劉國民 宋慶慶 林文耀

摘? 要：豬圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）被認為是豬發(fā)生斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS）的病原體，PMWS也是全球主要的豬病之一。PCV2還與其他統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒?。≒orcine Circovirus Diseases，PCVD）的發(fā)生有關(guān)。然而，在研究PCVD的發(fā)展和對相關(guān)疾病的全面了解上需要考慮多方面的因素。流行病學(xué)調(diào)查表明，在引起PCVD的病原體中，最常見的包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）、豬流感病毒（Swine Influenza Virus，SIV）、豬細小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）、副豬嗜血桿菌、放線桿菌、胸膜肺炎菌、豬鏈球菌和豬肺炎支原體。

關(guān)鍵詞：PCV2疫苗;免疫接種;凈化

中圖分類號：S854.5+9 文獻標(biāo)志碼：C 文章編號：1001-0769（2019）11-0073-05

具體來說，與僅感染豬圓環(huán)病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）的仔豬比較，試驗感染PCV2和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）的仔豬表現(xiàn)為PCV2的復(fù)制和分布增強，臨床癥狀和病變更嚴重。

田間流行病學(xué)數(shù)據(jù)進一步驗證了這些試驗結(jié)果。一項回顧性調(diào)查顯示，發(fā)生斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS）的病例中有51.9%可以檢測到PRRSV。免疫組化、血清學(xué)和分子學(xué)研究都證明了暴發(fā)PMWS的豬場存在PRRSV。保育豬同時感染豬細小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）和PRRSV會增加PMWS的發(fā)病率。這些結(jié)果進一步證實共同感染PCV2和PRRSV或PPV是引發(fā)豬圓環(huán)病毒病（Porcine Circovirus Diseases，PCVD）的重要原因。

目前對PCVD的防控主要從管理策略、控制共同感染和疫苗接種等方面入手，其中疫苗接種是最主要的手段。從田間數(shù)據(jù)來看，所有商用PCV2疫苗都能降低豬的死亡率和淘汰率，顯著提高平均日增重，同時減少豬群的交叉感染。研究報道，PCV2疫苗能減少病毒血癥載量，緩解病毒誘導(dǎo)的特定淋巴病變，大部分已發(fā)表的相關(guān)文章還描述了它的體液免疫作用。Martelli等對田間條件下細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答在控制PCV2感染和其他相關(guān)疾病中的機制進行了研究。

在PRRSV的感染過程中，體液免疫和細胞免疫同時存在，但兩者在保護機體和消除病毒的機理上仍有矛盾。

在之前的文章中我們研究了接種豬和非接種豬自然感染PRRSV-1野毒株后的免疫應(yīng)答和臨床變化。結(jié)果顯示接種減毒活疫苗（Modified Live Virus，MLV）具有一定的臨床保護作用，整體預(yù)防率是72.0%。

當(dāng)前研究旨在田間條件下評估同時或單獨接種PRRSV疫苗和PCV2疫苗的豬與非接種豬的臨床表現(xiàn)、死亡率和平均日增重差異。用于試驗和接種計劃的疫苗都經(jīng)過了實驗室和田間檢測，然而，目前還沒有同行評議的文章描述兩種疫苗同時使用的效果。此外，考慮到上述兩種病毒和免疫系統(tǒng)之間的復(fù)雜的相互作用，本研究通過檢測接種后和自然感染后的總抗體和特異性IFN-γ分泌細胞（Secreting Cells，SC）來確定體液免疫和細胞免疫的變化。

1? 結(jié)果

具體試驗結(jié)果見圖1～圖10和表1。

2? 討論和結(jié)論

本研究探索了一種改良的PRRSV-1活疫苗和一種PCV2基因型亞單位疫苗同時接種的效力，包括在保育/育肥期間感染PRRSV和遭受PCVD影響時在桿狀病毒系統(tǒng)中衣殼蛋白的表達。本研究還對體液免疫和細胞免疫方面做了研究。兩種疫苗的同時使用顯示了其在臨床表現(xiàn)上（發(fā)病率減少）和生產(chǎn)力上（平均日增重提高和死亡率降低）的優(yōu)良成果。農(nóng)場動物暴露于各種病原體（如PCV2、PRRSV和豬肺炎支原體等）是誘發(fā)PCVD的主要因素。在本研究中，與PRRSV感染相關(guān)的臨床癥狀出現(xiàn)在8～16周齡豬上，而PCV2感染在15月齡豬上出現(xiàn)。在所有組別中，根據(jù)兩個時間段內(nèi)兩個毒株（PRRSV和PCV2）病毒血癥的出現(xiàn)來判斷發(fā)病率。

在仔豬3周齡同時接種1頭份PRRSV-1 MLV和PCV2疫苗可以減少疾病的發(fā)病情況。實際上，該方法的預(yù)防分數(shù)（PF）為40.4。另外兩種分別接種的方法，即B組和C組的預(yù)防分數(shù)分別為22.0和0.5。

接種組和對照組的平均日增重和其他結(jié)果的顯著差異與之前單獨接種PRRS疫苗和PCV2疫苗的研究一致。

另外，疫苗接種減少了整體的死亡率，這些顯著差異與豬死亡數(shù)減少有關(guān)，尤其是并發(fā)PCV2病毒血癥和出現(xiàn)PCVD相關(guān)癥狀時。本研究結(jié)果顯示接種PRRSV疫苗和PCV2疫苗的3周齡豬的死亡率比未接種豬的低3倍。

接種不同疫苗對受感染豬的比率和樣豬血液中PRRSV含量無影響。甚至與未接種疫苗的C組和D組相比，接種PRRSV疫苗的A組（同時接種PCV2疫苗）和B組（僅接種PRRSV疫苗）也沒有明顯緩解病毒血癥。該結(jié)果與Martellia等的田間試驗數(shù)據(jù)一致，但與Labarque等和Martelli等的實驗室數(shù)據(jù)相反，在實驗室條件下，對PRRS接種MLV疫苗可持續(xù)降低病毒持續(xù)時間以及在一些特殊情況下減少病毒血癥豬的數(shù)量。

根據(jù)每毫升血液中PCV2的含量，將感染豬分為亞臨床感染（小于106個DNA拷貝）、疑似感染（介于106～107個DNA拷貝）和PCV2相關(guān)疾?。ù笥?07個DNA拷貝）。

另外，該分類可用于預(yù)測預(yù)后，通常高滴度PCV2（大于107個DNA拷貝·mL-1）的豬預(yù)后不良。田間條件下接種PCV2疫苗的仔豬的顯著特征是能減少受感動物的比例和受感動物體內(nèi)的病毒含量?；趒PCR的方法是監(jiān)測疫苗功效最實用的工具，因為它可以從活體動物上獲取數(shù)據(jù)。目前的數(shù)據(jù)明確顯示接種PCV2疫苗或者其與PRRSV活疫苗共同接種可以明顯減少病毒血癥動物的比率和受感動物體內(nèi)的病毒含量。這種減少可以從平均日增重的提高和死亡率的降低看出來。

PRRSV的自然感染只在疫苗接種后很短時間內(nèi)發(fā)生，而且對血清轉(zhuǎn)化有些影響。

所有受檢動物在免疫接種時的qPCR檢測都呈PCV2陰性，這極有可能是母源抗體的影響。然而，給仔豬接種PCV2后無論母源抗體有多少都會引起血清轉(zhuǎn)化。因此，在大約? 10周齡（免疫接種6周后）達到頂峰后，保護作用開始下降。事實上，在16周齡后所有接種PCV2疫苗的動物都有了明顯的血清轉(zhuǎn)化功能，并且基于臨床證據(jù)有了一定的保護力。相反，對照組和B組（僅接種PRRSV疫苗）的保護作用逐漸降低，在幾周內(nèi)便達到了一個較低的水平。在感染后期，即18周齡時，本研究顯示未接種動物都沒有受到保護。這些結(jié)果證實了高母源抗體濃度不會干擾單劑量PCV2疫苗或PRRSV/PCV2疫苗同時接種誘導(dǎo)的主動免疫，這兩種方法都適用于血清反應(yīng)陽性的仔豬，即便在接種疫苗后4～5月發(fā)生感染也能獲得不錯的保護作用。

在本研究中，我們描述了由PRRSV疫苗和PCV2疫苗接種誘導(dǎo)的特異性細胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答和隨后的田間感染。

與之前描述的田間自然感染一樣，與未接種的豬相比，接種PRRSV疫苗的豬在感染期間IFN-γ SC的含量更高，免疫應(yīng)答更強。PRRSV自然感染出現(xiàn)于接種4周后，這可能是因為疫苗本身干擾了主動免疫的作用。

本文證明使用單劑量PCV2疫苗（C組）或與PRRSV疫苗共同使用（A組）在接種2～3周后會誘導(dǎo)PCV2特異性的細胞免疫應(yīng)答。這也說明PCV2特異性細胞免疫不受殘留母源抗體的影響，同時說明該方法可以提高疫苗誘導(dǎo)的保護作用，因為體液免疫無法針對PCV2感染提供全面保護。在未接種PCV2的動物中，IFN-γ SC的增長在感染后開始，這表明PCV2自發(fā)感染引起的免疫也會產(chǎn)生適應(yīng)性免疫。根據(jù)Fort等和Martelli等的試驗結(jié)果，IFN-γ SC應(yīng)激與病毒復(fù)制息息相關(guān)，因此IFN-γ SC含量在接種動物中保持在一個穩(wěn)定的狀態(tài)。相反，在對照組中病毒血癥癥狀明顯、病毒復(fù)制快，隨著PCV2抗體的增加，? ?IFN-γ SC的含量也升高。在本試驗中，我們很難排除交叉感染，因這種感染影響病毒的復(fù)制、臨床的異常狀態(tài)，但是我們關(guān)注的兩個主要感染（PRRSV和PCV2）發(fā)生在不同的時間段，也能通過疫苗接種區(qū)分開。

總而言之，本文所描述的PRRSV疫苗和PCV2疫苗同時接種是可以接受的，實際上也沒有不良反應(yīng)的記錄。另外，單獨接種同種疫苗對體液免疫和細胞介導(dǎo)免疫都沒有影響。統(tǒng)計數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，該方法可獲得良好的免疫應(yīng)答，獲得良好的保護力。同時接種減少了豬的死亡率、PCV2病毒血癥和病毒含量，提高了豬的生產(chǎn)性能和平均日增重。跟單獨接種PCV2疫苗相比，PRRSV的介入降低了整個試驗過程中動物的死亡率。這些結(jié)果都有力地證實了本方法可以減少疾病的負面影響，提高免疫應(yīng)答，增強動物健康，提高增重，降低死亡率和最小化經(jīng)濟損失。

原題名：Concurrent vaccinations against PCV2 and PRRSV： Study on the specificimmunity and clinical protection in naturally infected pigs（英文）