胡鵬飛，李文舉

(1.貴州省盤縣農(nóng)業(yè)局動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 盤縣 553537;2.貴州省盤縣農(nóng)業(yè)局獸藥飼料監(jiān)察所，貴州 盤縣 553537)

盤縣豬牛羊口蹄疫免疫抗體監(jiān)測情況與效果分析

胡鵬飛1，李文舉2

(1.貴州省盤縣農(nóng)業(yè)局動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 盤縣 553537;2.貴州省盤縣農(nóng)業(yè)局獸藥飼料監(jiān)察所，貴州 盤縣 553537)

為掌握盤縣轄區(qū)內(nèi)豬、牛、羊口蹄疫疫病免疫抗體水平情況，做好預(yù)警預(yù)報工作，把握疫情動態(tài)，為科學(xué)防控口蹄疫疫情提供依據(jù)，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測豬牛羊口蹄疫免疫抗體。結(jié)果顯示，本轄區(qū)內(nèi)豬、牛、羊口蹄疫免疫抗體合格率均達(dá)到國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

豬牛羊;口蹄疫;免疫抗體;分析

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV)引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，偶見于人和其他動物。為了解盤縣動物口蹄疫免疫狀況，科學(xué)評價免疫抗體水平和效果，2013—2015年，我們對盤縣豬、牛、羊進(jìn)行了口蹄疫(FMD)免疫抗體水平檢測，以期為制定FMD防控措施提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 動物種類:豬、牛、羊。樣品類型:血清。采集地點(diǎn):盤縣39個鄉(xiāng)鎮(zhèn)的部分規(guī)模養(yǎng)殖場、小區(qū)、屠宰場、散養(yǎng)戶。

1.2 檢測方法及試劑盒 FMD免疫抗體檢測使用液相阻斷ELISA方法，試劑盒購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 (批號:20130327、20140927、20150927)。

1.3 操作步驟與判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 操作步驟:按照FMD免疫抗體檢測使用液相阻斷ELISA(Liquid－phase blocking ELISA)說明書的要求進(jìn)行。

1.3.2 結(jié)果判定

1.3.2.1 試驗成立的標(biāo)準(zhǔn):每次試驗，每塊板須設(shè)立病毒抗原對照和陰性血清對照。病毒抗原對照至少2個孔的OD值在1.0以上(最好在1.0～1.6之間)，陽性對照抗體滴度應(yīng)在1∶1 024，陰性對照抗體滴度應(yīng)小于1∶4。

1.3.2.2 病毒抗原對照平均OD值50%計算(臨界值):抗原對照孔是4孔，分別棄去最高和最低OD值，計算剩余2孔的平均值，再除以2，即為50%對照值。

1.3.2.3 判定標(biāo)準(zhǔn):以病毒抗原對照平均OD值的50%為臨界值。被檢血清OD值大于臨界值為陰性，小于或等于為陽性，陽性孔的OD值等于臨界值時所對應(yīng)的稀釋度為該份血清的抗體滴度。如病毒抗原對照平均的OD值為1.2，則其50%為0.6。如待檢血清在1∶128時的OD值為0.6，則該份待檢血清的抗體滴度為1∶128。若臨界值處于2個之間，則抗體滴度取中間值。

1.3.2.4 ELISA抗體滴度與免疫動物免疫保護(hù)率的關(guān)系:豬、牛、羊ELISA抗體效價≥1∶128時，免疫抗體在保護(hù)范圍內(nèi);ELISA抗體效價≤1∶128時，免疫抗體不在保護(hù)范圍內(nèi)，需要進(jìn)行補(bǔ)免;抗體效價在1∶22～1∶90為50%保護(hù)效價范圍，需要進(jìn)行強(qiáng)化免疫。

1.4 數(shù)據(jù)分析 使用SPSS 17.0分析軟件分別對不同年份、不同樣本來源、不同品種、不同地區(qū)和不同季節(jié)等血清抗體檢測數(shù)據(jù)及病原核酸檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計及相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同年份FMD免疫效果比較 應(yīng)用ELISA方法，對盤縣39個鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)105個養(yǎng)殖場(小區(qū))、444戶散養(yǎng)戶的豬、牛、羊采集血清6 461份進(jìn)行FMD免疫抗體檢測，按不同的年份進(jìn)行比較，結(jié)果見表1。

表1 不同年份FMD免疫抗體檢測結(jié)果

由表1可知，2013—2015年，各年豬FMD免疫抗體合格率分別為 78.54%(355/452)、87.68%(719/820)和 92.34%(1 036/1 122)，2015年 ＞2014年＞2013年，并且2015年合格率極顯著高于2013年;各年牛 FMD免疫抗體合格率分別為64.43%(297/461)、82.12%(450/548)和 90.27%(501/555)，2015年＞2014年＞2013年，并且2015年合格率極顯著高于2013年，2014年合格率顯著高于2013年;各年羊FMD免疫抗體合格率分別為71.26%(419/588)、83.13%(798/960)和 88.17%(842/955)，2015年＞2014年＞2013年，并且2015年合格率顯著高于2013年。除2013年牛血清樣本免疫合格率總體水平低于農(nóng)業(yè)部≥70%要求，其他血清樣本免疫合格率總體水平高于農(nóng)業(yè)部≥70%要求。

2.2 不同樣本來源 FMD免疫效果比較 應(yīng)用ELISA方法，對豬、牛、羊采集血清6 461份進(jìn)行FMD免疫抗體檢測，按不同樣本來源進(jìn)行比較，結(jié)果見表2。

由表2可知，種畜場、規(guī)模場、養(yǎng)殖小區(qū)、散養(yǎng)戶和屠宰場豬FMD免疫抗體合格率分別為:96.51%(359/372)、92.17%(848/920)、80.74%(373/462)、76.52%(352/460)和58.33%(105/180)，種畜場抗體合格率極顯著高于屠宰場和散養(yǎng)戶(P＜0.01)，顯著高于養(yǎng)殖小區(qū)(P＜0.05)，屠宰場未達(dá)到國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn);規(guī)模場、養(yǎng)殖小區(qū)和散養(yǎng)戶牛FMD免疫抗體合格率分別為:90.64%(368/406)、80.15%(210/262)和 78.57%(704/896)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn);種畜場、規(guī)模場、養(yǎng)殖小區(qū)和散養(yǎng)戶羊FMD免疫抗體合格率分別為:94.44%(459/486)、89.93%(964/1072)、78.21%(219/280)和 71.13%(473/665)，種畜場和規(guī)模場合格率極顯著高于散養(yǎng)戶(P＜0.01)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn)。

表2 不同樣本來源FMD免疫抗體檢測結(jié)果

2.3 不同季節(jié)FMD免疫效果比較 應(yīng)用ELISA方法，對豬、牛、羊采集血清6 461份進(jìn)行FMD免疫抗體檢測，按不同的年份進(jìn)行比較，結(jié)果見表3。

表3 不同季節(jié)FMD免疫抗體檢測結(jié)果

由表3可知，春季和秋季豬FMD免疫抗體合格率分別為:89.79%(1 117/1 244)和 85.48%(983/1 150)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn);春季和秋季牛FMD免疫抗體合格率分別為:86.51%(763/882)和 81.09%(553/682)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn);春季和秋季羊FMD免疫抗體合格率分別為:80.05%(1 043/1 303)和74.08%(889/1 200)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn)。

2.4 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)FMD型免疫效果比較 應(yīng)用ELISA方法，對盤縣10個鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)68個養(yǎng)殖場(小區(qū))的豬、牛、羊采集血清4 187份進(jìn)行 FMDAsiaⅠ型免疫抗體檢測，按不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)進(jìn)行比較，結(jié)果見表4。

表4 不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)FMD型免疫抗體檢測結(jié)果

2.5 不同品種FMD免疫效果比較 應(yīng)用ELISA方法，對盤縣9個鄉(xiāng)(鎮(zhèn)、街道)125個養(yǎng)殖場(小區(qū))的豬、牛、羊采集血清6 075份進(jìn)行FMD免疫抗體檢測，按不同的品種進(jìn)行比較，結(jié)果見表5。

表5 不同品種FMD免疫抗體檢測結(jié)果

由表5可知，長白豬和杜長大三元雜交豬FMD免疫抗體合格率分別為:86.94%(939/1 080)和89.90%(1 086/1 208)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn);西門塔爾和關(guān)嶺黃牛FMD免疫抗體合格率分別為:82.83%(381/460)和 83.93%(705/840)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn);湖羊和貴州黑山羊FMD免疫抗體合格率分別為:74.83%(770/1 029)和78.88%(1 150/1 458)，均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

3.1 本試驗應(yīng)用LB－ELISA方法對2013—2015年貴州省盤縣的豬、牛、羊血清樣本進(jìn)行FMD免疫抗體檢測，結(jié)果顯示，2013—2015年豬、牛、羊血清免疫抗體合格率均呈現(xiàn)逐年上升的現(xiàn)象，除2013年牛血清樣本FMD免疫抗體合格率為64.43%外，其他血清樣本免疫抗體合格率均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn)。對盤縣10個鄉(xiāng)(鎮(zhèn))采集的血清樣本進(jìn)行FMD免疫抗體檢測，結(jié)果顯示，除大山鎮(zhèn)羊血清樣本免疫抗體合格率為65.83%外，其他血清樣本免疫抗體合格率均達(dá)到了國家農(nóng)業(yè)部≥70%標(biāo)準(zhǔn)。

3.2 從不同樣本來源FMD免疫抗體檢測結(jié)果來看，種畜場、規(guī)模場免疫抗體合格率明顯高于散養(yǎng)戶和屠宰場，且屠宰場豬FMD免疫抗體合格率只有58.33%，這可能與種畜場及規(guī)模場良好的飼養(yǎng)管理水平有關(guān)，另外，屠宰場的血清樣本來源較廣，有的豬在采血時可能還未免疫FMD疫苗或者采血時已超過最佳采樣時間，所以導(dǎo)致其免疫抗體水平較低。本試驗分別對不同品種的豬、牛、羊FMD免疫抗體合格率進(jìn)行了比較，杜長大三元雜交豬免疫抗體合格率高于長白豬，關(guān)嶺黃牛免疫抗體合格率高于西門塔爾，貴州黑山羊免疫抗體合格率高于湖羊，但是差異均不顯著。

3.3 通過對盤縣豬、牛、羊口蹄疫免疫抗體監(jiān)測結(jié)果表明，2013年以來盤縣FMD免疫抗體水平整體呈上升趨勢，但是散養(yǎng)戶和屠宰場免疫抗體水平依然較低，應(yīng)加以重視。

S851.31+3

B

1007－1474(2016)01－0037－04

2015－10－22