhǔn)，按該方法測(cè)定普伐他汀鈉片有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果如下。

色譜條件：

儀器：戴安U3000，HPLC，賽諾飛。

色譜柱：Zorbax SB-C18 4.6 mm×75 mm 3.5 μm；波長(zhǎng)：238 nm；流速：1 ml/min。

溶劑：甲醇-水（50:50）

供試品溶液：精密稱定，加溶劑溶解并稀釋成每1 ml中1 mg的溶液。

流動(dòng)相A：水-磷酸緩沖液（取0.08 mol/L磷酸溶液，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈(52:30:18) ；

流動(dòng)相B：水-磷酸緩沖液（取0.08 mol/L磷酸溶液，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0)-乙腈（10 : 30 : 60）。

梯度洗脫程序如表1所示。

表1 梯度洗脫程序

1.2 測(cè)定結(jié)果

以下為3批普伐他汀鈉片（規(guī)格：20 mg）測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)圖1所示。通過(guò)色譜圖結(jié)果可知，用此梯度洗脫方法，普伐他汀峰后的雜質(zhì)峰（峰5）未能完全分離，無(wú)法對(duì)該雜質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確積分，定量。

圖1 有關(guān)物質(zhì)圖譜（中國(guó)藥典方法）

2 測(cè)定方法優(yōu)化

本次方法優(yōu)化的目的為使主成分（普伐他汀峰）與其后雜質(zhì)峰達(dá)到完全分離，首先在原色譜方法條件下，進(jìn)行了梯度優(yōu)化，在減小有機(jī)相變化速率的過(guò)程中，兩者分離度略有改善，但并不能達(dá)到完全分離。故對(duì)選擇性改變更顯著的色譜柱進(jìn)行篩選。

2.1 色譜柱選擇

選用不同品牌不同參數(shù)的色譜柱，分離度效果均不好，如選用色譜柱（Thermo Accucore C18 4.6 mm×100 mm 2.6 μm），主成分峰與后雜分離度未能改善；選用色譜柱（Thermo symcronis C18 4.6 mm×150 mm 3 μm），主成分峰與后雜分離度大于1.5，但主成分與前雜共出峰；選用色譜柱（Ultimate XB-C18 4.6 mm×250 mm 5 μm），主成分峰與后雜分離度未能達(dá)到分離度要求，但有所改善，故選用該色譜柱進(jìn)行進(jìn)一步梯度優(yōu)化。

2.2 梯度優(yōu)化

梯度方法1：

色譜柱：Ultimate XB-C18 4.6 mm×250 mm 5μm ；

其他參數(shù)不變，洗脫梯度如表2，相關(guān)色譜圖見(jiàn)圖2。

表2 梯度洗脫程序

梯度方法2：

色譜柱：Ultimate XB-C18 4.6 mm×250 mm 5 μm；

流動(dòng)相A：水-磷酸緩沖液（取0.08mol/L磷酸溶液，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈（50:30:20）；

流動(dòng)相B：水-磷酸緩沖液（取0.08mol/L磷酸溶液，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至7.0)-乙腈（10:30:60）。

其他參數(shù)不變，洗脫梯度如表3，相關(guān)色譜圖見(jiàn)圖2：

表3 梯度洗脫程序

選擇色譜柱（Ultimate XB-C18 4.6mm×250mm 5μm），在梯度2條件下主成分峰及其前后雜分離度均大于2，但主峰與后雜不能達(dá)到基線分離。在梯度3條件下，主成分峰及其前后雜分離度均大于2，且能達(dá)到基線分離。更換同品牌的不同批號(hào)的色譜柱考察，重現(xiàn)性良好。

圖2 有關(guān)物質(zhì)圖譜（梯度方法1/2）

2.3 優(yōu)化測(cè)定結(jié)果

（1）對(duì)已知雜質(zhì)進(jìn)行定位，見(jiàn)圖3。

（2）選用多批樣品，按優(yōu)化色譜方法進(jìn)行檢測(cè)。圖4為供試品圖譜。

系統(tǒng)適用性溶液中，雜質(zhì)I、雜質(zhì)II和雜質(zhì)III的分離度均大于2。供試品溶液中普伐他汀峰和其后雜完全達(dá)到分離，分離效果明顯改善。

（3）對(duì)優(yōu)化的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行專屬性考察

取本品（17PS03005-2）細(xì)粉適量（約相當(dāng)于普伐他汀鈉50 mg），置50 mL量瓶中，分別進(jìn)行酸破壞（加1 mol/L鹽酸溶液1 mL，室溫放置3小時(shí)），堿破壞（加1mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，室溫放置24小時(shí)），熱破壞（60℃水浴8小時(shí)），光照破壞（置25℃、10000 lux 日光燈下，照射5天），氧化破壞（加5%雙氧水1ml，室溫放置10分鐘），再加稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。按優(yōu)化的有關(guān)物質(zhì)方法進(jìn)行檢查，記錄色譜圖。結(jié)果見(jiàn)圖5，結(jié)果表明：各降解產(chǎn)物與普伐他汀鈉峰能達(dá)到完全分離，說(shuō)明本法專屬性強(qiáng)。

3 結(jié) 語(yǔ)

對(duì)《中國(guó)藥典》普伐他汀鈉片項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法進(jìn)行了優(yōu)化，以適用于本廠生產(chǎn)的藥品檢測(cè)。主要對(duì)色譜柱、洗脫梯度等色譜參數(shù)進(jìn)行了調(diào)整優(yōu)化。提高了普伐他汀鈉片有關(guān)物質(zhì)檢查測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性及可靠性。

圖3 系統(tǒng)適用性圖譜（梯度方法2）

圖4 有關(guān)物質(zhì)圖譜（梯度方法2）

圖5 有關(guān)物質(zhì)物質(zhì)方法-強(qiáng)制降解色譜圖（梯度方法2）