付言峰，方曉敏，王鋒超，潘晶晶，王學(xué)敏，涂 楓，趙為民，任守文

（1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所/農(nóng)業(yè)部種養(yǎng)結(jié)合重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)，江蘇南京 210014；2.江蘇省明天農(nóng)牧科技有限公司，江蘇 南京 210014；3.阜寧縣畜牧獸醫(yī)站，江蘇 鹽城 224400）

我國(guó)是一個(gè)養(yǎng)豬大國(guó)，國(guó)家統(tǒng)計(jì)局（http：//www.stats.gov.cn/tjsj/ndsj/2018/indexch.htm）數(shù)據(jù)顯示，2017 年我國(guó)生豬出欄量為7.02 億頭，年底存欄量為4.4 億頭，豬肉產(chǎn)量5 451.8 萬(wàn)t，2017 年我國(guó)生豬出欄量約占世界生豬出欄總數(shù)的一半以上[1]。近年人們生活水平不斷提高，加之我國(guó)人民的烹飪習(xí)慣，決定了肉質(zhì)鮮美、風(fēng)味獨(dú)特的豬肉產(chǎn)品更受市場(chǎng)青睞[2]。外來(lái)豬種的肉質(zhì)風(fēng)味不及我國(guó)大多數(shù)地方豬，而以地方豬種為母本，導(dǎo)入外來(lái)豬種血統(tǒng)培育的新品種或雜交商品豬，更符合國(guó)人的消費(fèi)方向，市場(chǎng)前景更廣闊[3]。

蘇山豬是江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所養(yǎng)豬團(tuán)隊(duì)歷經(jīng)15 年，利用二花臉豬、梅山豬和杜洛克豬培育的一個(gè)新品種，于2018 年獲得國(guó)家畜禽新品種（配套系）證書（編號(hào)：農(nóng)01 新品種證字第28 號(hào)）（http：//jiuban.moa.gov.cn/fwllm/hxgg/201711/t20171124_5919183.htm）。蘇山豬經(jīng)產(chǎn)母豬產(chǎn)仔數(shù)13.6 頭，有效乳頭7 對(duì)以上，日增重786 g，料重比2.89，胴體瘦肉率59.4%，肌內(nèi)脂肪含量2.56%，飼糧中粗纖維11.39%時(shí)仍可正常生長(zhǎng)，是一個(gè)優(yōu)質(zhì)豬品種[4]。蘇紫豬是江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所養(yǎng)豬團(tuán)隊(duì)正在培育的優(yōu)質(zhì)瘦肉型黑豬新品種。該豬全身被毛黑色，腹部中等大小，背腰平直，具有繁殖力高、肌內(nèi)脂肪含量高、肉色鮮紅、大理石花紋明顯、抗逆性強(qiáng)等特點(diǎn)，預(yù)計(jì)再經(jīng)過(guò)2～3 個(gè)世代的持續(xù)選育，即可達(dá)到品種審定標(biāo)準(zhǔn)。蘇山豬和蘇紫豬經(jīng)生產(chǎn)試用，市場(chǎng)歡迎度均較高。

為了挖掘蘇山豬和蘇紫豬的種質(zhì)資源特性，提高其育種水平和生產(chǎn)效率，故從以下兩個(gè)方面開(kāi)展本試驗(yàn)：一是利用OSBORNE 種性測(cè)定站分析試驗(yàn)豬群的體重、采食量、采食次數(shù)、采食時(shí)間等采食數(shù)據(jù)，再分析豬群的采食習(xí)性，不同品種、性別和類型豬的采食差異性，估算每頭豬的飼料報(bào)酬。二是利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定試驗(yàn)豬血液中的豬生長(zhǎng)激素（GH）和促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）濃度，再分析不同品種、性別和類型豬的GH 和GHRH 濃度差異。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)地點(diǎn)為江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院六合試驗(yàn)豬場(chǎng)，試驗(yàn)動(dòng)物為蘇山豬32 頭，蘇紫豬32 頭，按性別、品種、類型、體重分成8 欄飼養(yǎng)（表1），試驗(yàn)期40 d，預(yù)試期5 d，正試期35 d。試驗(yàn)開(kāi)始日期為2019 年5月14 日。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)所有豬體重（30±3）kg，日齡（60±5）d。在測(cè)定第30 天時(shí)，對(duì)每一欄豬隨機(jī)選取3 頭豬（共24 頭）進(jìn)行豬生長(zhǎng)激素（GH）和促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）濃度的測(cè)定。

表1 試驗(yàn)豬分組情況

1.2 主要試驗(yàn)儀器和試劑

生長(zhǎng)性能測(cè)定：本試驗(yàn)采用8 套美國(guó)奧飼本（OSBORNE, FIRE）全自動(dòng)種豬生產(chǎn)性能測(cè)定系統(tǒng)，進(jìn)行種豬生長(zhǎng)肥育性狀測(cè)定，奧飼本測(cè)定站能準(zhǔn)確記錄豬的日采食量、采食次數(shù)、采食時(shí)間、采食時(shí)的體重等數(shù)據(jù)。

激素測(cè)定：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）352型酶標(biāo)儀、芬蘭（Thermo Labsystems）AC8 型洗板機(jī)、上海一恒隔水式恒溫培養(yǎng)箱GNP-9080 型；江蘇酶免（MEIMIAN）豬促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）ELISA 試劑盒96T、江蘇酶免（MEIMIAN）豬生長(zhǎng)激素（GH）ELISA 試劑盒96T。

1.3 測(cè)定流程

選擇60 日齡左右公豬進(jìn)入奧斯本測(cè)定站開(kāi)測(cè)，100 日齡左右結(jié)束測(cè)定；測(cè)定過(guò)程中，采用自由采食和飲水、每欄8 頭左右測(cè)定豬，測(cè)定站將自動(dòng)獲得每天的采食數(shù)據(jù)，包括體重、采食量、采食次數(shù)、采食時(shí)間等。接下來(lái)，試驗(yàn)人員每隔5 d 左右將測(cè)定站數(shù)據(jù)傳送到電腦終端，同時(shí)備份。最后，我們將測(cè)得的原始數(shù)據(jù)導(dǎo)出，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 激素測(cè)定方法

豬生長(zhǎng)激素（GH）和豬促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)均根據(jù)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行測(cè)定。1）先進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，即將150 μL 的標(biāo)準(zhǔn)品加入150 μL 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液中稀釋。2）加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50 μL，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測(cè)樣品10 μL（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3）溫育：用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min。4）配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用。5）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。6）加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，空白孔除外。先后分別重復(fù)溫育和洗滌1 次。7）顯色：每孔先加入顯色劑A 50 μL，再加入顯色劑B 50 μL，輕輕震蕩混勻，37 ℃避光顯色10 min。8）終止：每孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。9）測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450 nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 min 以內(nèi)進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)量?jī)?chǔ)存、篩選、分類匯總等整理通過(guò)Excel 和Access 軟件分析。不同組別間測(cè)定數(shù)值的差異性顯著水平通過(guò)SAS 8.2 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行GLM 分析，結(jié)果以最小二乘均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（LSmeans±SE）表示。

激素濃度計(jì)算是以O(shè)D 值為橫坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，再用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 采食數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)期間共獲得33 195 條采食數(shù)據(jù)，每一條采食數(shù)據(jù)均包括以下11 類信息：順序號(hào)、測(cè)定站號(hào)、電子耳牌、日期、采食開(kāi)始時(shí)間、采食結(jié)束時(shí)間、料槽初重、料槽末重、采食量、體重和投料量。

采食開(kāi)始時(shí)間：自由采食貫穿全天24 h，其中下午16：00 為采食峰值，其次為下午17：00 和上午8：00；早晨5：00 至晚上19：00 間，中午11：00 為采食低谷。其他時(shí)間（晚上20：00 至次日凌晨4：00）均有采食，但采食次數(shù)均比較低。不同品種（蘇山豬和蘇紫豬）間、不同性別（公豬和母豬）間、不同類型（種豬和肥豬）間采食開(kāi)始時(shí)間（小時(shí)）差異均不顯著（表2）。

表2 試驗(yàn)豬不同采食時(shí)間采食次數(shù)分布（n=62）

各欄間試驗(yàn)豬比較結(jié)果顯示：第7 欄豬收集到的數(shù)據(jù)量最高（4 799 條），第8 欄豬的最低（2 167條）。料槽初重比較，第4 欄豬最高，達(dá)到0.95 kg，其他欄都在0.72～0.79 kg 之間，其中第3 欄最低。料槽末重比較，第8 欄最高，達(dá)到0.596 kg，第2 欄最低，達(dá)到0.563 kg。次采食量比較，第4 欄最高，第3 欄最低（P＜0.05）。體重比較，第4 欄最高，第3 欄最低。次投料量比較，第4 欄最高，第2 欄最低。這些結(jié)果說(shuō)明，體重和次采食量最高值和最低值比較結(jié)果一致，料槽初重、次采食量、體重和次投料量最高值均發(fā)生在第4 欄豬上（表3）。

不同品種、性別和類型豬間的采食數(shù)據(jù)比較結(jié)果顯示：蘇山豬、公豬和種豬均為30 頭，數(shù)據(jù)采集量分別為15 889、15 277 和15 684 條；蘇紫豬、公豬和肥豬均為32 頭，數(shù)據(jù)采集量分別為17 306、17 918和17 511 條。品種間比較，蘇紫豬的料槽初重、料槽末重、次采食量、體重和次投料量均顯著高于蘇山豬（P<0.05）。性別間比較，公豬的料槽初重、次采食量和次投料量均顯著高于母豬（P<0.05），母豬的料槽末重和體重均顯著高于公豬（P<0.05）。類型間比較，種豬的料槽末重顯著高于肥豬（P<0.05），肥豬的料槽初重、次采食量、體重和次投料量均顯著高于種豬（P<0.05）。這些結(jié)果說(shuō)明，不同品種、性別和類型豬間的采食性狀均差異顯著，蘇紫豬的所有采食性狀均顯著高于蘇山豬（表4）。

表3 各欄料槽初重、料槽末重、次采食量、體重和次投料量等比較結(jié)果

表4 不同品種、性別和類型豬間料槽初重、料槽末重、次采食量、體重和次投料量等比較結(jié)果

2.2 日數(shù)據(jù)分析

日數(shù)據(jù)指每頭試驗(yàn)豬每天采集的匯總性數(shù)據(jù)，所以每頭豬每天會(huì)有一條日數(shù)據(jù)。表5 各欄間試驗(yàn)豬日數(shù)據(jù)比較結(jié)果顯示：第7 欄豬收集到的數(shù)據(jù)量最高（456 條），第6 欄豬的最低（315 條）。日采食量比較，第6 欄豬最高，達(dá)到3.088 kg，第4、3、8 欄在2~3 kg 之間，第7、5、1 在1~2 kg 之間，第2 欄最低，低于1 kg。日采食次數(shù)比較，第3 欄最高（11.88次），其次為第4、8 欄，這兩欄均不低于11 次；第5、1、7、6 欄均在9~11 次之間，第2 欄最低，低于6 次。日采食時(shí)間比較，第4 欄最高，為4 823.19 s，其次為第7、8 欄，均超過(guò)4 000 s；第5、1、6、3 欄均在3 000~4 000 s 之間，第2 欄最低，低于3 000 s。日體重比較，第4 欄最高，超過(guò)90 kg，遠(yuǎn)高于其他欄，第8、6 欄均在60~70 kg，第7、2 欄在50~60 kg，第5、1、3 欄在40~50 kg，其中最低的是第3 欄。這些結(jié)果說(shuō)明，日采食時(shí)間和日體重均為第4 欄最高，日采食量、日采食次數(shù)、日采食時(shí)間均為第2 欄最低（表5）。

表5 各欄日采食量、日采食次數(shù)、日采食時(shí)間、日體重等比較結(jié)果

不同品種、性別和類型豬間的日數(shù)據(jù)比較結(jié)果顯示：蘇山豬、公豬和種豬均為30 頭，數(shù)據(jù)采集量分別為1 586、1 420 和1 553 條；蘇紫豬、公豬和肥豬均為32 頭，數(shù)據(jù)采集量分別為1 478、1 644 和1 511條。品種間比較，蘇紫豬的日采食量、日采食次數(shù)、日體重和日采食時(shí)間均顯著高于蘇山豬（P<0.05）。性別間比較，母豬的日采食量、日采食次數(shù)和日采食時(shí)間均顯著高于公豬，體重相反（P<0.05）。類型間比較，肥豬的日采食量和體重顯著高于種豬（P<0.05），而日采食次數(shù)和日采食時(shí)間則是種豬顯著高于肥豬（P<0.05）。這些結(jié)果說(shuō)明，不同品種、性別和類型豬間的日性狀均差異顯著（P<0.05），日采食量、日采食次數(shù)和日采食時(shí)間，均為蘇紫豬高于蘇山豬，母豬高于公豬（表6）。

表6 不同品種、性別和類型豬間日采食量、日采食次數(shù)、日采食時(shí)間、日體重等比較結(jié)果

2.3 豬生長(zhǎng)激素（GH）測(cè)定結(jié)果

圖1 用于測(cè)定豬生長(zhǎng)激素（GH）濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線制定

對(duì)5 個(gè)豬GH 標(biāo)準(zhǔn)物（濃度已知），按照1∶1 對(duì)其進(jìn)行稀釋，再測(cè)定其OD 值，繪制出下面的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定試驗(yàn)豬血清的OD值，計(jì)算出其GH 含量（表7）。各欄之間比較結(jié)果如下：共8 欄豬，其中第2 欄的GH 濃度最高，為蘇山豬公肥豬（即蘇山豬閹豬），處于第一梯隊(duì)；其次為蘇紫豬母肥豬、蘇山豬母種豬，處于第二梯隊(duì)；剩下的第1、3、4、6、7 欄豬都處于第三梯隊(duì)；第一梯隊(duì)與第三梯隊(duì)間GH 含量差異顯著（P<0.05）。品種之間比較結(jié)果如下：蘇山豬和蘇紫豬間GH 含量無(wú)顯著差異；性別之間比較結(jié)果如下：公豬與母豬間GH 含量無(wú)顯著差異；類型之間比較結(jié)果如下：肥豬的GH 含量顯著高于種豬（P<0.05），見(jiàn)圖2。

表7 試驗(yàn)豬生長(zhǎng)激素（GH）濃度

圖2 不同品種、性別、類型豬的生長(zhǎng)激素（GH）濃度比較

2.4 豬促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）測(cè)定結(jié)果

對(duì)5 個(gè)豬促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）標(biāo)準(zhǔn)物，按照1∶1 對(duì)其進(jìn)行稀釋，再測(cè)定其OD 值，繪制出GHRH 的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3），根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)定試驗(yàn)豬血清的OD 值，估計(jì)其GHRH 含量。

各欄之間比較結(jié)果如下：共8 欄豬，其中第8 欄的GHRH 濃度最高（P<0.05），為蘇山豬母肥豬，處于第一梯隊(duì)；其次為第7、5、3、1、2 欄，處于第二梯隊(duì)；最低的為第4、6 欄豬，處于第三梯隊(duì)；第一梯隊(duì)與第三梯隊(duì)間GHRH 含量差異顯著（P<0.05），見(jiàn)表8。不同品種、性別、類型豬的GHRH 濃度差異均不顯著：蘇山豬（39.89±2.19）μg/L，蘇紫豬（45.94±2.25）μg/L；公豬（40.87±2.30）μg/L，母豬（44.97±2.35）μg/L；種豬（44.79±2.31）μg/L，肥豬（41.04±2.23）μg/L。

圖3 用于測(cè)定促生長(zhǎng)激素釋放激素濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線制定

表8 試驗(yàn)豬促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）濃度

3 討論與結(jié)論

豬飼料報(bào)酬（料重比）是一個(gè)非常重要的育種性狀，隨著種豬自動(dòng)測(cè)定站的推廣，育種場(chǎng)可以更加準(zhǔn)確得獲得豬采食數(shù)據(jù)。有研究指出，在每臺(tái)設(shè)備不超過(guò)11 頭的情況下，隨著飼養(yǎng)密度的降低（自0.56 頭/m2降低至0.44 頭/m2），日采食次數(shù)、日采食時(shí)間及采食量逐漸增加，若再降低飼養(yǎng)密度則無(wú)顯著影響[5]。本試驗(yàn)每個(gè)欄中平均飼料8 頭豬，飼料密度約為0.8 頭/m2。本研究表明，豬自由采食貫穿于全天24 h，其中下午16：00 為采食最高峰，其次為下午17：00 和上午8：00；白天的中午11：00 為采食低谷。晚上（20：00 至次日凌晨4：00）均有采食，但采食次數(shù)均比較低。不同性別（公豬和母豬）間、不同類型（種豬和肥豬）間采食開(kāi)始時(shí)間差異均不顯著。不同品種、性別和類型豬間的采食性狀均差異顯著，蘇紫豬的所有采食性狀均顯著高于蘇山豬。有研究表明，在自由采食情況下，豬的采食行為多發(fā)生在白天，圩豬閹公豬、閹母豬全期平均白晝（6：00～18：00）采食時(shí)間分別為夜間的2.82 和2.97 倍，在白晝的采食量分別為夜間（18：00 至次日6：00）的2.78 和2.74 倍[6]，大白豬的采食行為多發(fā)生在白天[5，7-8]。

生長(zhǎng)激素（GH）與下丘腦分泌的促生長(zhǎng)激素釋放因子、抑制素、類胰島素樣生長(zhǎng)因子和胰島素等體內(nèi)激素形成刺激和反饋機(jī)制，能降低脂肪含量，提高蛋白質(zhì)合成量，促進(jìn)礦物質(zhì)元素的吸收，促進(jìn)豬肌肉生長(zhǎng)，提高胴體瘦肉率和飼料效率，改善胴體品質(zhì)[9-11]。本研究結(jié)果表明，蘇山豬公肥豬（即蘇山豬閹豬）的GH 含量最高，蘇山豬和蘇紫豬間GH 含量無(wú)顯著差異，公豬與母豬間GH 含量無(wú)顯著差異，肥豬的GH含量顯著高于種豬（P＜0.05），這說(shuō)明閹割（因?yàn)榉守i經(jīng)閹割處理）會(huì)對(duì)豬GH 含量產(chǎn)生影響。

促生長(zhǎng)激素釋放激素（GHRH）作為GH 的正性調(diào)控因子，能促進(jìn)GH 的合成和分泌[12]。本研究表明，蘇山豬母肥豬的GHRH 含量最高，蘇山豬和蘇紫豬間、公豬與母豬間、種豬和肥豬間的GHRH 含量均差異不顯著（P＜0.05）。有研究表明，血清中GH和GHRH 含量對(duì)豬背最長(zhǎng)肌肌纖維面積有正效應(yīng)，可促進(jìn)肌纖維生長(zhǎng)[13]。GH 可使瘦肉型豬肌肉、皮膚和骨的沉積率增大，使各種肌纖維變粗[14]。

綜上所述，自由采食時(shí)，豬只喜歡16：00～17：00和上午8：00 間集中采食，體重大的豬采食量更大，蘇紫豬的所有采食性狀均顯著高于蘇山豬，母豬日采食量、日采食次數(shù)、日采食時(shí)間均顯著高于公豬，GH 和GHRH 的最高值不出現(xiàn)在同一欄豬中，肥豬的GH 濃度顯著高于種豬。