何堯林 謝海輝 何娟

[摘要] 目的 探討高危型HPV在前列腺腺癌組織中的表達情況。 方法 選取50例前列腺腺癌組織標本（Pca組）和52例前列腺增生組織（BPH組），通過聚合酶鏈式反應（PCR）結合反向點雜交（RDB）技術檢測17種高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、68、73、83、MM4）的表達情況。 結果 50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV陽性表達，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV陽性表達，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=10.29，P=0.001）。HPV16的陽性表達率最高，前列腺癌組陽性表達11例（22.0%），前列腺增生組中陽性表達3例（5.7%），兩組比較有統(tǒng)計學差異（χ2=5.671，P=0.017）;HPV18陽性表達率次之，前列腺癌組陽性表達9例（18.0%），前列腺增生組中陽性表達2例（3.8%），兩組比較有統(tǒng)計學差異（χ2=5.307，P=0.021）。 結論 高危型HPV在前列腺腺癌和前列腺增生組織中的表達具有一定的差異，一定程度上提示高危型HPV感染與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展可能存在一定的關系。

[關鍵詞] 高危型HPV;前列腺腺癌;前列腺增生;聚合酶鏈式反應;反向點雜交

[中圖分類號] R737.25? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）26-0076-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of high-risk HPV in prostate adenocarcinoma. Methods A total of 50 specimens of prostate adenocarcinoma（Pca group） and 52 specimens of benign prostatic hyperplasia（BPH group） were selected. Polymerase chain reaction （PCR） combined with reverse dot blot （RDB） technique was used to detect the expressions of 17 high-risk HPVs（16， 18， 31， 33， 35， 39， 45， 51， 52， 53， 56， 58， 59， 68， 73， 83， MM4）. Results Among the 50 patients with prostate cancer， 17 patients had high-risk HPV positive expression， and 4 cases of 52 patients with benign prostatic hyperplasia had high-risk HPV positive expression， and the difference was statistically significant （χ2=10.29， P=0.001）. The positive expression rate of HPV16 was the highest， with 11 cases（22.0%） of positive expression in prostate cancer group and 3 cases（5.7%） of positive expression in prostatic hyperplasia group. There was significant difference between the two groups （χ2=5.671， P=0.017）. The positive expression rate of HPV18 followed， with 9 cases（18.0%） of positive expression in prostate cancer group and 2 cases（3.8%） of positive expression in prostatic hyperplasia group. There was significant difference between the two groups（χ2=5.307， P=0.021）. Conclusion The expression of high-risk HPV in prostate adenocarcinoma and benign prostatic hyperplasia has certain differences. To some extent， there may be a certain relationship between high-risk HPV infection and the development of prostate cancer.

[Key words] High-risk HPV; Prostate adenocarcinoma; Benign prostatic hyperplasia; Polymerase chain reaction; Reverse dot hybridization

前列腺癌為老年男性泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年增加[1-2]。前列腺癌與宮頸癌具有一定的相似性，均與患者的性開放行為相關，因此，人乳頭瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）感染是否與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展也存在相關性。目前部分國外文獻已報道高危型HPV感染與前列腺癌存在一定的相關性[3-5]，但就二者的相關性而言，存在一定的爭議。在國內，有關這方面的文獻報道較少。既往研究結果[6]表明高危型HPV16/18在前列腺癌及前列腺增生中表達具有差異性，且與前列腺癌中Gleason評分、臨床T分期、危險因素等級等臨床病理參數(shù)相關。本研究應用聚合酶鏈式反應（PCR）結合反向點雜交（RDB）技術在50例前列腺腺癌組織和52例前列腺增生組織中進一步檢測17種高危型HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、68、73、83、MM4）的表達情況，旨在探討高危HPV感染與前列腺癌發(fā)生的相關性，其聯(lián)合PSA檢測可提高前列腺癌高風險人群的早期篩查效果，為今后臨床上對前列腺癌的診療、預后評估提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

50例前列腺癌標本（Pca組）和52例前列腺增生標本（BPH組）取自2013年12月～2016年12月在南華大學附屬第二醫(yī)院和廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院行前列腺穿刺或手術切除的標本（其中前者收集18例前列腺癌標本，后者收集32例前列腺癌標本，52例前列腺增生標本均來自廣西醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院），術前未接受手術去勢、藥物去勢或放化療治療。標本均經(jīng)所在醫(yī)院2位高年資副主任病理醫(yī)師診斷。

1.2 方法

PCR結合反向點雜交分析試劑為亞能生物技術（深圳）有限公司產(chǎn)品。檢測原理：采用PCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的DNA芯片技術，利用HPV基因特點設計特異引物，擴增出17種高危HPV亞型，再將擴增產(chǎn)物與固定在膜條上的17種高危分型探針進行雜交，判斷是否有這些亞型的HPV感染，具體步驟按說明書進行。

1.3 結果判讀

根據(jù)膜條上藍色斑點出現(xiàn)的相應位置即可判斷HPV的亞型為陽性，反之為陰性[7]。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計處理，患者一般情況及測定結果等計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1患者一般情況

前列腺癌組和前列腺增生組患者入組時年齡分別為（67.90±6.91）歲、（69.21±5.52）歲;體重指數(shù)（kg/m2）分別為（23.81±3.27）kg/m2、（24.00±3.09）kg/m2;前列腺大小分別為（56.58±13.72）mL、（57.38±15.13）mL;PSA分別為：（35.64±10.47）μg/mL、（34.25±10.58）μg/mL;兩組間比較，均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。

2.2 檢測結果

50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV陽性表達，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV陽性表達，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=10.29，P=0.001）。HPV16的陽性表達率最高，前列腺癌組陽性表達11例（22.0%），前列腺增生組中陽性表達3例（5.8%），兩組比較有統(tǒng)計學差異（χ2=5.671，P=0.017）;HPV18陽性表達率次之，前列腺癌組陽性表達9例（18.0%），前列腺增生組中陽性表達2例（3.8%），兩組比較有統(tǒng)計學差異（χ2=5.307，P=0.021），見表1。兩組患者中均存在多重陽性表達的情況，前列腺癌組HPV16陽性患者中，僅1例患者未合并其他分型表達陽性，前列腺增生組HPV16陽性患者中，也僅1例未合并其他分型表達陽性。

3 討論

前列腺癌是老年男性的常見惡性腫瘤，其早期癥狀與良性前列腺增生癥相似，癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)時往往已是晚期，影響疾病治療和預后。作為前列腺癌的篩查指標血清PSA是組織特異性抗原而非癌特異性抗原，直腸指診、留置尿管等檢查可引起PSA水平升高，具有一定的局限性。腫瘤是一種多基因參與的疾病，單個標志物的檢測具有一定的局限性，多種生物標志物的聯(lián)合檢測將可提高前列腺癌診斷的特異性和敏感性。

人類乳頭狀瘤病毒（HPV）為小環(huán)狀雙鏈DNA 病毒，直徑45～55 nm，表面密布殼微粒，無包膜的核衣殼結構，88%是病毒蛋白（包括L1主要衣殼蛋白），內為DNA。HPV具有嗜人上皮細胞的特性，穩(wěn)定性好，即便在沒有宿主的寒冷的條件下也能獨立存活數(shù)個月。根據(jù)不同的HPV亞型致癌率和致癌性不同，HPV可分為高危型和低危型。

HPV主要通過性生活接觸傳播，目前認為，高危型HPV與疾病的相關性較大，HPV主要是通過破損的皮膚黏膜進入人體，感染皮膚或黏膜細胞，進行大量的病毒復制并組裝成熟、釋放。致癌機制主要是HPV病毒侵入皮膚后持續(xù)感染，HPV DNA基因整合到宿主細胞E2 基因的斷裂缺失，使致癌基因E6和E7大量表達，抑制抑癌基因p53和Rb的表達，發(fā)生細胞周期的調控紊亂，從而癌變發(fā)生[8-10]。

隨著對HPV研究的越來越深入，研究表明高危型HPV感染，尤其是高危亞型HPV感染在前列腺癌的發(fā)病機制中可能扮演著重要角色[11]。早期研究中，McNicol PJ等[12]應用PCR方法檢測前列腺癌組織和良性前列腺增生組織中的HPV檢出率，結果顯示：相對于對照組，高危型HPV在前列腺癌組織中具有較高陽性率。日本學者Anwar K等[13]通過檢測高危HPV 16/18在68例前列腺癌組織標本中的陽性表達情況，結果發(fā)現(xiàn)，HPV感染與前列腺癌的臨床危險度分期、病理Gleason評分具有一定的聯(lián)系，提示高危型HPV與前列腺癌的疾病進展具有相關性。近年來，Pascale M等[3]通過免疫組化和PCR檢查對150例前列腺癌標本進行檢驗，結果發(fā)現(xiàn)150例前列腺癌標本中112例標本HPV E7蛋白陽性，陽性率（74.67%），其表達與前列腺癌Gleason評分、臨床分期、危險因素等級有一定的聯(lián)系，此后部分學者的研究結果與其一致[14，15]，提示高危型HPV感染與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展相關。

部分學者的研究結果持有相反的觀點，認為HPV與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展沒有相關性[16，17]。伊朗學者Aghakhani A等[17]運用 MY09/MY11 和 GP5（+）/GP6（+）HPV引物，對104例前列腺癌和104例前列腺增生組織標本進行基因測序，結果發(fā)現(xiàn)13例前列腺癌組織（13/104，12.5%）和8例前列腺增生組織標本（8/104， 7.7%）中HPVDNA表達陽性，其中13例前列腺癌組織中高危型HPV 10例，低危HPV 3例，8例前列腺增生組織標本中高危型HPV 5例，低危HPV 3例，前列腺癌和前列腺增生組織標本的HPV表達無差異，HPV感染與前列腺癌沒有相關性。目前研究結果的不一致性，原因可能與性開放程度和區(qū)域種族基因易感性的差異，另外可能與納入研究對象的標本量和研究采用的實驗檢測方法不同有關。

目前，國內有關HPV感染與前列腺腺癌的相關性報道較少，國外的研究報道也大多集中在HPV16、HPV18兩個亞型中。本課題組通過聚合酶鏈式反應（PCR）結合反向點雜交（RDB）技術檢測17種高危型HPV在前列腺癌和前列腺增生中的表達情況，50例前列腺癌患者中17例患者存在高危型HPV陽性表達，52例前列腺增生患者中4例存在高危型HPV陽性表達，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示前列腺癌的發(fā)生發(fā)展可能與高危型HPV有一定關系。前列腺癌中高危型HPV陽性表達率從高到低分別是HPV16、HPV18、HPV58、HPV33、HPV31、HPV35、HPV45。52例前列腺增生標本中的高危型HPV陽性表達的情況分別為：HPV16（3例，5.8%），HPV18（2例，3.8%），HPV33（1例，1.9%），兩組均是HPV16、HPV18表達最高，且組間比較有統(tǒng)計學差異（P<0.05），結果提示各亞型中可能HPV16、HPV18與前列腺發(fā)病關系最密切，與國內外研究結果類似[6，13]。

綜上所述，高危型HPV在前列腺腺癌和前列腺增生組織中的表達具有一定的差異，一定程度上提示高危型HPV參與前列腺腺癌的發(fā)生和發(fā)展，但具體機制目前尚無定論，受條件所限，本研究納入的樣本例數(shù)偏少，下一步，應加大樣本量，且對血清、尿液等其他種類標本進行相關檢測，進一步研究HPV與前列腺癌的相關性。

[參考文獻]

[1] Wang GM，Chen W. Progress and development trend of treatment for urological tumor[J]. Cancer Research on Prevention and Treatment，2014，41（2）：97-99.

[2] Qi D，Wu C，Liu F，et al. Trends of prostate cancer incidence and mortality in Shanghai，China from 1973 to 2009[J]. Prostate，2015，75（14）：1662-1668.

[3] Pascale M，Pracella D，Barbazza R，et al. Is human papillomavirus associated with prostate cancer survival[J]. Dis Markers，2013，35（6）：607-613.

[4] Hrbacek J，Urban M，Hamsikova E，et al. Serum antibodies against genitourinary infectious agents in prostate cancer and benign prostate hyperplasia patients：A casecontrol study[J]. BMC Cancer，2011，11： 53-55.

[5] Ehsan G，Seyed HR，Monavari G，et al. Evaluation of human papillomavirus infections in prostatic disease：A cross-sectional study in iran[J]. Asian Pacific J Cancer Prev，2013，14（5）：3305-3308.

[6] 黃林，吳明貴，何娟，等.高危型人 HPV 16 /18 感染與前列腺癌的相關性研究[J].中華男科學雜志，2016，22（6）：501-505.

[7] 李芳，李金，白淘，等. 尿路及宮頸上皮病變中人乳頭瘤病毒型別分布及相關關系比較[J]. 山西醫(yī)藥雜志，2014，（1）：27-28.

[8] Stanley M.Immune responses to human papillomavirus[J]. Vaccine，2006，24（Suppl 1）：S16-S22.

[9] Pizzol D，Putoto G，Chhaganial KD.Human papillomavirus （HPV） infection：A Mozambique overview[J]. Virusdisease，2016，27（2）：116-122.

[10] Kajitani N，Satsuka A，Kawate A，et al. Productive life cycle of human papillomaviruses that depends upon squamous epithelial differentiation[J]. Front Microbiol，2012，3：152-164.

[11] Singh N，Hussain S，Kakkar N，et al. Implication of high risk human papillomavirus HR-HPV infection in prostate cancer in Indian population-a pioneering case-control analysis[J]. Sci Rep，2015，5（2）：77-78.

[12] McNicol PJ，Dodd JG. Detection of human papillomavirus DNA in prostate gland tissue by using the polymerase chain reaction amplification assay[J]. J Clin Microbiol，1990， 28（3）：409-412.

[13] Anwar K，Nakakuki K，Shiraishi T，et al. Presence of ras oncogene mutations and human papillomavirus DNA in human prostate carcinomas[J]. Cancer Research，1992，52（21）：5991-5996.

[14] Hrbacek J，Urban M，Hamsikova E，et al. Serum antibodies against genitourinary infectious agents in prostate cancer and benign prostate hyperplasia patients：A casecontrol study[J]. BMC Cancer，2011，11，53-55.

[15] Ehsan G，Seyed HR，Monavari G，et al. Evaluation of human papillomavirus infections in prostatic disease：A cross-sectional study in iran[J]. Asian Pacific J Cancer Prev，2013，14（5）：3305-3308.

[16] Araujo NA，F(xiàn)erreira FH，Amaral CM，et al. Lack of detection of human papillomavirus DNA in prostate carcinomas in patients from northeastern Brazil[J]. Genet Mol Biol，2016，39（1）：24-29.

[17] Aghakhani A，Hamkar R，Parvin M，et al. The role of human papillomavirus infection in prostate carcinoma[J]. Scand J Infect Dis，2011，43（1）：64-69.

（收稿日期：2019-05-27）