冉亞萍 薛艷

(1四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 四川省人民醫(yī)院，四川 成都 610072；2山東大學(xué)第二醫(yī)院)

毛細(xì)支氣管炎是臨床常多發(fā)于老年患者的下呼吸道感染，主要癥狀表現(xiàn)為喘憋、呼吸急促、三凹征〔1，2〕。目前流行病學(xué)研究認(rèn)為因毛細(xì)支氣管炎住院的患者反復(fù)喘息與哮喘的發(fā)生率為68%、30%〔3〕，同時(shí)毛細(xì)支氣管炎還會(huì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為哮喘，因此，需要重視毛細(xì)支氣管炎發(fā)生機(jī)制的研究，深入認(rèn)識(shí)毛細(xì)支氣管炎的發(fā)生、發(fā)展過程，從而給予患者合理、有效的治療方案。目前臨床研究認(rèn)為毛細(xì)支氣管炎是老年患者在感染后繼發(fā)的免疫功能異常性疾病，該發(fā)病過程有多種細(xì)胞因子的參與〔4〕。在炎癥反應(yīng)中，黏附分子可以參與炎癥的多種免疫應(yīng)答，其中氣道上皮細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1的誘導(dǎo)性表達(dá)可以促進(jìn)肺和氣道疾病炎癥反應(yīng)〔5，6〕。本研究旨在探討毛細(xì)支氣管患者血清和誘導(dǎo)痰液ICAM-1的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 四川省人民醫(yī)院2016年11月至2018年12月經(jīng)確診并接受住院治療的毛細(xì)支氣管炎患者89例為毛細(xì)支氣管炎組，同期門診行健康體檢的健康老年人74例為對(duì)照組。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《毛細(xì)支氣管炎診斷、治療與預(yù)防專家共識(shí)》(2014年版)中對(duì)毛細(xì)支氣管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)〔7〕；(2)患者在采血前1個(gè)月無免疫藥物治療史；(3)取得患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有先天性心肺疾病的患者；(2)患有肺結(jié)核、氣管異物、氣道外壓迫表現(xiàn)為喘憋疾病的患者；(3)患有先天性免疫疾病的患者。本研究事先通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。其中對(duì)照組男38例，女36例，平均年齡(70.56±3.65)歲；毛細(xì)支氣管炎組男49例，女40例，平均年齡(70.09±5.08)歲，兩組性別、年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。根據(jù)《毛細(xì)支氣管炎診斷、治療與預(yù)防專家共識(shí)》(2014年版)〔7〕的標(biāo)準(zhǔn)將毛細(xì)支氣管炎組分為輕度組(n=32)、中度組(n=28)和重度組(n=29)。

1.2樣本采集 對(duì)照組在體檢當(dāng)天行血常規(guī)和痰液常規(guī)檢查，外周血采集2 ml，痰液采集采用喉部輕壓刺激法，用壓舌板向后壓舌來刺激喉部，經(jīng)刺激后患者會(huì)咳出少量痰液，將拭子伸入患者咽部，盡量刮取痰液待檢測(cè)用。毛細(xì)支氣管炎患者在入院確診當(dāng)天和進(jìn)入緩解期2 d后分別采集外周血2 ml，給予患者生理鹽水口腔護(hù)理，護(hù)理人員在家屬的配合下給予患者拍背、翻身和吸痰，獲取患者至少1.5 ml的痰液量，如無法獲得較多痰液，則給予3%氯化鈉霧化吸入10～20 min后重新吸痰。毛細(xì)支氣管炎發(fā)病確診當(dāng)天為急性期，經(jīng)7～14 d治療后患者無發(fā)熱、呼吸平穩(wěn)、咳嗽緩解、肺部無啰音，即毛細(xì)支氣管炎緩解期。

1.3樣本處理 (1)血樣處理：采集外周血后置于室溫靜止，凝固分層，3 000 r/min離心5 min，離心半徑13 cm，取血清置于離心管中，于-80℃保存待測(cè)。(2)痰液樣本處理：收集痰標(biāo)本后于顯微鏡低倍視野下進(jìn)行觀測(cè)，合格痰標(biāo)本〔7〕需滿足鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)<10個(gè)、白細(xì)胞數(shù)>25個(gè)，無唾液成分痰液量>1 ml。取1.5 ml合格痰液放入離心管內(nèi)，加入3 ml的0.1%二硫蘇糖醇溶液，渦旋振蕩15 s，置于37℃恒溫水浴15 min，水浴后于3 500 r/min離心20 min，取上清液于-80℃保存待測(cè)。

1.4檢測(cè)方法 血清和痰液中ICAM-1水平采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照說明書要求。ELISA試劑盒購(gòu)自武漢默沙克生物科技有限公司，批號(hào)69-81156。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、組內(nèi)配對(duì)t檢驗(yàn)，多組間單因素方差分析和Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1各組血清、誘導(dǎo)痰液ICAM-1水平表達(dá) 急性期輕、中、重度組血清、誘導(dǎo)痰液ICAM-1含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；中度組與重度組血清、誘導(dǎo)痰液ICAM-1含量均顯著高于輕度組(P<0.05)，且重度組血清、誘導(dǎo)痰液ICAM-1含量顯著高于中度組(P<0.05)。經(jīng)治療后，緩解期輕、中、重度組血清、誘導(dǎo)痰液ICAM-1含量均顯著低于急性期(P<0.001)，緩解期各組間血清、誘導(dǎo)痰液ICAM-1含量無顯著性差異。見表1。

表1 各組血清和誘導(dǎo)痰液ICAM-1水平比較

與對(duì)照組比較：1)P<0.05；與輕度組比較：2)P<0.05；與中度組比較：3)P<0.05

2.2ICAM-1在血清與誘導(dǎo)痰液表達(dá)的相關(guān)性 急性期誘導(dǎo)痰液與血清中ICAM-1含量呈正相關(guān)(r=0.836、P=0.000)，緩解期誘導(dǎo)痰液與血清中ICAM-1含量無相關(guān)性(r=0.184、P=0.327)。

3 討 論

毛細(xì)支氣管炎多好發(fā)于65～80歲的老年群體中，其是有多種細(xì)胞因子參與的氣道炎癥反應(yīng)性疾病，并且伴有一定的氣道高反應(yīng)性〔8，9〕。毛細(xì)支氣管炎發(fā)病因素目前臨床上主要分為外源性因素和內(nèi)源性因素兩大類，外源性因素是由不同呼吸道病毒感染所致，最常見的致病性外源性病原體為呼吸道合胞病毒〔9，10〕。ICAM-1是黏附分子免疫球蛋白超家族的成員之一，其在機(jī)體正常的生理狀態(tài)下表達(dá)較少，但在白細(xì)胞介素、干擾素和內(nèi)毒素的作用下，可以廣泛表達(dá)于淋巴細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞表面，從而參與誘導(dǎo)免疫細(xì)胞發(fā)育分化、參與機(jī)體內(nèi)的免疫反應(yīng)，促進(jìn)氣道炎癥反應(yīng)〔11，12〕。目前研究認(rèn)為〔13〕，氣道上皮的ICAM-1可以通過與白細(xì)胞表面的配體如P2整合家族成員淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1和巨噬細(xì)胞分化抗原-1結(jié)合，從而介導(dǎo)白細(xì)胞跨氣道上皮遷移至氣道腔，參與炎癥性氣道疾病。

本研究說明ICAM-1參與了毛細(xì)支氣管炎的病理改變過程，隨毛細(xì)支氣管炎的嚴(yán)重程度而增加，隨毛細(xì)支氣管炎的治愈程度而降低。ICAM-1可以通過多種途徑和反應(yīng)參與毛細(xì)支氣管炎的免疫過程，內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1可以介導(dǎo)細(xì)胞和細(xì)胞間、細(xì)胞和細(xì)胞基質(zhì)間進(jìn)行相互接觸和結(jié)合，從而參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)與活化、組織生長(zhǎng)與分化、免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)和血管生成等生理病理過程〔14，15〕。Al-Biltagi等〔16〕通過研究ICAM-1與患者肺部損傷疾病的相關(guān)性得到ICAM-1與ICAM-1與患者機(jī)體內(nèi)C反應(yīng)蛋白表達(dá)含量正相關(guān)，同時(shí)ICAM-1在疾病緩解的患者機(jī)體內(nèi)表達(dá)含量呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，認(rèn)為ICAM-1可以作為預(yù)測(cè)肺部疾病損傷的生物標(biāo)志物。Aaron等〔17〕也通過研究證實(shí)了ICAM-1與肺部疾病患者機(jī)體內(nèi)嗜中性粒細(xì)胞、白細(xì)胞、C反應(yīng)蛋白等炎癥指標(biāo)存在相關(guān)性。說明，隨著毛細(xì)支氣管炎患者機(jī)體參與免疫反應(yīng)的ICAM-1表達(dá)增加，炎癥程度越嚴(yán)重。ICAM-1在增生的血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)最強(qiáng)〔18～20〕，因此在ICAM-1、痰液、支氣管肺泡灌洗液中均可以檢測(cè)到可溶性的ICAM-1，同時(shí)在臨床中，誘導(dǎo)痰液的標(biāo)本相較于外周血采集對(duì)患者損傷小，可進(jìn)行反復(fù)檢測(cè)，易被患者接受，采集痰液檢測(cè)ICAM-1對(duì)于患者的毛細(xì)支氣管炎診斷和判斷預(yù)后不僅方便，而且快捷。綜上，可以通過痰液標(biāo)本采集對(duì)毛細(xì)支氣管炎患者進(jìn)行ICAM-1含量的臨床檢查，ICAM-1是毛細(xì)支氣管炎的發(fā)病機(jī)制中的重要因子，早期阻斷ICAM-1的表達(dá)可能成為治療毛細(xì)支氣管炎的一個(gè)重要途徑。