薛文 蘇曉慧 秦菊 努爾麥麥提·阿穆提 居馬別克·夏拉巴依 王文

摘 要 2019年8月12日，經(jīng)國(guó)家外來動(dòng)物疫病研究中心檢測(cè)，確診新疆伊犁州發(fā)生牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情，這是新疆首次發(fā)現(xiàn)該病。疫情確診后，對(duì)病牛所在縣及其相鄰縣全部牛只進(jìn)行緊急免疫山羊痘疫苗。為了了解免疫后抗體水平，驗(yàn)證檢測(cè)試劑盒特異性，選取3個(gè)規(guī)?；?chǎng)及1個(gè)規(guī)?；驁?chǎng)，采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法，對(duì)76份牛血清樣本和36份羊血清樣本進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，測(cè)試的雙抗原ELISA檢測(cè)試劑盒，可以檢測(cè)到16份牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒感染抗體和21份山羊痘病毒免疫抗體，未能檢出山羊痘免疫牛血清中相關(guān)抗體。

關(guān)鍵詞 牛結(jié)節(jié)性皮膚??；抗體檢測(cè)；免疫抗體；LSDV 特異性抗體

2019年8月3日，新疆伊犁哈薩克自治州報(bào)告在伊犁察布查爾縣瓊博拉鎮(zhèn)入戶排查時(shí)，發(fā)現(xiàn)部分牛養(yǎng)殖戶有1-2頭發(fā)病，患牛皮膚出現(xiàn)廣泛性結(jié)節(jié)（疙瘩）、流鼻涕、流涎、食欲減退及發(fā)燒等臨床癥狀，初步診斷為疑似牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙SD）。疫情確診后，采用國(guó)家批準(zhǔn)的山羊痘疫苗（按照山羊的5倍劑量），對(duì)病牛所在縣及其相鄰縣全部牛只進(jìn)行緊急免疫。為了驗(yàn)證檢測(cè)試劑盒特異性，選取46份LSDV感染牛血清，66份免疫血清樣本（36份羊血清，30份牛血清），采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法對(duì)血清樣本進(jìn)行了檢測(cè)，為做好LSD防控提供一些數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 分組及樣品采集

1.1.1 感染組（牛結(jié)節(jié)性皮膚病感染抗體檢測(cè)）。在伊犁州霍城縣某發(fā)病牛場(chǎng)采集感染LSDV牛血清24份，在伊犁州察縣某發(fā)病牛場(chǎng)采集感染LSDV牛血清22份。

1.1.2 試驗(yàn)羊組（山羊痘免疫抗體檢測(cè)）。選自新疆昌吉州奇臺(tái)縣某規(guī)模羊場(chǎng)，選取整群綿羊36只，采用皮內(nèi)注射進(jìn)行山羊痘疫苗第1次免疫，疫苗免疫40天后采集血樣。

1.1.3 試驗(yàn)牛組（牛免疫山羊痘抗體檢測(cè)）。選自新疆伊犁州察縣1個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)選取30頭，采用皮內(nèi)注射進(jìn)行山羊痘疫苗（按照山羊的5倍劑量免疫）第1次免疫，疫苗免疫30天后，采集血樣。

1.2 疫苗及檢測(cè)試劑

疫苗來源來自政府統(tǒng)一招標(biāo)采購(gòu)的山羊痘疫苗。

診斷試劑 羊痘屬抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自法國(guó)ID.VET公司，生產(chǎn)批號(hào)F05。

1.3 檢測(cè)方法

采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法，以羊痘病毒純化抗原作為包被抗原，檢測(cè)牛、綿羊、山羊和其它敏感物種血清中的羊痘病毒、牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒、綿羊痘病毒、山羊痘病毒抗體。

1.4 儀器設(shè)備

全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Thermo）、高速自動(dòng)化清洗酶標(biāo)板（瑞士帝肯）、微量移液器等。

2 結(jié)果

2.1 感染組

共檢測(cè)2個(gè)場(chǎng)點(diǎn)的46份牛血清樣品，檢出抗體陽性16份。

2.2 試驗(yàn)羊組

共檢測(cè)1個(gè)場(chǎng)點(diǎn)的36份羊血清樣品，檢出抗體陽性21份。

2.3 試驗(yàn)牛組

共檢測(cè)1個(gè)場(chǎng)點(diǎn)的30份牛血清樣品，檢出抗體陽性0份。

3 討論和建議

此次牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情為新疆首例。通過采取“免疫+改良捕殺”的防控策略，即在伊犁地區(qū)緊急免疫山羊痘疫苗（按照山羊的5倍劑量免疫），同時(shí)采取僅對(duì)發(fā)病牛進(jìn)行捕殺的政策，限制動(dòng)物移動(dòng)。由于天氣轉(zhuǎn)冷蚊蟲等傳播媒介減少，LSD疫情呈明顯的季節(jié)性[1]。該疫情已得到有效控制。通過入戶排查結(jié)合熒光PCR試驗(yàn)檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)新增LSD病例。

本次檢測(cè)用的雙抗原ELISA檢測(cè)試劑盒，未能檢出山羊痘免疫牛只血清中相關(guān)抗體。這可能是由于山羊痘疫苗為弱毒苗，主要是細(xì)胞介導(dǎo)，可在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生免疫作用，但抗體產(chǎn)生的滴度水平低。有報(bào)道顯示，首次免疫山羊痘活疫苗產(chǎn)生的抗體滴度不均，14-21天達(dá)到抗體水平峰值，51天左右出現(xiàn)免疫空擋，且免疫后期抗體滴度水平較低[2]，這與疫苗種類、畜禽機(jī)體、飼養(yǎng)管理等影響較大[3]。另一方面，山羊痘僅免疫牛只一次，產(chǎn)生抗體的滴度低，尤其是對(duì)輕度和持續(xù)期較長(zhǎng)的LSDV感染，使用ELISA方法檢測(cè)抗體水平來評(píng)價(jià)疫苗免疫效果不佳。此外，皮內(nèi)操作困難，容易注入肌肉，造成免疫效果不確實(shí)或免疫失敗[4]。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，可以檢測(cè)到牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒感染抗體和山羊痘病毒免疫抗體，現(xiàn)階段該試劑盒可作為牛結(jié)節(jié)性皮膚病發(fā)病早期的血清學(xué)診斷方法和山羊痘免疫羊后抗體的檢測(cè)方法。建議首免21天后加強(qiáng)免疫一次，再進(jìn)行抗體測(cè)定；同時(shí)采用中和試驗(yàn)結(jié)合臨床觀察結(jié)果確認(rèn)評(píng)價(jià)疫苗免疫保護(hù)效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]袁麗萍，宋建德.2015-2016年歐洲牛結(jié)節(jié)性皮膚病流行狀況分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2017，34（8）：32-35.

[2]劉忠偉.山羊痘疫苗免疫保護(hù)能力試驗(yàn)[D].貴州：貴州大學(xué)，2006：1-70

[3]程國(guó)奎，于建文，柴紹芳。山羊痘疫苗抗體時(shí)效性研究與探索[J]. 中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2017，36（5）：56-57

[4]趙燕，柴紹芳，郭憲.山羊痘病毒的血清學(xué)檢測(cè)與PCR鑒定[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2018，37，（3）：63-64

第一作者：薛文（1987-），女，漢族，河南正陽，本科學(xué)歷，助理獸醫(yī)師，從事病毒性人獸共患病研究。

通訊作者：王文（1968-），女，農(nóng)業(yè)推廣研究員，從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)和防控技術(shù)的研究。