賈修歧 楊新宇 金志民

摘要：為給大林姬鼠的深入研究提供生理生化基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，采用PAGE和SDS-PAGE方法，對(duì)大林姬鼠雌、雄個(gè)血清蛋白和組織蛋白進(jìn)行分離和比較分析。結(jié)果表明，大林姬鼠雌、雄個(gè)體血清蛋白均分離出14條譜帶，其電泳遷移率范圍為0.944～0.157，大林姬鼠組織蛋白分離出電泳遷移率由0.009～0.991的117條譜帶。大林姬鼠心臟、肝臟、腎臟、肌肉、腦、肺臟分別分離出44、52、30、37、41、37條譜帶，電泳譜帶的粗細(xì)、顏色深淺存在明顯差異，說明大林姬鼠雌雄個(gè)體間血清蛋白和組織蛋白既存在著聯(lián)系又有一定的差異。

關(guān)鍵詞：大林姬鼠;電泳;血清蛋白;組織蛋白

中圖分類號(hào)： S852.2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2019）18-0212-05

收稿日期：2019-03-12

基金項(xiàng)目：黑龍江省教育廳科研團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目“氣候變化對(duì)黑龍江省張廣才嶺森林嚙齒動(dòng)物群落格局動(dòng)態(tài)影響研究”;黑龍江省教育廳項(xiàng)目（編號(hào)：1353PT012、1353PT009）;黑龍江省牡丹江市科技項(xiàng)目（編號(hào)：2017H45）。

作者簡介：賈修歧（1994—），男，黑龍江雞西人，碩士，助教，主要從事動(dòng)物生理生化方向的研究工作。E-mail：799003144@qq.com。

通信作者：金志民，博士，教授，主要從事動(dòng)物學(xué)及其領(lǐng)域的研究。E-mail：swxjzm@126.com。

大林姬鼠（Apodemus peninsulae）為脊索動(dòng)物門、哺乳綱、嚙齒目、鼠科、姬鼠屬，是林區(qū)中較為常見的鼠類，體形細(xì)長，多棲息于林區(qū)、灌木叢、林區(qū)空地、林區(qū)邊緣的農(nóng)田之中[1]。

血清蛋白和組織蛋白電泳圖譜所表現(xiàn)出條帶的數(shù)目、寬窄，條帶顏色的深淺度以及電泳遷移率的大小都可從不同的角度客觀地反映該譜帶所對(duì)應(yīng)的等位基因的遺傳本質(zhì)和活性的強(qiáng)弱。目前，對(duì)大林姬鼠和蛋白質(zhì)電泳圖譜比較已有許多[2-6]，但關(guān)于大林姬鼠雌雄個(gè)體間血清蛋白和組織蛋白電泳圖譜比較分析還未見報(bào)道，本研究采用PAGE和SDS-PAGE的方法對(duì)大林姬鼠的血清蛋白和組織蛋白進(jìn)行比較分析，并建立大林姬鼠血清蛋白和組織蛋白圖譜，為大林姬鼠的深入研究和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化提供理論依據(jù)。

1?材料與方法

1.1.1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

大林姬鼠：于2018年10月用鼠籠捕自黑龍江省牡丹江市三道關(guān)林區(qū)（海拔329～386 m）的健康成年個(gè)體，雌雄個(gè)體各4只。

1.1.2?血清蛋白及組織蛋白樣品的制備

血清的制備：從大林姬鼠心臟采血，室內(nèi)靜置20 min后于4 000 r/min，4 ℃，離心20 min，上清液為血清。

組織蛋白的制備：分別取大林姬鼠的心臟、肝臟、腎臟、肌肉、腦、肺臟于離心管中，按照1 g ∶30 mL的比例加入5% SDS，用高速分散均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，85 ℃保溫1 h后離心（8 000 r/min，4 ℃，20 min），吸取上清液貯存于4 ℃冰箱中待測(cè)。

1.1.3?試驗(yàn)儀器

DYY-III2穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、HWS28型電熱恒溫水浴鍋（北京市六一儀器廠生產(chǎn)），高速冷凍離心機(jī)（Becrmantmcoultertm 64R Centrifuge），微量移液槍（Eppendorf），凝膠成像系統(tǒng)（美國Alpha公司，AlphaImager Mini）。

1.1.4?試驗(yàn)藥品

Tris、HCl、TEMED、過硫酸銨、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、甘氨酸、溴酚藍(lán)、蔗糖、巰基乙醇、十二烷基硫酸鈉（SDS）、甲醇、瓊脂糖、考馬斯亮藍(lán)R-250、丙三醇、冰乙酸等均為天津市永大化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)的分析純或生化試劑;次高分子量蛋白質(zhì)Marker（Solarbio生產(chǎn)）。

1.2?試驗(yàn)方法

分別采用PAGE和SDS-PAGE垂直板電泳的方法[7-8]，對(duì)大林姬鼠的血清蛋白和組織蛋白進(jìn)行分離、分析。為避免電泳處的譜帶具偶然誤差，分別在與每個(gè)樣本相鄰的點(diǎn)樣孔進(jìn)行3次重復(fù)點(diǎn)樣。血清蛋白和組織蛋白染色方法分別參照文獻(xiàn)[9-10]。

2?結(jié)果與分析

2.1?大林姬鼠血清蛋白電泳結(jié)果

2.1.1?電泳結(jié)果?電泳分離大林姬鼠血清蛋白得到電泳圖譜（圖1）及譜帶分布和電泳遷移率（表1）。

2.1.2?大林姬鼠雌、雄個(gè)體血清蛋白比較分析

由圖1和表1可知，大林姬鼠雌、雄個(gè)體分別分離出14條譜帶，其中7、13、14、16、19號(hào)譜帶為雌性大林姬鼠所特有，其遷移率分別在Ⅰ區(qū)內(nèi)大林姬鼠雌、雄個(gè)體共分離出5條譜帶，其中3號(hào)譜帶在4個(gè)區(qū)域內(nèi)活力最強(qiáng)，1號(hào)譜帶雌、雄活力一致;Ⅱ區(qū)4號(hào)、5號(hào)、6號(hào)共分離出6條譜帶，都為雌、雄共有帶且活力一致，活性11號(hào)=9號(hào)>8號(hào);Ⅲ區(qū)共有1～14號(hào)的10條譜帶，其中11、12號(hào)帶活力雌雄一致，且活性12號(hào)>11號(hào)，7、13、14號(hào)帶為雌性大林姬鼠所特有，且活性14號(hào)>13號(hào)>7號(hào)，8、9、10號(hào)帶為雄性大林姬鼠特有帶，且活性10號(hào)>9號(hào)=8號(hào);Ⅳ區(qū)共有15～19號(hào)的7條譜帶，其中17、18號(hào)帶為雌雄共有帶且活力一致，活性17號(hào)>18號(hào)。16、19號(hào)帶為雌性大林姬鼠特有帶，活性16號(hào)>19號(hào)，15號(hào)帶為雄性大林姬鼠特有帶。

2.2?大林姬鼠組織蛋白電泳結(jié)果

2.2.1?電泳結(jié)果?電泳分離大林姬鼠組織蛋白得到電泳圖譜（圖2）及譜帶分布和電泳遷移率（表2）。

2.2.2?大林姬鼠組織蛋白電泳譜帶分布分析

由圖2、表2可知，大林姬鼠的心臟、肝臟、腎臟、肌肉、腦、肺臟共分離出1～118 號(hào)電泳譜帶，其電泳遷移率為0.009～0.991。其中，心臟、肝臟、腎臟、肌肉、腦、肺臟6個(gè)部位分別分離出44、52、30、37、41、37條譜帶。將組織蛋白電泳圖譜從陰極至陽極分為6個(gè)區(qū)域：Ⅰ區(qū)：小于43 ku，Ⅱ區(qū)：43.0～<66.2 ku 之間，Ⅲ區(qū)：66.2～<97.4 ku之間，Ⅳ區(qū)：97.4～<130 ku 之間，Ⅴ區(qū)：130～200 ku之間，Ⅵ區(qū)：蛋白質(zhì)分子量大于200 ku。

在Ⅰ區(qū)中共分離出1～40號(hào)40條譜帶，電泳遷移率為0.991～0.707，15、25號(hào)譜帶為心臟特有譜帶，其蛋白質(zhì)電泳活性比較為：15號(hào)>25號(hào);22、29、33號(hào)譜帶為肝臟特有帶，其蛋白質(zhì)電泳活性比較為：33號(hào)>29號(hào)>22號(hào);第24、34號(hào)譜帶為腎臟特有譜帶，蛋白質(zhì)電泳活性比較：24號(hào)>34號(hào);4、10、36號(hào)譜帶為肌肉特有譜帶，其蛋白質(zhì)電泳活性比較：10號(hào)>36號(hào)>4號(hào)。12、31號(hào)譜帶為心臟、肝臟、腎臟、肌肉、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較12號(hào)：肌肉>肝臟>心臟>腎臟>肺臟，31號(hào)：肌肉>腎臟>肝臟>肺臟>心臟;14、26號(hào)譜帶為肝臟、腎臟、肌肉、肺臟共有譜帶，蛋白質(zhì)活性比較：14號(hào)：肌肉>肝臟>肺臟>腎臟，26號(hào)：肌肉>肝臟>腎臟>肺臟;37號(hào)譜帶為心臟、肝臟、腎臟、腦所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>心臟>腎臟>腦;38號(hào)譜帶為肝臟、肌肉、腦、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>肌肉>肺臟>腦;5、9號(hào)譜帶為肝臟、腎臟、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：9號(hào)>5號(hào);18、21號(hào)帶為心臟、肌肉、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉>肺臟>腦;2號(hào)帶為腎臟、肌肉、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉>肺臟>腎臟;7號(hào)帶為心臟、肝臟、腦共有帶，遷移率為0.948，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>肝臟> 腦;8號(hào)帶為心臟、腦、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肺臟>腦>心臟;30號(hào)帶為肝臟、腎臟、腦所共有，蛋白質(zhì)活性比較：腎臟>肝臟>腦;11、13、32號(hào)帶為心臟、腦共有譜帶，蛋白質(zhì)活性比較：13號(hào)>32號(hào)>11號(hào);16、19、27號(hào)帶為肝臟、腦共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：16號(hào)>27號(hào)>19號(hào);3號(hào)帶為腎臟、腦共有帶，遷移率為0.974，蛋白質(zhì)活性比較：腎臟>腦;17號(hào)帶為心臟、腎臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：腎臟>心臟;20號(hào)譜帶為肝臟、腎臟共有譜帶，蛋白質(zhì)活性比較：腎臟>肝臟;28號(hào)譜帶為心臟、肺臟共有譜帶，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>肺臟。

在Ⅱ區(qū)共分離出41～70號(hào)30條譜帶，遷移率為0.698～0.474。其中，53號(hào)帶為心臟特有帶;49、51、59號(hào)帶為肝臟特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：51號(hào)>49號(hào)>59號(hào);45、55號(hào)帶為腎臟特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：55號(hào)>45號(hào);68號(hào)帶為肌肉特有帶，遷移率為0.478;50、61號(hào)帶為腦特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：50號(hào)>61號(hào);54號(hào)帶為肺臟特有帶;52號(hào)譜帶為肝臟、腎臟、肌肉、腦、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>腦=肺臟>腎臟>肌肉;46號(hào)帶為心臟、肝臟、腦、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>肺臟>肝臟>腦;57號(hào)帶為肝臟、腎臟、肌肉、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>肌肉>腎臟>肺臟;60號(hào)帶為心臟、肝臟、肌肉、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：心臟=肝臟=肺臟>肌肉;70號(hào)帶為心臟、肌肉、腦、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：心臟=肌肉=腦>肺臟;41號(hào)帶為肝臟、腎臟、肌肉共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>肌肉>腎臟;42號(hào)帶肝臟、腦、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>腦>肺臟;44號(hào)帶為肝臟、肌肉、腦共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟=肌肉>腦;48號(hào)帶為心臟、腎臟、腦所共有，蛋白質(zhì)活性比較：腦>心臟>腎臟;56號(hào)帶為心臟、肝臟、肌肉所共有，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>肌肉>肝臟;62號(hào)帶為心臟、肝臟、腎臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：腎臟>心臟>肝臟;65號(hào)帶為心臟、肝臟、肌肉共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>肌肉>心臟;43、58號(hào)帶為心臟、腦共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：43號(hào)>58號(hào);47號(hào)帶為肝臟、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肺臟>肝臟;63號(hào)帶為肌肉、腦共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉> 腦;67號(hào)帶為心臟、肝臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>心臟。

在Ⅲ區(qū)共分離出71～86號(hào)15條譜帶，遷移率為0.467～0.328。其中，83、76、78號(hào)帶為心臟、肺臟、肌肉特有帶，71、73、77、81、83號(hào)帶為腦特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：71號(hào)=73號(hào)>83號(hào)>77號(hào)=81號(hào);86號(hào)帶為肝臟、腎臟、肌肉、腦、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肺臟>肝臟>腎臟>肌肉=腦;84號(hào)帶為心臟、肝臟、肌肉、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>肌肉>心臟>肺臟;82號(hào)譜帶為肝臟、肌肉、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟=肌肉>肺臟;72、80號(hào)譜帶為肝臟、腎臟所共有，蛋白質(zhì)活性一致;75號(hào)帶為心臟、肝臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟> 心臟;74號(hào)譜帶為肝臟、肌肉共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉>肝臟;79號(hào)譜帶為腎臟、肌肉共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉>腎臟。

在Ⅳ區(qū)共分離出87～101號(hào)15條譜帶，遷移率為0.323～0.190。其中，87、91、95號(hào)帶為肌肉特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：91號(hào)>87號(hào)=95號(hào);89、97號(hào)帶為肺臟特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：97號(hào)>89號(hào);93、99、100分別為腦、肝臟、心臟特有帶;88號(hào)帶為心臟、腦、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>腦>肺臟;90號(hào)帶為心臟、肝臟、腎臟、腦所共有，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>肝臟>腎臟>腦;92號(hào)帶為心臟、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>肺臟;94號(hào)帶為肝臟、腎臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>腎臟;96號(hào)帶為心臟、肝臟、肌肉、腦所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉>心臟=肝臟>腦;98號(hào)帶為肝臟、肌肉共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肌肉>肝臟;101號(hào)帶為心臟、肌肉、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肺臟>心臟>肌肉。

在Ⅴ區(qū)共分離出102～110號(hào)9條譜帶，遷移率為0.185～0.095。其中，102號(hào)帶為腦特有帶;103～106號(hào)帶為腦特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：103號(hào)>104號(hào)=105號(hào)=106號(hào);107號(hào)帶為肝臟、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性：肺臟>肝臟;108號(hào)帶為心臟、腦共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：心臟>腦;109號(hào)帶為肝臟、腦共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>腦;110號(hào)帶為肝臟、肌肉、肺共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肝臟>肺臟>肌肉。

在Ⅵ區(qū)共分離出111～118號(hào)8條譜帶，遷移率為0.086～0.009。其中，111、116號(hào)帶為腦特有帶，蛋白質(zhì)活性比較：111>116;112、114為肝臟特有帶，蛋白質(zhì)活性一致;118號(hào)帶為肌肉特有帶;113號(hào)帶為腎臟、肺臟共有帶，蛋白質(zhì)活性比較：肺臟>腎臟;115號(hào)帶為心臟、腎臟、腦、肺臟所共有，蛋白質(zhì)活性比較：肺臟=腦>心臟>腎臟;117號(hào)帶為腎臟、肌肉共有帶，其蛋白質(zhì)活性一致。

3?小結(jié)

大林姬鼠雌、雄個(gè)體之間血清蛋白的譜帶數(shù)量和分布相似，但活性存在著顯著差別。這與雌、雄個(gè)體之間的體貌特征、生理結(jié)構(gòu)、雌雄激素的分泌水平密切相關(guān)。球蛋白與機(jī)體的免疫功能密切相關(guān)[6]，在球蛋白區(qū)大林姬鼠所表現(xiàn)出的譜帶特征說明， 雌性大林姬鼠相比于雄性大林姬鼠有較強(qiáng)的抗逆性;大林姬鼠的心臟、肝臟、腎臟、腦、肺臟組織蛋白譜帶的活性及分布存在差別。這與物種間基因的選擇性表達(dá)密切相關(guān)。

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