李賀鵬

（漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院 外科，河南 漯河 462300）

非小細(xì)胞肺癌臨床上比較常見，約占肺癌總數(shù)的80%～85%，70%患者初診時(shí)均為晚期，發(fā)病率和死亡率較高。目前該病的治療主要注重手術(shù)治療，但術(shù)后預(yù)后不佳［1］。因此，尋找新的標(biāo)記物阻斷癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移為目前臨床研究熱點(diǎn)。細(xì)胞核分布基因 C （nuclear distribution gene C,NudC）參與了細(xì)胞有絲分裂、細(xì)胞周期和遷移。細(xì)胞核分布基因C 結(jié)構(gòu)域1（NudC domain containing 1,NudCD1）作為該家族的成員之一，在癌癥中具有重要生物學(xué)功能［2］。但NudCD1 在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其意義尚不清楚。本研究采用免疫組化檢測了NudCD1 在非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁組織的表達(dá)情況，并分析了其與患者的預(yù)后關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011 年1 月至2014 年 1 月在本院接受治療的116 例肺癌患者，收集所有患者的癌組織和癌旁組織石蠟標(biāo)本。其中男63 例，女53 例；年齡25～84 歲，中位年齡59 歲。治療前患者均未接受化療等其他治療，研究前所有患者均告知并知情同意，并經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 NudCD1在癌組織和癌旁組織的表達(dá)

采用免疫組化SP 法，實(shí)驗(yàn)中所用NudCD1（1∶150）兔抗人一抗從Zymed Laboratories 公司購買、SP 免疫組化試劑盒購于福州邁新生物公司。將標(biāo)本連續(xù)4 μm 切片，再脫蠟、水化、抗原修復(fù)后石蠟切片放入3% 的 H2O2-甲醇溶液浸泡10 min，消除內(nèi)源性過氧化物酶，PBS 沖洗3 次，滴加封閉液孵育10 min。滴加一抗，濕盒內(nèi)孵育60 min，PBS 沖洗 3 次。滴加二抗 37℃孵育10 min，PBS 沖洗3 次，滴加鏈親和素標(biāo)記的HRP，孵育 10 min，PBS 沖洗 3 次，DAB 顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、鏡檢。以PBS 代替一抗作陰性對照。NudCD1 以腫瘤細(xì)胞漿著色為陽性細(xì)胞，由兩位病理科醫(yī)師結(jié)合染色細(xì)胞所占百分比和染色強(qiáng)度做出判斷。按陽性細(xì)胞所占腫瘤細(xì)胞的百分比評分：0 分（無染色細(xì)胞），1 分（＜10%），2 分（10%～50%），3 分（＞50%），再按顯色程度記分：0 分（無染色細(xì)胞），1 分（細(xì)胞被染淺黃色），2 分（棕黃色），3 分（棕褐色），兩者相加≥3 分為陽性，0～3 分為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS 9.0 軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用t檢驗(yàn)對計(jì)量資料、χ2對計(jì)數(shù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)用Kaplan-Meier 生存曲線和log-rank 檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NudCD1在肺癌組織中的表達(dá)

本研究共納入116 例患者，免疫組織化學(xué)顯示NudCD1 主要在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，為棕褐色。本研究非小細(xì)胞肺癌石蠟標(biāo)本中NudCD1 陽性表達(dá)99 例，陽性表達(dá)率85.3%。癌旁組織NudCD1 陽性表達(dá)29 例，陽性表達(dá)率25%。見圖1。

圖1 NudCD1 在肺癌組織中的表達(dá)（×200）（A：癌組織；B：癌旁組織）

2.2 NudCD1與肺癌病理、臨床特征的關(guān)系

NudCD1 蛋白表達(dá)增加與肺癌的病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)。見表1。

2.3 NudCD1與肺癌生存的相關(guān)分析

在非小細(xì)胞肺癌組織中，NudCD1 蛋白高表達(dá)的患者與低表達(dá)的患者相比，總生存較差，兩組整體生存曲線分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。

圖2 Kaplan-Meier 生存曲線

2.4 多因素Cox回歸分析

Cox 逐步多因素分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、臨床分期和NudCD1 均是肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響指標(biāo)。見表2。

該Cox 回歸模型還包括了年齡、性別、腫瘤大小等。

表1 NudCD1 與肺癌病理、臨床特征的關(guān)系

表2 多因素Cox 回歸分析

3 討論

NudCD1 作為NudC 蛋白家族的成員之一，在癌癥中存在潛在的重要生物學(xué)功能。NudCD1 作為原癌基因，與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，一方面可以導(dǎo)致染色體異常排列，細(xì)胞出現(xiàn)多個(gè)細(xì)胞極［3］。此外，NudCD1 還可以直接調(diào)控腫瘤進(jìn)展，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散/入侵。人NudCD1 基因位于染色體8q23.3，參與了腎癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌等發(fā)生和進(jìn)展，但有關(guān)非小細(xì)胞肺癌鮮有報(bào)道［4］。本研究中，非小細(xì)胞肺癌石蠟標(biāo)本中NudCD1 陽性表達(dá)率85.3%，明顯高于癌旁組織NudCD1 陽性表達(dá)率（25%），表明NudCD1 與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切。NudCD1 高表達(dá)與年齡、性別、腫瘤大小等因素?zé)o關(guān)，這與NudCD1 在其他腫瘤中表達(dá)結(jié)果一致。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級G2+G3期、臨床分期Ⅲ+Ⅳ期中NudCD1 表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級G1 期、臨床分期Ⅰ+Ⅱ期，這可能與NudCD1 促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移和浸潤有關(guān)，同時(shí)也說明NudCD1 表達(dá)水平可以作為臨床診斷、預(yù)測以及療效監(jiān)測新的標(biāo)志物。

惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展包含了多因素、多階段的過程，并由多種因素彼此作用。本研究通過Cox 模型進(jìn)行逐步回歸分析，結(jié)果顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級、臨床分期和NudCD1 均是肺癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響指標(biāo)。這些也都說明NudCD1參與了非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生物學(xué)活性?？梢哉fNudCD1 高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展程度有關(guān)，并與其他指標(biāo)存在關(guān)聯(lián)性。HAN 等［5］研究發(fā)現(xiàn)，NudCD1 在結(jié)腸癌組織中高度表達(dá)，參與了上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，這也是癌癥進(jìn)展的關(guān)鍵過程，同時(shí)抑制了細(xì)胞凋亡促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。HE 等［6］研究發(fā)現(xiàn)，NudCD1 上調(diào)會出現(xiàn)多核形態(tài)的束狀結(jié)構(gòu)異常微管，促進(jìn)細(xì)胞分裂和遷移。這些都說明NudCD1 與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展有關(guān)。本研究5 年隨訪顯示，NudCD1 基因陽性表達(dá)患者的5 年存活率明顯低于低表達(dá)患者，提示NudCD1 與患者的生存期相關(guān)，這也間接說明NudCD1 可以反映非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后，并可以作為非小細(xì)胞肺癌治療的新靶點(diǎn)。

總之，NudCD1 在非小細(xì)胞肺癌組織表達(dá)均上調(diào)，與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、進(jìn)展以及臨床預(yù)后密切相關(guān)，提示NudCD1 可以作為治療非小細(xì)胞肺癌新的靶點(diǎn)。