陳麗雄 王俊斌 李艷艷 徐鴻界 禹文海 馬 進(jìn) 楊鳳梅 段素琴 楊亞平 劉 權(quán) 和占龍 趙 遠(yuǎn)

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所，昆明 650118)

獼猴屬靈長目、類人猿亞目、猴科、獼猴屬動物。雌猴3歲達(dá)到性成熟，4～5歲體成熟；雄猴 4～5 歲性成熟，4.5～5歲才允許配種[1]。達(dá)到配種條件的獼猴統(tǒng)稱為繁殖猴。因其基因與人有97.5%的相似性[1]，71%的化合物與人類相似，獼猴被作為人類疾病動物模型廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)、神經(jīng)生理學(xué)、病毒學(xué)、心理學(xué)、傳染病學(xué)、行為學(xué)、計(jì)劃生育學(xué)、老年病學(xué)、腫瘤學(xué)和器官移植學(xué)等的研究[2]。黃芪多糖是中藥黃芪的主要活性成分之一，黃芪多糖具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，它能提高淋巴細(xì)胞的吞噬能力，對某些藥物及不同應(yīng)激模式下的免疫功能下降，均有顯著免疫增強(qiáng)作用[3]；并能有效改善動物腸道功能，具有一定的抑菌和抗病毒作用，在畜禽養(yǎng)殖中已被廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)通過在繁殖獼猴日糧中添加黃芪多糖，同時(shí)與未添加黃芪多糖之前對比，探討黃芪多糖對繁殖獼猴生長性能、血液生理、生化指標(biāo)及腹瀉發(fā)病率的影響。從而證實(shí)黃芪多糖在繁殖獼猴飼養(yǎng)中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

黃芪多糖由四川恒通動物制藥有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所自己飼養(yǎng)的成年實(shí)驗(yàn)獼猴。實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(滇)2015-0006，公母配比為1∶6～7，以籠為單位飼養(yǎng)。

1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%的黃芪多糖粉，每日飼喂一餐。不同年齡階段的獼猴選取60只，分3次采血：①實(shí)驗(yàn)前采血一次，稱體質(zhì)量一次。②實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后采血一次，稱體質(zhì)量一次。③實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后采血一次，稱體質(zhì)量一次。統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)前及實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后獼猴的腹瀉情況?；A(chǔ)日糧的配方組成見表1。

表1 飼料配方組成Table 1 composition of feed formula

1.4 生長性能指標(biāo)測定

分別在實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后、實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后稱體質(zhì)量，計(jì)算體質(zhì)量增加的情況。

1.5 血液生化、生理指標(biāo)測定

在實(shí)驗(yàn)前對繁殖獼猴進(jìn)行靜脈采血，血液2 000 r/min離心20 min,吸取血清，用于測定肝臟功能、腎臟功能、微量元素。采用全自動生化分析儀(Mindray BS-200全自動生化分析儀)測定。采用全自動血液分析儀(日本Sysmex公司)檢測血液生理指標(biāo)。主要查看白細(xì)胞、紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)等。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

通過Excel對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，采用SPSS 24.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 黃芪多糖對繁殖獼猴生長性能的影響

結(jié)果見表2，實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月、3個(gè)月與實(shí)驗(yàn)前相比體質(zhì)量都有了明顯的升高。從表中可以看出所有猴子的體質(zhì)量隨黃芪多糖的添加時(shí)間的延長不斷增加，4歲猴子實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月、3個(gè)月與實(shí)驗(yàn)前比較，增重差異顯著(P<0.05)。5～10歲猴子體質(zhì)量也隨黃芪多糖的添加時(shí)間而增加，實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較差異顯著(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較沒有明顯差異(P>0.05)。10歲以上的猴子體質(zhì)量也隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月、3個(gè)月與實(shí)驗(yàn)前比較，增重差異顯著(P<0.05)。

表2 不同年齡階段的繁殖猴的生長情況(kg)Table 2 growth of reproductive monkeys at different ages(kg)

2.2 黃芪多糖對繁殖獼猴血液生理指標(biāo)的影響

從整體趨勢來看隨著黃芪多糖添加時(shí)間的延長，白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)均逐漸升高。白細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)1月后與實(shí)驗(yàn)前比較顯著升高(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較白細(xì)胞數(shù)也有顯著升高(P<0.05)；淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較，差異并不顯著(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較差異也并不顯著(P>0.05)；淋巴細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)1月后和實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 繁殖猴血液生理指標(biāo)檢查結(jié)果Table 3 results of blood physiological examination in breeding monkeys

2.3 黃芪多糖對繁殖獼猴血液生化指標(biāo)的影響

2.3.1繁殖猴肝功能檢測結(jié)果：結(jié)果見表4，隨著黃芪多糖添加的時(shí)間變化，谷草轉(zhuǎn)氨酶的濃度不斷增高，實(shí)驗(yàn)1個(gè)月和3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較，差異均較顯著(P<0.05)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶的濃度也隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)前后比較差異顯著(P<0.05)。間接膽紅素的濃度也隨添加時(shí)間的延長而增加，但實(shí)驗(yàn)前后比較無明顯差異(P>0.05)?？偰懠t素的濃度也隨添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)1個(gè)月、3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較差異顯著(P<0.05)。白蛋白與球蛋白比值隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)前后比較差異顯著(P<0.05)。

表4 繁殖猴肝功能指標(biāo)檢測結(jié)果Table 4 results of liver function test in breeding monkeys

2.3.2繁殖猴腎功能檢測結(jié)果：結(jié)果見表5，從表中可以看出尿素隨黃芪多糖添加的時(shí)間延長不斷增高，實(shí)驗(yàn)后3個(gè)月與實(shí)驗(yàn)前比較差異顯著(P<0.05)。血糖隨著黃芪多糖的添加時(shí)間的延長不斷降低，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后比較差異顯著(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后比較無明顯差異(P>0.05)。

表5 繁殖猴腎功能指標(biāo)檢測結(jié)果Table 5 results of renal function test in breeding monkeys

2.3.3繁殖猴血脂檢測結(jié)果：結(jié)果見表6，血脂隨著黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，總膽固醇實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后比較差異較顯著(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后比較無明顯差異(P>0.05)。甘油三酯隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后、實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后比較差異顯著(P<0.05)。高密度脂蛋白和低密度脂蛋白均隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后、實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后比較差異較顯著(P<0.05)。

表6 繁殖猴血脂檢測結(jié)果Table 6 results of blood lipid test in breeding monkeys

2.3.4繁殖猴血液微量元素的檢測結(jié)果：結(jié)果見表7，鎂隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后、實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后比較差異較顯著(P<0.05)。鐵的含量隨黃芪多糖添加時(shí)間的延長而增加，實(shí)驗(yàn)前與實(shí)驗(yàn)1個(gè)月后、實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后比較差異較顯著(P<0.05)。

表7 繁殖猴血液微量元素的檢測結(jié)果Table 7 results of blood micronutrient test in breeding monkeys

2.3.5繁殖猴血液免疫物質(zhì)的檢測結(jié)果：結(jié)果見表8，除IgM外，所有免疫物質(zhì)實(shí)驗(yàn)3個(gè)月后與實(shí)驗(yàn)前比較數(shù)值呈上升趨勢，差異較顯著(P<0.05)。

表8 繁殖猴血液免疫物質(zhì)的檢測結(jié)果(g/L)Table 8 results of blood immune substances in breeding monkeys(g/L)

2.4 黃芪多糖對繁殖獼猴腹瀉的影響

飼養(yǎng)區(qū)內(nèi)共84個(gè)大籠。由圖1可知，實(shí)驗(yàn)期間以3天內(nèi)腹瀉籠數(shù)的平均數(shù)為一個(gè)統(tǒng)計(jì)點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果明顯看出腹瀉籠數(shù)是呈下降趨勢的，說明黃芪多糖對繁殖獼猴的腹瀉有很好的預(yù)防及治療效果。

圖1 黃芪多糖對繁殖獼猴猴腹瀉的影響Fig.1 Effect of astragalus polysaccharides on diarrhea of Breeding rhesus monkey

3 討論

3.1 黃芪多糖對繁殖獼猴生長性能的影響

黃芪多糖作為飼料添加劑能提高飼料中營養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率，促進(jìn)脂肪、糖類的沉積與血清總蛋白的生成，進(jìn)而提高飼料利用率，提高繁殖獼猴生長性能[4]。黃芪多糖能明顯改善小腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)，還能調(diào)節(jié)腸道微生物的平衡，改善腸道功能，提高營養(yǎng)物質(zhì)利用率。黃芪多糖可增加肉仔雞十二指腸、空腸及回腸的絨毛高度和寬度、黏膜厚度從而提高仔雞對飼料的消化率[4]。黃芪多糖可提高仔豬的回腸消化率[5]。黃芪多糖作為飼料添加劑時(shí)，在飼料中添加至0.5%和0.7%時(shí)可以顯著提高肉仔雞的平均日增重[6]。在仔豬飼料中添加0.2%，0.4%的黃芪多糖有效提高仔豬對飼料營養(yǎng)物的消化率[7]。本實(shí)驗(yàn)中隨著黃芪多糖添加時(shí)間的延長，繁殖獼猴年齡越小的體質(zhì)量增重就越快，年齡偏大的體質(zhì)量增重緩慢一些。

3.2 黃芪多糖對繁殖獼猴血液生理指標(biāo)的影響

白細(xì)胞的數(shù)量是反應(yīng)機(jī)體免疫狀態(tài)的一個(gè)重要指標(biāo)。有研究表明中草藥制劑能增加血液中白細(xì)胞的數(shù)量[8]。黃芪具有益氣健脾的作用，可以保護(hù)骨髓的功能增加外周血液的白細(xì)胞及血小板的數(shù)量從而提高免疫力。本實(shí)驗(yàn)中隨著黃芪多糖添加時(shí)間的延長白細(xì)胞的數(shù)量不斷升高。淋巴細(xì)胞數(shù)量也是機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分，其數(shù)量的增加也代表著機(jī)體抵抗力增強(qiáng)。

3.3 黃芪多糖對繁殖獼猴血液生化指標(biāo)的影響

谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶是動物肝細(xì)胞內(nèi)參與氨基酸代謝的重要酶，正常情況下分布在肝細(xì)胞以及其它組織內(nèi)，在非必需氨基酸和蛋白質(zhì)分解代謝中起重要的中介作用[9]。 黃芪多糖能明顯保護(hù)實(shí)驗(yàn)性肝損傷[10]。血糖水平降低從另一方面說明機(jī)體內(nèi)合成代謝加強(qiáng)，表明飼喂黃芪多糖后肝臟轉(zhuǎn)化以及組織細(xì)胞利用葡萄糖的能力增強(qiáng)了[11]。黃芪多糖具有雙向調(diào)節(jié)血糖的作用，能降低葡萄糖超負(fù)荷的小鼠的血糖，能明顯降低腎上腺素引起的小鼠的血糖升高反應(yīng)[12]。本實(shí)驗(yàn)研究表明在飼料中添加黃芪多糖對繁殖獼猴的肝腎功能沒有損傷，同時(shí)還具有一定的保護(hù)作用。

3.4 黃芪多糖對繁殖猴免疫力的影響

黃芪多糖能夠促進(jìn)動物機(jī)體免疫器官的發(fā)育增強(qiáng)機(jī)體免疫力[3]。黃芪多糖可以通過增加免疫器官質(zhì)量來提高機(jī)體免疫力[13]可以通過激活免疫細(xì)胞功能而增強(qiáng)機(jī)體免疫力[14]。還可以通過促進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟并特異性激活T細(xì)胞，增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞對T細(xì)胞的抗原呈遞能力，進(jìn)而提高機(jī)體細(xì)胞免疫[15]。黃芪多糖通過提高血液中球蛋白/白蛋白比值，增強(qiáng)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫的能力，從而提高動物機(jī)體免疫能力[16]。黃芪多糖對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用范圍極廣，不僅能調(diào)節(jié)固有的免疫系統(tǒng)，還能刺激、激活單核-巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞，對免疫器官、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及各種細(xì)胞因子都有調(diào)節(jié)作用，從而起到增強(qiáng)免疫力的作用[17]。黃芪多糖對繁殖獼猴的免疫功能有很好的調(diào)節(jié)作用。

3.5 黃芪多糖對繁殖獼猴腹瀉的影響

繁殖獼猴腹瀉主要是排便次數(shù)增加，形狀改變，總量增加。原因可由細(xì)菌病毒感染、著涼、應(yīng)激、免疫力低下、腸道菌群紊亂等原因引起。黃芪多糖有抗菌、抗病毒、防霉、防腐的作用。黃芪多糖能對多種病毒產(chǎn)生干擾、結(jié)合作用，也可促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬作用以殺滅病毒，同時(shí)還能誘生干擾素產(chǎn)生抗病毒作用[12]。黃芪多糖對大腸桿菌、沙門菌、綠膿桿菌具有明顯的抑制效果[18]，對志賀氏痢疾桿菌、金黃色球菌、a、b型溶鏈球菌肺炎雙球菌都能發(fā)揮出較好的抗菌作用[19]。黃芪多糖能明顯改善小腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)，提高小腸的消化率，還能調(diào)節(jié)腸道微生物菌群平衡，進(jìn)而改善動物的腸道功能[3]。黃芪多糖具有免疫增強(qiáng)作用，其主要是促進(jìn)動物胸腺、脾臟、淋巴結(jié)及各淋巴組織的增生，增強(qiáng)免疫器官的指數(shù)，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高動物機(jī)體對抗原的免疫應(yīng)答能力，提高動物機(jī)體免疫力[3]。黃芪多糖對繁殖獼猴的腹瀉有較明顯的防治效果。

綜上所述，在繁殖獼猴日糧中添加0.1%的黃芪多糖對繁殖獼猴的生長性能有改善作用，同時(shí)能提高繁殖獼猴的免疫力，降低腹瀉的發(fā)病率；降低抗生素的使用率，為提高繁殖獼猴的質(zhì)量，降低飼養(yǎng)成本起到了不可替代的作用。