□ 滕布雷 連云港市質(zhì)量技術(shù)綜合檢驗(yàn)檢測中心 戴麗娜 陳泳君 連云港市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心

維生素B6（Vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在人體內(nèi)以磷酸酯的形式存在，是一種水溶性維生素，遇光或堿易分解，不耐高溫[1]。在酸液中穩(wěn)定，在堿液中易分別，吡哆醇耐熱，吡哆醛和吡哆胺不耐高溫。維生素B6在酵母菌、肝臟、谷粒、肉、魚、蛋、豆類及花生中含量較多。維生素B6為人體內(nèi)某些輔酶的組成成分，參與多種代謝反應(yīng)，尤其是和氨基酸代謝有密切關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀（安捷倫LC1260，配有DAD+熒光檢測器）；紫外分光光度計(jì)（珀金埃爾默，Lambda365）；渦旋混合器（德國IKA，VORTOX 2）；超聲波振蕩器（昆山禾創(chuàng)，KH-700DE）。

1.2 試劑

試劑均為分析純，水為GB/T 6682-2008規(guī)定的一級水。維生素B6的3種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)鹽酸吡哆醇購于德國Dr.E公司，鹽酸吡哆醛和雙鹽酸吡哆胺購于北京曼哈格。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）1 mg·mL-1儲(chǔ)備液。分別準(zhǔn)確稱取鹽酸吡哆醇、鹽酸吡哆醛和鹽酸吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)品（簡稱吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）60.8、60.9、71.7 mg，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液溶解后定容到50 mL，在-20 ℃下避光保存，有效期1個(gè)月。使用前需要對儲(chǔ)備液進(jìn)行濃度校正。

（2）20 μg·mL-1中間液。分別準(zhǔn)確吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各1.00 mL，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋并定容到50 mL。用前配制。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別準(zhǔn)確吸取維生素B6混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL和10.0 mL至 100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，則標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度分別為0.10、0.20、0.40、0.60、1.00 μg·mL-1和2.00 μg·mL-1。用前配制。

1.4 奶粉樣品的前處理

按標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.154-2016中條款5.1.2不含淀粉的試樣中固體制樣的處理方法進(jìn)行處理。

1.5 待測液的制備

按標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.154-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B6的測定》中條款5.1.3進(jìn)行。

1.6 儀器參考條件

色譜柱：C18柱，150 mm×4.6 mm。以國家標(biāo)準(zhǔn)中流動(dòng)相為本實(shí)驗(yàn)緩沖液，即甲醇50 mL、辛烷磺酸鈉2.0 g、三乙胺2.5 mL，用水溶解并定容到1 000 mL后，用冰乙酸調(diào)pH至3.0±0.1，過0.45 μm微孔濾膜過濾。流動(dòng)相：甲醇+緩沖液=30+70。流速：1 mL·min-1。柱溫：30 ℃。檢測器：熒光檢測器（FLD）。檢測波長：激發(fā)波長293 nm，發(fā)射波長395 nm。進(jìn)樣體積：10 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 維生素B6各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度校正

①配制10 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)校正液：分別準(zhǔn)確吸取1.00 mL吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液定容到100 mL。②對照液：0.1 mol·L-1鹽酸溶液。③吸收值的測定：用1 cm比色杯于最大吸收波長下，以對照溶液為空白對照，測定各標(biāo)準(zhǔn)校正溶液的吸收值。④標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度計(jì)算：各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的質(zhì)量濃度按式（1）計(jì)算。

式（1） 中，ρi-維 生 素 B6各 組分標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的質(zhì)量濃度，單位為μg·mL-1；Ai-維生素B6各組分標(biāo)準(zhǔn)測試液在各自最大吸收波長λmax下的吸收值（本次濃度校正紫外分光光度計(jì)測定值）；b-比色皿的厚度，單位cm（本實(shí)驗(yàn)采用1 cm比色皿）；Mi-維生素B6各組分標(biāo)準(zhǔn)品的分子量，單位g·mol-1；εi-維生素B6各組分在0.1 mol·L-1HCl中的摩爾吸收系數(shù)，單位L·mmol-1·cm-1；V-稀釋因子；Fi-無維生素B6各組分的對照溶液的換算因子。

2.2 維生素B6各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度檢測結(jié)果

從表1可以看出，校正后的各組分濃度與原配制濃度有稍微的差距，經(jīng)過這一步校正能夠使最終結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。表1中計(jì)算出的各儲(chǔ)備液的質(zhì)量濃度分別為1.082 9、0.995 1、0.105 0 μg·mL-1，可根據(jù)配制過程得出相應(yīng)的混合中間液及各自工作液中各組的濃度。

表1 濃度校正后各組分混合中間液及工作液的濃度表

2.3 正確度（加標(biāo)回收率）

本實(shí)驗(yàn)以不同加標(biāo)濃度的回收率來評估實(shí)驗(yàn)的正確度，根據(jù)奶粉中吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺的含量不同來確定加入標(biāo)準(zhǔn)中間液的量。奶粉樣品及分別加入低、中、高不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品的液相疊圖如圖1，不同濃度的加標(biāo)回收率能夠較好的反應(yīng)儀器對不同含量樣品中VB6的檢測正確度。隨著加入標(biāo)品濃度的增大，圖中相應(yīng)的峰高及峰面積均有一定程度的增加，表明該方法的回收率較好。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線各工作液疊圖

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對嬰幼兒奶粉中的維生素B6檢測方法進(jìn)行改進(jìn)和研究，完善了其各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度校正公式（紫外分光光度計(jì)法），調(diào)整其流動(dòng)相比例，縮短了出峰時(shí)間。方法檢出限均小于0.02 mg/100 g，方法定量限均小于0.06 mg/100 g。方法的回收率為82%～120%，RSD均小于4.0%，精密度高和重現(xiàn)性好。