□ 劉 斌 江西新瑞豐生化股份有限公司

葡萄是較古老的果樹品種之一，其植物化石最早被發(fā)現(xiàn)于第三紀地層中，葡萄不僅美味可口，還有超高的營養(yǎng)價值、藥用價值和經(jīng)濟價值。葡萄中含有多種維生素以及人體所需氨基酸，可以有效預防心腦血管疾病，葡萄中的多種果酸還有助于消化，而且葡萄性平，有補氣血、強筋骨的功效，另外葡萄也是重要的生產(chǎn)原料，葡萄酒、葡萄干、葡萄籽飲料都是以葡萄為原料生產(chǎn)的，是現(xiàn)代比較流行的餐飲食品。

1 實驗方案設計

類黃酮是一種植物次級代謝產(chǎn)物，也被稱為維生素P，因多呈黃色而被稱為生物類黃酮，在自然界中分布廣泛，苔蘚植物、被子植物、椰菜、葡萄與木瓜茶葉中都含有一定量的類黃酮[1]。而且類黃酮具有清除自由基、抗氧化作用，還可以調(diào)節(jié)免疫力、具有抗菌、抗病毒作用[2]?，F(xiàn)階段類黃酮常用于治療靜脈疾病、胃潰病、糖尿病和預防癌癥。而且葡萄、蜂膠等富含類黃酮的植物也被廣泛開發(fā)，用于制作抗氧化食品。此實驗秉持“單一變量原則”，即在其他條件不變的情況下，以不同濃度的赤霉素為變量元素，探究其對葡萄果實抗氧化能力的影響。

2 試驗方法

2.1 實驗流程

實驗前，準備好質(zhì)量濃度分別為50、100、150 mg/L的赤霉素，然后根據(jù)葡萄成熟期選定噴施日期，噴施時間在成熟期前一個月，選用不同濃度的赤霉素，使用壓力噴壺對植株上的果實進行噴施，一個月后分別從植株上、中、下部均勻采摘無病蟲害果實10顆，用于實驗研究。

2.2 實驗過程

2.2.1 制備提取液

首先將采摘的無病蟲害果實取出，切除其中的1/4，然后切碎，并在液氮環(huán)境中將果實研磨成粉末，然后稱取0.60 g鮮樣粉末置于10 mL離心管中，加入6 mL提取液（40%的酸化甲醇，其中包含0.1%鹽酸），旋渦震蕩混勻，在不高于40 ℃的溫度下超聲提取30 min（40 kHz），后離心15 min，重復上述步驟提取3次，將濾液合并放置，待測定。

2.2.2 測定類黃酮含量

NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 比色 法是應用最為廣泛的測定植物和藥材中總黃酮類物質(zhì)的方法，本次試驗亦采用此方法測定類黃酮含量。向待測樣品溶液中分別加入亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉溶液，然后再在500 nm或510 nm處測定吸光值。

2.2.3 測定抗氧化能力

2.2.3.1 DPPH法測定抗氧化能力

DPPH是一種穩(wěn)定的自由基，其乙醇溶液呈紫色，向其中加入類黃酮等自由基清除劑時，其在517 nm處的吸光度會變小，且添加量與吸光度呈線性關(guān)系，因此可以用來測定抗氧化能力。為了更直觀的體現(xiàn)出抗氧化能力的變化趨勢，在測定抗氧化能力時，可以利用提取液作為樣品，用40%的甲醇稀釋液作為空白組進行對照。樣品組：吸取0.2 mL樣品稀釋液，加入2.8 mL濃度為0.1 mmol/L的DPPH溶液，室溫避光反應30 min。DPPH自由基清除率=[（空白組-樣品組）/空白組]×100%。

2.2.3.2 ABTS法測定抗氧化能力

ABTS+溶液由ABTS和過二硫酸鉀的混合液經(jīng)無水乙醇稀釋而成，其在734 nm處有最大吸光值，可以利用這一特性來測定抗氧化能力。樣品組：吸取0.1 mL樣品稀釋液，加入3.9 mL ABTS+溶液，室溫避光反應10 min，于734 nm處測定吸光值。

ABTS自由基清除率=[（空白組-樣品組）/空白組]×100%。

2.2.3.3 FRAP法測定抗氧化能力

該測試法原理是酸性條件下，抗氧化物可以還原產(chǎn)生藍色物質(zhì)，隨后在593nm處測定吸光值，即可得知樣品抗氧化能力。FRAP溶液為0.1 mol/L的醋酸鈉緩沖液（pH=3.6）、10 mmol/L的TPTZ、20 mmol/L的三氯化鐵的混合液，體積比10∶1∶1。樣品組：吸取0.1 mL樣品稀釋液，加入4.9 mL FRAP溶液，室溫避光反應10 min，593 nm處測定吸光值。

3 結(jié)果分析

圖1即為不同質(zhì)量濃度赤霉素下葡萄果實類黃酮含量，橫坐標是不同濃度的赤霉素，縱坐標是葡萄果實中類黃酮含量的質(zhì)量分數(shù)，圖2為不同質(zhì)量濃度赤霉素下葡萄果實抗氧化能力。

從圖1中可以看出噴施赤霉素使果實中類黃酮含量降低，并且隨著赤霉素濃度的升高，類黃酮含量均呈現(xiàn)出先升下降的趨勢。

橫坐標為赤霉素質(zhì)量濃度，縱坐標是三個抗氧化指標，通過對3種測定指標的分析可知，在不同質(zhì)量濃度赤霉素的處理下，ABTS的變化率最低，受赤霉素的影響較小，而FRAP和DPPH受赤霉素的影響較大，但是差別不大。從圖中還可以看出噴施3種濃度的赤霉素均會使使葡萄果實的抗氧化能力降低，并且隨著赤霉素濃度的升高，在50～150 mg/L范圍內(nèi)，抗氧化能力同樣也出現(xiàn)先升后降的趨勢，但相比于對照組吸光值的判定可知，噴施赤霉素后，葡萄果實的抗氧化能力均有不同程度的減小。

圖1 不同質(zhì)量濃度赤霉素下葡萄果實類黃酮含量

圖2 不同質(zhì)量濃度赤霉素下葡萄果實抗氧化能力

4 結(jié)論

由本次試驗數(shù)據(jù)可知：噴施赤霉素可以在一定程度上降低葡萄果實中類黃酮的含量，同時其抗氧化能力也隨之降低。但是噴施不同濃度的赤霉素對葡萄果實抗氧化能力的影響并不規(guī)律，以本次試驗為例，其中質(zhì)量濃度為50、150 mg/g的赤霉素對葡萄果實抗氧化作用的降低效果比質(zhì)量濃度為100 mg/g時的效果更好，同時由圖1和圖2可知，噴施3種濃度的赤霉素，葡萄果實的抗氧化能力均有一定程度的降低，但是隨著濃度的升高，抗氧化能力也呈現(xiàn)出先升后降的趨勢，也可以得出，赤霉素對于葡萄果實中類黃酮的合成有抑制作用，可以有效降低葡萄果實的抗氧化能力，且隨著赤霉素濃度的不同，抑制作用的強弱也不同。