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        38例HIV抗體陽性馬爾尼菲藍(lán)狀菌的分離鑒定體會(huì)

        2019-12-10 12:34:29熊勁芝袁紅霞
        關(guān)鍵詞:雙相酵母骨髓

        熊勁芝 張 林 袁紅霞

        南華大學(xué)附屬郴州市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心微生物室,湖南省郴州市 423000

        馬爾尼菲藍(lán)狀菌(Talaromyces marneffei, TM),原名馬爾尼菲青霉菌(Penicillium marneffei,PM),是青霉菌屬中一種溫度依賴性雙相型條件致病性真菌,主要通過竹鼠傳播,流行于東南亞和我國南方地區(qū)[1]。艾滋病以及免疫力極其低下的患者常合并馬爾尼菲青霉感染。近年來感染PM患者也隨著 AIDS患者的增加而日益增多,重視并早期診斷意義重大。其在 25℃ 時(shí)呈菌絲相生長,產(chǎn)紅色素,37℃ 時(shí)呈酵母相生長,當(dāng)人體感染PM后,PM以具有致病能力的酵母相寄生于宿主細(xì)胞內(nèi)。而分離培養(yǎng)出具有雙相型的TM是診斷馬爾尼菲藍(lán)狀菌病的金標(biāo)準(zhǔn)[2-3]?,F(xiàn)對我院2010年6月—2017年12月收治的 38 例HIV抗體陽性的馬爾尼菲藍(lán)狀菌病患者的體液及組織雙相培養(yǎng)鑒定情況總結(jié)報(bào)道如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 本組38例,均經(jīng)體液或組織真菌培養(yǎng)并鑒定為TM感染,其中血培養(yǎng)陽性33例,骨髓培養(yǎng)陽性5例。男性26例,女性12例,年齡24~76歲,平均年齡52.4歲。均為ELISA初篩試驗(yàn)及 Western-blot 確認(rèn)陽性的 HIV感染者。

        1.2 培養(yǎng)鑒定方法 培養(yǎng)基為BACT/ALERT 3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀配套的培養(yǎng)瓶(由法國生物梅里埃公司提供),沙保羅瓊脂平板與血瓊脂平板培養(yǎng)基購自法國生物梅里埃公司。將患者血標(biāo)本或骨髓標(biāo)本注入血培養(yǎng)瓶,在BACT/ALERT 3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中孵育。陽性報(bào)警后,涂片染色鏡檢考慮為真菌后轉(zhuǎn)種兩塊沙氏培養(yǎng)基,分別置于25℃和37℃中培養(yǎng),每24h后觀察1次菌落生長情況,分別取兩種環(huán)境下孵育的菌落進(jìn)行涂片、固定、革蘭染色,并在顯微鏡下觀察菌體形態(tài)特征。

        2 結(jié)果

        經(jīng)BACT/ALERT 3D全自動(dòng)血培養(yǎng)儀增菌培養(yǎng),均在5d內(nèi)出現(xiàn)陽性報(bào)警,其中24~48h報(bào)陽1株(2.6%),48~72h報(bào)陽6株(15.8%),72~96h報(bào)陽28株(73.7%),96~120h報(bào)陽3株(7.9%)。接種于沙保羅培養(yǎng)基,分別于25℃和37℃中培養(yǎng)。結(jié)果:(1)25℃培養(yǎng)菌落呈霉菌相,生長迅速,2d左右可見灰白色絨毛狀霉菌樣菌落;1周左右菌落呈淡黃色絨狀,中央可見黃綠色,培養(yǎng)基呈玫瑰紅色,且隨培養(yǎng)時(shí)間延長而逐步加深并彌散至整個(gè)培養(yǎng)基。染色后鏡下可見菌絲細(xì)長分隔,大量帚狀枝,兩輪生多見,少數(shù)單輪生,分生孢子呈卵圓形或圓形,光滑,可見明顯孢間連體;(2)37℃ 培養(yǎng)菌落呈酵母相,生長緩慢,3~4d可見邊緣光滑整齊的圓形、灰白色乳酪樣菌落,無色素產(chǎn)生。2 周后菌落增大、干扁、周圍皺褶不齊。染色后鏡下可見大量類圓形長形酵母樣孢子,光滑,部分呈臘腸樣,有少量短菌絲。

        3 討論

        TM是青霉菌屬中唯一具有致病性的條件致病菌,1973年被Diaalvo等發(fā)現(xiàn),多見于東南亞及我國廣西、廣東等南方地區(qū),是一種易引起全身播散性損害的條件致病菌,多發(fā)生在免疫低下的人群中,在艾滋病人群中更常見,TM感染率高達(dá)18.6%,是東南亞地區(qū)艾滋病患者中僅次于結(jié)核分枝桿菌和新生隱球菌的第三大機(jī)會(huì)性致病菌[4]。

        TM在培養(yǎng)過程中的不溶血、不渾濁、產(chǎn)酸量極少等特征,導(dǎo)致難以肉眼觀察確認(rèn)菌落生長,而全自動(dòng)血培養(yǎng)儀能根據(jù)培養(yǎng)中產(chǎn)氣量異常做出菌落生長的陽性報(bào)警提示,現(xiàn)通常采用全自動(dòng)血培養(yǎng)儀進(jìn)行培養(yǎng)。TM在血培養(yǎng)瓶生長較慢,自動(dòng)血培養(yǎng)儀培養(yǎng)陽性報(bào)警峰值為4d(1.5~7d)[5],本組TM陽性瓶報(bào)警73.7%在72~96h。建議對于遲緩報(bào)警的轉(zhuǎn)種后繼續(xù)室溫下靜置觀察上清液變化,若出現(xiàn)白色顆粒或棉絮狀物,涂片檢查更易找到TM特征菌,是確認(rèn)TM簡單有效的方法,具有重要的臨床意義。

        TM在體內(nèi)主要侵犯人體的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng),包括骨髓、肝、脾、肺、淋巴組織及腸道淋巴結(jié)等,其感染后只有免疫力低下的少數(shù)人發(fā)病,臨床常表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、咳痰等呼吸道癥狀,納差、腹痛、腹瀉、肝脾及腹腔淋巴結(jié)腫大等消化道癥狀,以及皮膚臍窩樣壞死性丘疹、咽喉部潰瘍假膜等體征[6]。艾滋病合并TM感染時(shí),骨髓培養(yǎng)陽性率最高,接近100%,其次為皮膚活檢(90%)和血培養(yǎng)(76%),與TM首先在骨髓等單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)中大量繁殖,然后部分釋放到血液中這種生物特性有關(guān),提示在早期診斷上,骨髓培養(yǎng)優(yōu)于血培養(yǎng),可以避免部分因血培養(yǎng)陰性而漏診的患者[7]。HIV陽性者血培養(yǎng)TM陽性率76.7%, HIV陰性率47.1%,HIV 陽性患者較陰性患者TM感染后更容易出現(xiàn)發(fā)熱、脾臟增大、WBC下降、血小板降低、ALT 異常[8]。酵母相為致病相,在活體內(nèi)可逃避寄生宿主的免疫應(yīng)答,菌絲相到酵母相的轉(zhuǎn)變是TM發(fā)病機(jī)制的前提,HSP70基因是雙相轉(zhuǎn)化相關(guān)基因。機(jī)體抵抗TM入侵主要依靠細(xì)胞免疫,組織中出現(xiàn)的起主要作用的是 CD4+T細(xì)胞有助于殺滅真菌及使病變局限[9]。

        因此,對于HIV陽性患者,出現(xiàn)不明原因發(fā)熱與肺部感染時(shí),應(yīng)高度重視TM感染可能,及時(shí)對其進(jìn)行血液或骨髓培養(yǎng)。從臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)出具有雙相型的TM仍是診斷馬爾尼菲藍(lán)狀菌病的金標(biāo)準(zhǔn),但近2周的耗時(shí)及對檢驗(yàn)人員經(jīng)驗(yàn)技術(shù)的高要求所致的診治延遲是其不足之處[10]。

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