張立憲，白紅杰，郎利敏，游 一，朱文豪，王克領(lǐng)（.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002；2.河南省畜禽繁育與營養(yǎng)調(diào)控重點(diǎn)實(shí)驗室，河南 鄭州 450002）

副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌引起的一種常見傳染病，又稱革拉塞氏?。℅lasser's disease），以多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎性腫為特征病變，發(fā)病率15%～90%，主要危害2～28 周齡仔豬和生長豬，特別是5～8 周齡保育豬，可引發(fā)較為嚴(yán)重的身體多部位疾病[1]，已成為當(dāng)前對我國豬場斷奶仔豬和保育豬危害最大的細(xì)菌性疫病之一。副豬嗜血桿菌具有條件致病性，該病一般入冬至早春季節(jié)為高發(fā)期，而養(yǎng)殖場條件差更易發(fā)病，如飼養(yǎng)密度過大、圈舍潮濕、舍內(nèi)明火采暖、封閉嚴(yán)實(shí)空氣不流通等。副豬嗜血桿菌病傳播較快，病程較長，而且與圓環(huán)病毒病、藍(lán)耳病等常?；彀l(fā)，發(fā)病后治療不當(dāng)效果普遍較差，且愈后恢復(fù)緩慢[2]，給養(yǎng)豬企業(yè)往往造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 發(fā)病及病變情況

2019 年1 月下旬，新鄉(xiāng)市原陽縣某豬場5～7 周齡保育豬群突然發(fā)病，發(fā)病率約20%，病豬發(fā)燒40 ℃左右，采食量下降，陣發(fā)性咳嗽，有的跗關(guān)節(jié)腫大，跛行，被毛粗亂無光澤，后期腹式呼吸明顯，日漸消瘦，個別豬還出現(xiàn)歪頭轉(zhuǎn)圈和倒地亂劃等神經(jīng)癥狀，后期部分病豬出現(xiàn)耳朵、四肢末端或腹下紅紫。剖檢病變：淋巴結(jié)均腫大明顯，切面多汁，上有少量灰白色壞死點(diǎn)，胸腹腔蓄積大量淡黃色米湯樣液體，胸肺粘連，心包和肺表面有多量纖維素化膿性干酪樣滲出物，有的腹腔粘連，表現(xiàn)明顯的腹膜炎癥狀，跗關(guān)節(jié)處有黏性清亮或混濁積液。

根據(jù)流行病學(xué)、剖檢癥狀和變化，可臨床診斷為副豬嗜血桿菌病。

2 實(shí)驗室診斷與藥敏試驗

2.1 實(shí)驗室診斷

2.1.1 細(xì)菌培養(yǎng) 無菌采取病豬肺臟、關(guān)節(jié)液、心血接種于營養(yǎng)肉湯、含NAD 的血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基、巧克力瓊脂培養(yǎng)基、普通瓊脂和含5%乳牛血清的TSA 培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱厭氧培養(yǎng)24～48 h，觀察其生長形態(tài)及特征。培養(yǎng)結(jié)果見表1。

表1 細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果

挑取培養(yǎng)后的單菌落抹片，革蘭氏染色后在油鏡下觀察，可見單個、成對或短鏈狀的革蘭氏陰性細(xì)小桿菌（圖1）。細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果符合副豬嗜血桿菌特征，初步診斷為副豬嗜血桿菌病。

2.1.2 生化試驗 將純化后的菌落接種于生化鑒定管，管中同時加入5 mL 0.01%的NAD，置于37 ℃5%的CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48 h。結(jié)果見表2。

圖1 革蘭氏染色鏡檢細(xì)菌形態(tài)

表2 生化試驗結(jié)果

上述生化試驗符合副豬嗜血桿菌的生化特征，基本確定病豬患有副豬嗜血桿菌病。

2.1.3 PCR 鑒定試驗結(jié)果 參照劉建奎等（2012）的文獻(xiàn)介紹對分離到的5 株菌株進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，觀察產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果，顯示在821 bp 處出現(xiàn)特異性條帶（圖2），與預(yù)期片段大小相符，表明所分離到的菌株為副豬嗜血桿菌。

圖2 分離菌株的PCR 鑒定

2.1.4 小鼠致病性試驗 將菌株接種于添加NAD的TSB，37 ℃培養(yǎng)48 h，無菌生理鹽水5 倍稀釋培養(yǎng)菌后，給一組小鼠皮下接種0.5 mL，對照組小鼠皮下接種0.5 mL 無菌生理鹽水。接種細(xì)菌組小鼠48 h 內(nèi)死亡，剖檢肺部有出血，肝臟明顯腫大，對照組正常。從死亡小鼠的肺和脾上分離得到和以上一致的細(xì)菌，證明該菌具有致病性。

2.2 藥敏試驗

將分離菌株接種于添加NAD 的TSA 培養(yǎng)基，涂沫均勻，選取藥敏片貼于培養(yǎng)基上，于37 ℃5%的CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，測量抑菌環(huán)直徑并判定。判定結(jié)果見表3。

從表3 可以看出：分離菌株對洛美沙星、恩諾沙星、頭孢拉定、頭孢噻肟、頭孢噻呋等敏感，對氨芐西林、丁胺卡那、克林霉素、阿莫西林等中介，對慶大霉素、鏈霉素、青霉素G、金霉素、磺胺間甲氧嘧啶等耐藥。

表3 副豬嗜血桿菌分離菌株的藥敏試驗結(jié)果

3 治療措施

3.1 提高保育圈舍溫度至20 ℃以上。天氣晴好時中午11：00 至下午14：00 南向窗戶打開通風(fēng)，以防空氣污濁。清掃圈舍糞便并減少沖洗圈舍次數(shù)，每周帶豬噴霧消毒2～3 次，避免死角。保持圈舍干爽。杜絕霉變玉米和飼料。將可疑豬和發(fā)病豬全部換至病豬舍隔離飼養(yǎng)。將豬分圈，減少飼養(yǎng)密度。把病重豬和污染物及時清理，將其深埋或焚燒掉。

3.2 發(fā)病豬肌注洛美沙星和頭孢噻呋，1 d 1 次，連用3～5 d，按說明書用量使用；大群拌料加藥：恩諾健1 000 g＋10%頭孢拉定500 g＋柴胡甘草顆粒1 000 g＋全價飼料1 t，連用7～10 d；同時在飲水添加優(yōu)質(zhì)多維1 000 g+葡萄糖20 kg+水1 t，連飲5～7 d。

經(jīng)過上述措施處理30 d 后，除少部分病重豬死亡外，大部分癥狀較輕病豬逐漸好轉(zhuǎn)，疫情基本得到了控制。

4 小結(jié)

造成副豬嗜血桿菌病在該場流行的原因可能有4 點(diǎn)：一是冬季圈舍溫度偏低，門窗封閉較為嚴(yán)實(shí)，再加上糞尿清理不及時，明顯感覺空氣污濁、氣味嗆人；二是飼養(yǎng)密度較大，因前期仔豬上保育較為集中，導(dǎo)致圈舍緊張，豬群擁擠打架增多；三是加藥預(yù)防沒有做好，仔豬由產(chǎn)房轉(zhuǎn)到保育舍應(yīng)激較大，飲水中沒有及時添加電解質(zhì)多維和葡萄糖等；四是沒有按規(guī)定及時消毒，造成病原微生物無限繁殖。

副豬嗜血桿菌主要侵害的是關(guān)節(jié)、漿膜和腦膜等器官，相對其他組織這些器官的毛細(xì)血管分布較少；而肺部作為重要的發(fā)病器官卻與血液之間又存在血肺屏障，因而一般藥物很難到達(dá)該菌分布最多的部位，通過藥敏試驗選用的藥物不一定有效，必須結(jié)合臨床選用穿透性強(qiáng)，組織分布濃度高，能夠深入副豬嗜血桿菌附著部位的藥物，才能發(fā)揮應(yīng)有的效果[4]。