曲木 張寶龍 趙子續(xù) 侯樹旺 翟勝利

摘? 要：該試驗(yàn)旨在探究飼料中不同綠原酸、竹青素水平對(duì)紅白錦鯉免疫能力、抗氧化能力與脂質(zhì)代謝的影響。以紅白錦鯉為研究對(duì)象，以綠原酸、竹青素為飼料添加劑，配置9種試驗(yàn)飼料，選用規(guī)格一致、健康活潑的紅白錦鯉600尾，隨機(jī)分為10個(gè)試驗(yàn)組（其中9組為試驗(yàn)組，1組為對(duì)照組），每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚，于30個(gè)規(guī)格為0.85m×0.65m×0.45m的循環(huán)水養(yǎng)殖箱中養(yǎng)殖。飼喂8周后，取血液和組織等樣本，通過對(duì)組織及血清中T-AOC、CAT、MDA、T-SOD、GOT、GPT指標(biāo)的測(cè)定發(fā)現(xiàn)，Diet 2（竹青素/綠原酸水平為0.04%/0.06%）飼料組紅白錦鯉免疫力有所提升。

關(guān)鍵詞：綠原酸? 竹青素? 紅白錦鯉? 免疫力

中圖分類號(hào)：S917.4 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2019）10（a）-0199-06

錦鯉（Cyprinus carpio L）作為一種觀賞魚以體色艷麗為美，而錦鯉一旦患病，其體色會(huì)大大降低，有時(shí)甚至可以直接影響錦鯉售賣，因此，該試驗(yàn)研究了綠原酸和竹青素這兩種天然免疫增強(qiáng)劑對(duì)紅白錦鯉免疫指標(biāo)的影響，以期為研發(fā)錦鯉增色提供理論參考。

1? 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚與養(yǎng)殖管理

該試驗(yàn)以紅白錦鯉為養(yǎng)殖對(duì)象，試驗(yàn)魚購自天津市金水族水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，選取規(guī)格一致、健康活潑的紅白錦鯉600尾，運(yùn)往天津市晨輝飼料有限公司循環(huán)水養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室后消毒，暫養(yǎng)一周后隨機(jī)分為10組（其中9組為試驗(yàn)組，1組為對(duì)照組），每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚，于30個(gè)規(guī)格為0.85m×0.65m×0.45m的循環(huán)水養(yǎng)殖箱中養(yǎng)殖?；A(chǔ)飼料訓(xùn)化2周后，開始正式試驗(yàn)，養(yǎng)殖周期為8周。養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖水體氨氮含量為0.2mg/L、亞硝酸鹽含量為0.1mg/L、pH值為8.4，養(yǎng)殖水溫為25℃～29℃，每日底缸換水一次，換水量為1/3。飼料投喂時(shí)間為每日8：00與16：00，飼料投喂方法為飽食法，每日投喂后飼料稱重。

1.2 試驗(yàn)飼料

該試驗(yàn)以竹青素（有效含量40%）、綠原酸（有效含量50%）為影響因素，采用雙因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)中的“3×3因子設(shè)計(jì)”，設(shè)計(jì)9種飼料，每個(gè)因素各設(shè)3個(gè)水平，分別為竹青素（0.04%、0.06%、0.08%）、綠原酸（0.03%、0.06%、0.09%），依次記為Diet 1、Diet 2、Diet 3、Diet 4、Diet 5、Diet 6、Diet 7、Diet 8、Diet 9，以不含竹青素和綠原酸的基礎(chǔ)飼料做對(duì)照飼料，飼料成分見表1。

1.3 樣本采集及指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 樣本采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)取9尾魚，共27尾。血樣采集方法為尾靜脈采血，解剖后取肝胰臟、中腎、脾、肌肉、腸組織，血液在4℃、4000r/min條件下離心15min，取上清液，制成血清樣本，存放于-20℃冰箱中冷凍保存，待測(cè)。

1.3.2 指標(biāo)測(cè)定

該試驗(yàn)測(cè)定了紅白錦鯉血清和組織中總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）、過氧化氫酶（Catalase，CAT）、丙二醛（Malonaldehyde，MDA）、總超氧化物歧化酶（Total superoxide dismutase，T-SOD）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-oxalacetic transaminase，GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Glutamic-pyruvic transaminase，GPT）6個(gè)指標(biāo)。血清在室溫條件下融化后直接進(jìn)行測(cè)定，組織指標(biāo)測(cè)定按組織：0.85%生理鹽水=1∶4比例配制成20%勻漿液，根據(jù)試劑盒測(cè)定需要在此基礎(chǔ)上進(jìn)行稀釋，指標(biāo)測(cè)定嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所所研制的試劑盒說明書進(jìn)行。

2? 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 飼料不同竹青素、綠原酸水平對(duì)紅白錦鯉T-AOC的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表2）：紅白錦鯉肝胰臟中T-AOC在Diet 2飼料組達(dá)到最高，與Diet 1和Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）;中腎中T-AOC在Diet 2飼料組達(dá)到最高，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）;脾中T-AOC在Diet 9飼料組達(dá)到最高，與Diet 2、Diet 4、Diet 5飼料組差異不明顯（P>0.05）;血清中T-AOC在Diet 2飼料組達(dá)到最高，與Diet 1、Diet 8、Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05）;紅白錦鯉肌肉中T-AOC活性在Diet 1時(shí)達(dá)到最高，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中T-AOC有顯著影響（P<0.05），但對(duì)脾中T-AOC影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.04%、0.04%、0.06%、0.04%、0.04%;綠原酸各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中T-AOC有顯著影響（P<0.05），但對(duì)于脾中T-AOC影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.03%、0.06%、0.03%、0.06%、0.03%;二者的交互作用對(duì)紅白錦鯉組織和血清中T-AOC也有顯著影響（P<0.05）。

2.2 飼料不同竹青素、綠原酸水平對(duì)紅白錦鯉CAT活性的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表3）：紅白錦鯉肝胰臟、中腎、脾、血清中CAT活性均在Diet 2飼料組達(dá)到最高，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）;肌肉中CAT活性在Diet 2飼料組達(dá)到最高，與Diet 5、Diet 8飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中CAT活性有顯著影響（P<0.05），但對(duì)肌肉中CAT活性影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.04%、0.04%、0.04%、0.04%、0.04%;綠原酸各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中CAT活性均有顯著影響（P<0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.09%、0.06%、0.06%、0.06%;二者的交互作用對(duì)紅白錦鯉組織和血清中CAT活性也有顯著影響（P<0.05），但對(duì)于肌肉中CAT活性影響不顯著（P>0.05）。

2.3 飼料不同竹青素、綠原酸水平對(duì)紅白錦鯉MDA含量的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表4）：紅白錦鯉肝胰臟中MDA的含量在Diet 4飼料組達(dá)到最低，且與其他飼料組差異不顯著（P<0.05）;中腎中MDA的含量在Diet 1飼料組達(dá)到最低，與Diet 2飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著低于其他飼料組（P<0.05）;脾中MDA的含量在Diet 2飼料組顯著降低，與Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05）;血清中MDA的含量在Diet 2飼料組達(dá)到最低，與Diet 7和Diet 9差異不顯著（P>0.05）;肌肉中MDA的含量在Diet 8飼料組達(dá)到最低，與對(duì)照組、Diet 2、Diet 4、Diet 8飼料組差異不顯著（P>0.05）。

竹青素各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中MDA的含量有顯著影響（P<0.05），但對(duì)肌肉中MDA的含量影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.04%、0.08%、0.08%、0.06%;綠原酸各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中MDA的含量有顯著影響（P<0.05），但對(duì)脾中MDA的含量影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.03%、0.03%、0.06%、0.06%;二者的交互作用對(duì)紅白錦鯉組織和血清中MDA的含量也有顯著影響（P<0.05）。

2.4 飼料不同竹青素、綠原酸水平對(duì)紅白錦鯉T-SOD活性的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表5）：紅白錦鯉肝胰臟中SOD活性在Diet 9飼料組時(shí)達(dá)到最大，與Diet 2、Diet 7飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）;中腎中SOD活性在Diet 1飼料組達(dá)到最大，與Diet 2、Diet 6飼料組差異不顯著（P>0.05）;脾中SOD活性在Diet 2飼料組達(dá)到最大，與Diet 5飼料組差異不顯著（P>0.05）;血清中SOD活性在Diet 6時(shí)達(dá)到最大，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）;肌肉中SOD活性在Diet 7飼料組達(dá)到最大，且顯著高于其他飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中SOD活性均有顯著影響（P<0.05），最優(yōu)水平分別為0.08%、0.04%、0.04%、0.06%、0.08%;綠原酸各水平對(duì)紅白錦鯉組織和血清中SOD活性均有顯著影響（P<0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.09%、0.06%、0.06%、0.03%;二者的交互作用對(duì)紅白錦鯉組織和血清中SOD活性也有顯著影響（P<0.05）。

2.5 飼料不同竹青素、綠原酸水平對(duì)紅白錦鯉GOT、GPT活性的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表6）：紅白錦鯉肝胰臟中GOT活性在Diet 2飼料組達(dá)到最高，與Diet 1飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）;血清中GOT活性在Diet 2飼料組達(dá)到最低，與Diet 9飼料組差異不顯著（P>0.05），但顯著高于其他飼料組（P<0.05）。肝胰臟中GPT活性在Diet 4飼料組達(dá)到最低，且顯著低于Diet 7、Diet 8飼料組（P<0.05）;血清中GPT活性在Diet 6飼料組最低，且顯著低于Diet 3、Diet 7飼料組（P<0.05）。

竹青素各水平對(duì)紅白錦鯉肝胰臟中GOT、GPT及血清中GOT活性均有顯著影響（P<0.05），但對(duì)血清中GPT活性影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平均為0.04%;綠原酸各水平對(duì)紅白錦鯉肝胰臟中GOT、GPT活性有顯著影響（P<0.05），但對(duì)血清中GOT、GPT活性影響不顯著（P>0.05），最優(yōu)水平均為0.06%;二者的交互作用對(duì)紅白錦鯉組織和血清中GOT、GPT活性也有顯著影響（P<0.05）。

3? 討論

綠原酸主要來源于植物，是一種具有抗氧化、抗菌抗病毒和免疫調(diào)節(jié)等作用的新型環(huán)保添加劑[1]，竹青素是以剛竹屬竹子為原料萃取而來的有效成分，是一種卓越的生物抗氧化劑、脂代謝調(diào)節(jié)劑和免疫功能增強(qiáng)劑[2]。

吳衛(wèi)星用綠原酸、多糖、黃酮等制成復(fù)方中草藥飼喂鯉魚，測(cè)定SOD、CAT、GPT活力，發(fā)現(xiàn)0.2%的復(fù)方中草藥添加組鯉魚生長(zhǎng)、免疫力得到顯著提升[3];張純等研究發(fā)現(xiàn)低劑量綠原酸隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)對(duì)SOD提高作用逐漸增強(qiáng)，添加適量的綠原酸可顯著提高建鯉血漿CAT活力，建鯉血漿中T-AOC顯著升高，MDA含量顯著降低，提高建鯉抗氧化能力的綠原酸最適添加量為200～400mg/kg[4];楊天俊等研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)飼料中綠原酸含量為400mg/kg時(shí)可顯著地提高了草魚幼魚血清CAT和肝胰臟中SOD活力，降低血清及肝胰臟中MDA的含量[5];李乃順等人在對(duì)草魚的研究中報(bào)道了0.04%綠原酸可顯著提高草魚魚種肝胰臟SOD活性[6];韓兆紅在團(tuán)頭魴的飼料中添加了福樂星（主要成分綠原酸、生物堿和黃酮的），其研究成果表明中草藥提取物能夠顯著增強(qiáng)團(tuán)頭魴SOD活力[7]。張英等研究發(fā)現(xiàn)，竹提取物對(duì)SOD的活性具有顯著的誘導(dǎo)作用[8]。黃駱鐮等研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平竹青素可以降低肉雞血清中MDA的含量，同時(shí)發(fā)現(xiàn)1.5g/kg和3g/kg添加量極顯著地提高了肉雞血清中SOD活性[9]。該試驗(yàn)結(jié)果與上述試驗(yàn)結(jié)果相似，由此可，見飼料中添加適量綠原酸可有效改善紅白錦鯉組織抗氧化能力。Aitani等報(bào)道了口服綠原酸可減少大鼠內(nèi)臟脂肪的蓄積，降低大鼠機(jī)體脂質(zhì)含量[10]。楊天俊等研究發(fā)現(xiàn)高脂飼料中添加不同濃度綠原酸均能提高草魚幼魚肝胰臟中GOT、GPT活性[5]，而該試驗(yàn)結(jié)果與以上結(jié)果相似，表明綠原酸和竹青素對(duì)紅白錦鯉免疫力提升確有促進(jìn)作用。

4? 結(jié)語

該試驗(yàn)測(cè)定了能提現(xiàn)錦鯉體質(zhì)健康程度的5個(gè)生理生化指標(biāo)，通過試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在該試驗(yàn)條件下，紅白錦鯉飼料中最適竹青素、綠原酸添加，搭配為0.04%/0.06%。

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