肖一紅，王玉超，彭 濤，孫法超，古金元，馬梓承，王宏宇，孟凡亮，李寶全，劉思當(dāng)

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東省動(dòng)物生物技術(shù)與疫病防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，泰安 271018）

豬流行性感冒簡(jiǎn)稱豬流感（swine influenza,SI），是由豬流感病毒(Swine influenza virus，SIV）感染豬引起的一種急性、熱性和高度接觸性呼吸道傳染病。豬流感屬于人畜共患病，并且豬的上呼吸道同時(shí)含有人流感病毒和禽流感病毒受體[1]。若人流感病毒和禽流感病毒同時(shí)感染豬，兩種流感病毒很有可能在豬的體內(nèi)發(fā)生基因重配，從而產(chǎn)生新的病毒株[2]。人群往往對(duì)重配的新病毒沒有免疫力，從而有可能導(dǎo)致流感大流行。因此，對(duì)豬流感進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查具有重要的公共衛(wèi)生意義，可為動(dòng)物與人流感大流行的預(yù)測(cè)和豬流感疫苗的研發(fā)提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要試劑類禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（2009/H1N1）和H3N2亞型SIV抗原均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所國(guó)家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 樣品來源2016年7月到2017年12月在山東省各市區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)，采集未免疫豬流感疫苗的血清共7000份，具體見表1。

1.3 血凝抑制檢測(cè)（HI）參照國(guó)標(biāo)GB/T27535-2011推薦的方法處理血清樣品，以去除血清中的非特異性抑制因子。根據(jù)相應(yīng)抗原的HA效價(jià)配制4 HAU的抗原，以完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI效價(jià)[3]。HI效價(jià)≥1∶10，判定為陽性。

2 結(jié)果與討論

2.1 三種亞型豬流感病毒血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果用類禽型豬H1N1（EA H1N1）SIV、2009甲型H1N1（2009/H1N1）SIV和H3N2亞型SIV為標(biāo)準(zhǔn)抗原，對(duì)7000份血清進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示3種豬流感亞型抗體總陽性率為63.79%，其中EA H1N1亞型SIV抗體陽性率為56.31%，2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率為24.61%，H3N2亞型SIV抗體陽性率為1.61%（表1）。

表1 2016～2017年山東省三種亞型豬流感病毒血清學(xué)抗體陽性率Table 1 Antibody positive rate of EA H1N1 SIV, 2009/H1N1 SIV and H3N2 SIV in Shandong province from 2016 to 2017

2.2 三種亞型豬流感病毒血清學(xué)抗體陽性重復(fù)率檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)在同一份血清中可同時(shí)檢測(cè)到兩種或兩種以上的豬流感亞型的抗體，EA H1N1亞型SIV和2009/H1N1亞型SIV抗體陽性重復(fù)率為17.34%，EA H1N1亞型SIV和H3N2亞型SIV抗體陽性重復(fù)率為1.29%，2009/H1N1亞型SIV和H3N2亞型SIV抗體陽性重復(fù)率為0.89%，EA H1N1亞型SIV、2009/H1N1亞型SIV與H3N2亞型SIV抗體陽性重復(fù)率為0.76%。

2.3 2016年下半年至2017年各季度三種亞型豬流感抗體陽性率檢測(cè)結(jié)果顯示，EA H1N1亞型SIV抗體陽性率總體處于上升的趨勢(shì)，并且在2017年第三季度達(dá)到最高；2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率則是先上升后下降；H3N2亞型SIV抗體陽性率也是先上升后下降，變化趨勢(shì)基本與2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率的變化趨勢(shì)相吻合（圖1）。

圖1 2016～2017年各季度三種亞型豬流感抗體陽性率變化圖1 Seasonal changes of antibody positive rate of EA H1N1 SIV, 2009/H1N1 SIV and H3N2 SIV during 2016-2017

2.4 不同豬場(chǎng)中三種亞型豬流感血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果2016年下半年至2017年累計(jì)檢測(cè)117個(gè)豬場(chǎng)的豬流感血清抗體。檢測(cè)結(jié)果顯示，EA H1N1亞型SIV在不同豬場(chǎng)間的抗體陽性率為0～97.78%；2009/H1N1亞型SIV在不同豬場(chǎng)的抗體陽性率為0～100%；H3N2亞型SIV在不同豬場(chǎng)的抗體陽性率為0～16.67%（表2）。檢測(cè)到EA H1N1亞型SIV抗體存在的豬場(chǎng)為115個(gè)，占所檢測(cè)豬場(chǎng)的98.29%；檢測(cè)到2009/H1N1亞型SIV抗體存在的豬場(chǎng)為107個(gè)，占所檢測(cè)豬場(chǎng)的91.45%；檢測(cè)到H3N2亞型SIV存在的豬場(chǎng)為49個(gè)，占所檢測(cè)豬場(chǎng)的41.88%。在所檢測(cè)的117個(gè)豬場(chǎng)當(dāng)中，有21個(gè)豬場(chǎng)的2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率高于EA H1N1亞型SIV的抗體陽性率。

在調(diào)查的117個(gè)豬場(chǎng)中，EA H1N1亞型SIV抗體陽性率在60%以上的豬場(chǎng)為38個(gè)，占所調(diào)查豬場(chǎng)的32.48%；EA H1N1亞型SIV抗體陽性率在40%以上的豬場(chǎng)有74個(gè)，占所調(diào)查豬場(chǎng)的63.25%；EA H1N1亞型SIV抗體陽性率小于20%的豬場(chǎng)有13個(gè)，占所調(diào)查豬場(chǎng)的11.11%，說明絕大部分的豬場(chǎng)EA H1N1的抗體陽性率處于一個(gè)相對(duì)較高的水平。在調(diào)查的117個(gè)豬場(chǎng)中，2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率在40%以下的豬場(chǎng)有94個(gè)，占所調(diào)查豬場(chǎng)的80.34%，說明絕大部分豬場(chǎng)中，2009/H1N1的抗體陽性率處于一個(gè)相對(duì)較低的水平。

對(duì)采集的樣品用EA H1N1、2009/H1N1和H3N2亞型SIV抗原進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，EA H1N1亞型SIV的抗體陽性率最高，其次為2009/H1N1亞型SIV，而H3N2亞型SIV的抗體陽性率較低，表明山東省豬群中H1亞型毒株具有一定的流行優(yōu)勢(shì)，這與其他文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)結(jié)果基本一致[4-6]。

表2 各豬場(chǎng)H1N1抗體陽性率分布情況Table 2 Distribution of antibody positive rate of H1N1 SIV

不同國(guó)家和地區(qū)流行的豬流感病毒類型不盡相同。自從1918年豬流感首次爆發(fā)以來，一直到20世紀(jì)90年代，北美地區(qū)流行的豬流感毒株都是以古典豬流感病毒為主，基本沒有變異情況的發(fā)生。1979年研究人員發(fā)現(xiàn)EA H1N1的亞型SIV，歐洲SIV的進(jìn)化速度開始發(fā)生變化。在北美地區(qū)則是從1998年發(fā)現(xiàn)1株三源重配H3N2亞型SIV開始，并且大部分的變異情況都是以基因重配為主。美國(guó)近年來發(fā)生多次人感染豬流感的事件，并且多以禽-人-豬三源重配的H1和H3亞型為主[7-9]。經(jīng)過基因重配的SIV，含有禽、豬或人流感病毒的基因，在選擇優(yōu)勢(shì)和跨種傳播能力明顯比單純的豬流感病毒更強(qiáng)。在我國(guó)，豬群中流行的豬流感毒株主要是H1和H3亞型。本次調(diào)查結(jié)果表明，EA H1N1亞型SIV是目前臨床上的優(yōu)勢(shì)流行毒株，這種流行不僅表現(xiàn)在同一個(gè)豬場(chǎng)中，也表現(xiàn)在不同的豬場(chǎng)中以及不同季節(jié)中。研究發(fā)現(xiàn)2017年第4季度EA H1N1亞型SIV抗體有上升趨勢(shì)，而2009/H1N1和H3N2亞型SIV抗體有下降趨勢(shì)，這些抗體變化意味著臨床上毒株流行情況發(fā)生變化，給SIV的監(jiān)控提供了重要的線索。

在目前我國(guó)豬群尚未普遍使用豬流感疫苗的情況下，對(duì)其進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)很有必要。通過對(duì)豬流感流行情況的調(diào)查，對(duì)于追溯SIV的來源以及疫苗的研發(fā)生產(chǎn)具有十分重要的意義。豬流感的血清學(xué)監(jiān)測(cè)需要持續(xù)采集大量的樣品，掌握各個(gè)亞型豬流感的流行比例。將SIV的監(jiān)測(cè)同人流感病毒與禽流感病毒的監(jiān)測(cè)結(jié)合起來，密切關(guān)注其流行動(dòng)態(tài)，對(duì)于動(dòng)物健康和預(yù)防人流感的流行具有十分重要的意義。