陳文濤，徐子葉，單體中

（浙江大學(xué)動(dòng)物分子營(yíng)養(yǎng)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所，浙江杭州 310058）

我國(guó)是世界上最大的豬肉生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)。在過(guò)去30 余年，通過(guò)大量的良種引進(jìn)、營(yíng)養(yǎng)水平和環(huán)境條件改善等措施，豬的生長(zhǎng)速度和飼料轉(zhuǎn)化效率得到大幅度提高，豬的產(chǎn)肉性能也得到了很大提升，豬肉產(chǎn)量已基本能滿足人們的需要。然而，隨著國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，消費(fèi)者越來(lái)越關(guān)注肉品質(zhì)、口感、風(fēng)味和營(yíng)養(yǎng)等，豬肉品質(zhì)問(wèn)題已成為養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展亟需解決的關(guān)鍵問(wèn)題之一。因此，如何生產(chǎn)安全優(yōu)質(zhì)的豬肉產(chǎn)品是目前畜牧工作者研究的熱點(diǎn)。

豬肉品質(zhì)的評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括肉色、嫩度、風(fēng)味、大理石紋、肌內(nèi)脂肪含量和脂肪酸組成等，其影響因素主要包括品種、營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等。其中，營(yíng)養(yǎng)調(diào)控是目前改善和提高豬肉品質(zhì)的有效措施之一。共軛亞油酸（Conjugated Linoleic Acid，CLA）作為一類必需脂肪酸，具有多種生物學(xué)功能，在調(diào)控糖脂代謝、免疫、癌癥發(fā)生和肌肉及骨骼發(fā)育等方面均發(fā)揮重要作用[1]。在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，CLA 可以降低動(dòng)物機(jī)體體脂沉積、提高肌內(nèi)脂肪含量、改變脂肪酸組成以及影響肌纖維類型等。因此，本文在闡述CLA 的結(jié)構(gòu)和功能的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)論述了CLA 對(duì)豬肉品質(zhì)的影響及可能的調(diào)控機(jī)制，為通過(guò)營(yíng)養(yǎng)調(diào)控策略改善豬肉品質(zhì)提供一定的理論依據(jù)。

1 CLA 的結(jié)構(gòu)與功能

1.1 CLA 的結(jié)構(gòu)與來(lái)源 CLA 是一類含有18 個(gè)碳原子和2 個(gè)雙鍵的脂肪酸的總稱。CLA 主要有2 個(gè)來(lái)源：一個(gè)是反芻動(dòng)物瘤胃細(xì)菌發(fā)酵，是氫化亞油酸或亞麻酸為硬脂酸的中間產(chǎn)物；另一個(gè)是通過(guò)δ-9-去飽和酶對(duì)異檸檬酸的去飽和作用，在反芻動(dòng)物乳腺中內(nèi)源性形成[2]。在這些異構(gòu)體中，反式-10（t10）、順式-12（c12）和順式-9（t9）、反式-11（c11）CLA 因其廣泛的生物效應(yīng)而成為研究重點(diǎn)。這2 種異構(gòu)體在結(jié)構(gòu)、來(lái)源和功能方面均有顯著差異。比如，天然存在的異構(gòu)體80%以上均是c9-t11-CLA，t10-c12-CLA 主要來(lái)自于化學(xué)合成，天然存在含量很低。除了具有抗癌和抗動(dòng)脈粥樣硬化的生物活性，這2 種異構(gòu)體都有一些獨(dú)特功能。c9-t11-CLA 對(duì)預(yù)防和抑制癌癥發(fā)生和腫瘤生長(zhǎng)的效果更顯著，t10-c12-CLA 則可降低體脂、提高瘦肉率和調(diào)節(jié)脂肪酸組成[3]。

1.2 CLA 的代謝 CLA 在生物系統(tǒng)內(nèi)的代謝過(guò)程與脂肪酸一致。飼糧中的CLA 在脂肪酶作用下分解，經(jīng)過(guò)腸道的消化吸收和血液循環(huán)運(yùn)輸?shù)礁闻K等組織，在體內(nèi)進(jìn)行利用。補(bǔ)充的CLA 主要沉積在甘油三酯和磷脂中，CLA 的代謝產(chǎn)物也能在動(dòng)物組織中檢測(cè)到[4]。然而，由于c9-t11-CLA 和t10-c12-CLA 結(jié)構(gòu)不同，在代謝水平上也存dkkdddd12 異構(gòu)體抵制C20:3 和C20:4 形成，生成C18:3[5]，但CLA 的幾何結(jié)構(gòu)和雙鍵位置不影響其在小腸內(nèi)吸收[6]。此外，CLA 不會(huì)擾亂所有非共軛不飽和脂肪酸的代謝，僅影響其代謝產(chǎn)物沉積到中性脂質(zhì)和磷脂中的比例[7]。中性脂質(zhì)比例的差異間接影響不同組織中脂肪酸的組成模式和脂肪含量，而磷脂是生物體內(nèi)代謝的重要調(diào)控成分?？梢?jiàn)，CLA 異構(gòu)體間的差異性主要來(lái)自于不同組織和細(xì)胞沉積異構(gòu)體的能力。

1.3 CLA 的生理功能

1.3.1 調(diào)節(jié)糖脂代謝 糖脂代謝是細(xì)胞的基本生命活動(dòng)之一，CLA 與脂肪合成與分解、糖原的利用和分配等糖脂代謝密切相關(guān)。t10-c12-CLA 處理可以降低內(nèi)臟、腹股溝等脂肪沉積，增加血漿葡萄糖濃度，提高白色脂肪的分解代謝活性[8]，提示CLA 可通過(guò)促進(jìn)脂質(zhì)分解降低脂肪沉積。另外，CLA 可以作用于骨骼肌和肝臟等代謝器官，通過(guò)激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome Proliferators-Activated Receptor Gamma，PPARγ）途徑上調(diào)脂聯(lián)素的表達(dá)，改善胰島素敏感性，降低血糖濃度，調(diào)控糖代謝穩(wěn)態(tài)[9]。

1.3.2 抗氧化作用 CLA 能清除體內(nèi)自由基，增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化酶系統(tǒng)活性。CLA 處理后的大鼠血液和肝臟中過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（Glutathione S-transferase，GST）酶活性大幅度增加[10]。CLA 的抗氧化作用在家禽上也得到證實(shí)。吳國(guó)玲[11]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充CLA 可顯著影響雞血清中總超氧化物歧化酶（Total Superoxide Disumutase，T-SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）水平；隨著CLA 添加量增加，T-SOD 和GSH-Px 呈先升高后降低的趨勢(shì)，并且CLA 的抗氧化性能優(yōu)于維生素A。

1.3.3 抗炎反應(yīng) CLA 在多種炎癥動(dòng)物模型中發(fā)揮有益作用。CLA 能降低人肺癌細(xì)胞中腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor-Alpha，TNF-α）、白 細(xì) 胞介素-1β（Interleukin 1 Beta，IL-1β）和前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的產(chǎn)生，但對(duì)白細(xì)胞介素6（Interleukin 6，IL-6）的產(chǎn)生沒(méi)有顯著影響[12]。CLA 可減少牛乳腺上皮細(xì)胞中大腸桿菌引起的炎癥反應(yīng)，這種作用是通過(guò)TLR4-NF-κB 和PPARγ 途徑參與介導(dǎo)的[13]。另外，膳食補(bǔ)充CLA 緩解了葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)的結(jié)腸炎引起的體重減輕和直腸出血，這種有益效應(yīng)與PPARγ、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ 共激活因子1α（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma Coactivator 1-Alpha，PGC1-α）和TNF-α表 達(dá)變化有關(guān)[14]。豬飼料中添加CLA 減輕了由脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）刺激誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制和IL-6 和TNF-αmRNA 表達(dá)的升高[15]。

1.3.4 抗癌作用 CLA 對(duì)前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞和胃癌細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞均有顯著抑制作用[16]，抗癌效果與CLA 的劑量有關(guān)。c9-t11-CLA 和t10-c12-CLA均能抑制體內(nèi)血管生成[17]，通過(guò)降低血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Endothelial Growth Factor，VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（Fibroblast Growth Factor，F(xiàn)GF）水平以及阻斷胎肝激酶1（Fetal Liver Kinase-1，F(xiàn)LK-1）受體發(fā)揮其抗癌作用，從而抑制對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和存活至關(guān)重要的血管生長(zhǎng)[18]。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡也是抗癌的重要途徑，CLA 可由蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β（Protein Kinase B，AKT/Glycogen Synthase Kinase3β，GSK3β）和腺苷酸激活蛋白激酶（Adenosine 5′-Monophosphate（AMP）-Activated Protein Kinase，AMPK）途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抗腫瘤的生物活性[19-20]。CLA 抗癌作用涉及了多種細(xì)胞活動(dòng)，抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)血管生成是其發(fā)揮抗癌作用的關(guān)鍵途徑。

1.3.5 調(diào)控骨骼發(fā)育 骨骼與能量代謝以及葡萄糖和脂肪調(diào)控密切相關(guān)。飼喂高脂肪飲食會(huì)導(dǎo)致骨骼形成受損，飲食中添加CLA 會(huì)對(duì)小鼠和細(xì)胞中的骨代謝產(chǎn)生積極影響[21]。CLA 能夠調(diào)節(jié)參與骨骼生成和能量代謝的基因的表達(dá)，進(jìn)而對(duì)骨代謝發(fā)揮有益作用[22]。CLA 處理后，前成骨細(xì)胞中堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）、runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runt-Related Transcription Factor 2，RUNX2）和骨鈣素（Osteocalcin，OCN）表達(dá)上調(diào)，說(shuō)明CLA可以通過(guò)AKT/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian Target Of Rapamycin Complex 1，mTORC1）信號(hào)途徑刺激成骨細(xì)胞的分化[23]。Rahman 等[24]研究表明，CLA 通過(guò)顯著抑制核因子受體活化蛋白配體（Receptor Activator Of Nuclear Factor Kappa-B Ligand，RANKL）誘導(dǎo)的核因子-κB（Nuclear Factor-Kappa B，NF-κB）活化途徑來(lái)抑制破骨細(xì)胞生成。

2 CLA 對(duì)豬肉品質(zhì)的影響

2.1 CLA 對(duì)豬肉感官品質(zhì)的影響 肉的感官品質(zhì)是肉質(zhì)評(píng)價(jià)的重要參考，包括肉色、系水力、嫩度、風(fēng)味和pH。CLA 經(jīng)過(guò)體內(nèi)的消化、吸收、代謝和沉積過(guò)程差異性地影響肉的生理生化指標(biāo)，進(jìn)而引起豬肉感官品質(zhì)的變化。

許多研究證實(shí)了CLA 在提高豬肉感官品質(zhì)方面的有益效果。劉倩倩等[25]發(fā)現(xiàn)，CLA 能提高豬肉的肉色評(píng)分和大理石花紋評(píng)分，但對(duì)豬肉的嫩度、系水力、風(fēng)味及pH 等無(wú)顯著影響。王琪等[26]報(bào)道，飼糧中持續(xù)添加1.5% CLA 能顯著提高育肥豬眼肌面積、肌內(nèi)脂肪、肉色評(píng)分和大理石紋評(píng)分，極顯著提高屠宰重、肌肉pH。Barnes 等[27]研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加CLA 有增加大理石紋的趨勢(shì)，CLA 對(duì)大理石花紋的影響可能與增加肌肉內(nèi)脂肪細(xì)胞大小有關(guān)。Joo 等[28]也發(fā)現(xiàn)，飼喂 CLA 日糧可增加豬肌內(nèi)脂肪含量和系水力，同時(shí)抑制肌肉的脂質(zhì)氧化，提高肉色穩(wěn)定性。但CLA 的作用效果受CLA 的添加劑量和時(shí)間及豬品種、性別和日齡等多種因素影響。

2.2 CLA 對(duì)豬肉中脂肪酸組成的影響 脂肪酸作為一種能源物質(zhì)，不僅是動(dòng)物細(xì)胞調(diào)節(jié)和新陳代謝不可缺少的成分，同時(shí)決定了脂肪的物理和質(zhì)地特性以及肌肉的氧化穩(wěn)定性，對(duì)肉類的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值起著關(guān)鍵作用。CLA 能增加組織中脂肪酸的飽和度，并且提高多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acids，PUFA）與單不飽和脂肪酸（Monounsaturated Fatty Acids，MUFA）的比例[29]。Cordero 等[30]報(bào)道，日糧中補(bǔ)充CLA 不僅線性增加豬背最長(zhǎng)肌中肌內(nèi)脂肪含量，同時(shí)增加肌肉和脂肪組織中飽和脂肪酸（Saturated Fatty Acid，SFA）的水平，降低MUFA 的水平。Tous 等[31]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加CLA 提高母豬背最長(zhǎng)肌、半膜肌、肝臟及皮下脂肪的SFA 比例，降低皮下脂肪和背最長(zhǎng)肌MUFA 及肝臟、半膜肌和皮下脂肪的PUFA 水平，表明CLA 調(diào)控脂肪酸組成的效果具有高度組織特異性。

此外，補(bǔ)充CLA 不僅調(diào)控機(jī)體組織中脂肪酸組成，而且可以改變?nèi)橹暮铣珊椭舅岬谋壤?。Peng等[32]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)充CLA 影響母乳脂肪酸組成，膳食CLA 增加了總SFA 的濃度，同時(shí)降低了初乳中的總MUFA，但不影響總MUFA 濃度。Krogh 等[33]試驗(yàn)評(píng)估了膳食CLA 對(duì)初乳的產(chǎn)量和組成、初產(chǎn)期和母豬產(chǎn)奶量的影響，結(jié)果表明CLA 改善了初乳中乳脂率和脂肪酸組成，并刺激產(chǎn)奶量的提高，但不影響初乳中蛋白質(zhì)、干物質(zhì)和乳糖的含量?？梢?jiàn)，CLA 在母體的沉積效果會(huì)通過(guò)乳汁傳遞給后代。

3 CLA 調(diào)控豬肉品質(zhì)的機(jī)制

影響豬肉品質(zhì)的直接關(guān)鍵因素是脂肪（肌內(nèi)脂肪）沉積和肌肉發(fā)育（肌纖維類型）；而糖脂代謝是最主要的生命活動(dòng)之一，與脂肪沉積、肌肉發(fā)育和肉品質(zhì)形成密切相關(guān)。因此，CLA 對(duì)豬肉品質(zhì)的調(diào)控機(jī)制可歸納為3 條途徑：①CLA 對(duì)脂肪沉積的調(diào)控機(jī)制；②CLA對(duì)肌肉發(fā)育（肌纖維類型）的調(diào)控機(jī)制；③CLA 對(duì)糖脂代謝的調(diào)控機(jī)制（圖1）。無(wú)論哪種途徑，CLA 在體內(nèi)的生理反應(yīng)都離不開(kāi)動(dòng)物機(jī)體中相關(guān)基因及相關(guān)信號(hào)通路的參與。

圖1 CLA 調(diào)控豬肉品質(zhì)形成的作用機(jī)制

3.1 CLA 對(duì)脂肪沉積的調(diào)控機(jī)制

3.1.1 CLA 抑制脂肪細(xì)胞的分化 脂肪前體細(xì)胞經(jīng)過(guò)增殖和分化過(guò)程才能轉(zhuǎn)化為成熟的脂肪細(xì)胞，CLA 通過(guò)調(diào)控脂肪分化關(guān)鍵基因的表達(dá)影響脂肪沉積量。PPARγ和CCAAT/ 增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（CCAAT/enhance Binding Proteins，C/EBPs）是調(diào)控脂肪細(xì)胞分化的關(guān)鍵基因。Kang 等[34]報(bào)道，t10-c12 CLA 顯著抑制脂肪組織中PPARγ的表達(dá)，體脂增加明顯減少。CLA 處理導(dǎo)致3T3-L1 前脂肪細(xì)胞中C/EBPα和PPARγ的表達(dá)下調(diào)[35]，說(shuō)明CLA 會(huì)抑制前體脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞。調(diào)控脂肪分化的信號(hào)通路的活性，可調(diào)控下游靶基因表達(dá)，也能調(diào)控脂肪細(xì)胞的分化進(jìn)程。Wnt/β-catenin 是一條抑制脂肪生成的重要信號(hào)通路。Yeganeh 等[36]研究發(fā)現(xiàn)，t10-c12-CLA 通過(guò)影響3T3-L1 脂肪細(xì)胞中的Wnt/β-catenin 途徑來(lái)抑制脂肪細(xì)胞分化，增強(qiáng)PPARγ在無(wú)活性復(fù)合物中的螯合，從而防止脂肪生成。

CLA 調(diào)控分化的途徑是復(fù)雜多樣的，除了通過(guò)調(diào)控脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因的表達(dá)水平外，CLA 也影響相關(guān)miRNA 表達(dá)。Wang 等[37]采用高通量測(cè)序方法研究CLA 對(duì)脂肪組織miRNA 的影響，篩選并鑒定出參與Wnt 信號(hào)傳導(dǎo)途徑的14 種miRNA，并通過(guò)影響脂肪細(xì)胞分化途徑和改變胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)調(diào)控體脂沉積。這與Qi 等[38]研究結(jié)果相同，即CLA 通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪組織中的miRNA 表達(dá)來(lái)降低體脂沉積。上述研究結(jié)果表明，CLA 可通過(guò)調(diào)控miRNA，調(diào)控下游靶基因的表達(dá)，進(jìn)而影響脂類代謝和肉品質(zhì)形成。

另外，CLA 可以差異性調(diào)控豬皮下脂肪前體細(xì)胞和肌內(nèi)脂肪前體細(xì)胞的分化進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn)，CLA 可降低皮下脂肪含量，促進(jìn)肌內(nèi)脂肪沉積，改善胴體品質(zhì)，其機(jī)制是 CLA 通過(guò)降低皮下脂肪細(xì)胞特異性基因的表達(dá)以及脂肪前體細(xì)胞數(shù)量，提高肌內(nèi)脂肪組織特異性基因的表達(dá)促進(jìn)肌內(nèi)脂肪沉積[39]。

3.1.2 CLA 誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡 激活脂肪細(xì)胞凋亡途徑，導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡過(guò)程的失衡是CLA 調(diào)控脂肪沉積的又一途徑。Corino 等[40]報(bào)道，CLA 處理后豬的前體脂肪細(xì)胞增殖率降低，而脂肪細(xì)胞凋亡數(shù)量增多。然而，CLA 誘導(dǎo)體脂肪減少和脂肪細(xì)胞凋亡的作用具有異構(gòu)體特異性。Zhai 等[41]在體外用高劑量的CLA 長(zhǎng)期處理培養(yǎng)的3T3-L1 細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)t10-c12-CLA 能刺激脂肪細(xì)胞凋亡，但c9-t11-CLA 不會(huì)促進(jìn)脂肪細(xì)胞凋亡。Qi 等[42]研究發(fā)現(xiàn)，CLA 處理顯著下調(diào)miR-23a 的表達(dá)，進(jìn)而通過(guò)凋亡蛋白酶激活因子1（Apoptotic Protease Activating Factor-1，APAF1）誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的凋亡。t10-c12-CLA 處理后的小鼠會(huì)促進(jìn)TNF-α和IL-6基因表達(dá)[43]，而TNF-α 在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要功能。Ou 等[44]報(bào)道，CLA 處理增加C/EBP 同源蛋白（C/EBP Homologous Protein，CHOP）表達(dá)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Qi 等[45]在豬上的試驗(yàn)證實(shí)，CLA 會(huì)降低抗凋亡因子Bcl-2 的表達(dá)，增加促凋亡因子Bax 和P53 的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)脂肪細(xì)胞凋亡來(lái)減少豬體脂沉積。上述結(jié)果表明，CLA 可以通過(guò)不同機(jī)制誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡進(jìn)而影響脂質(zhì)代謝。

3.1.3 CLA 調(diào)控脂滴形成 脂滴是存儲(chǔ)中性脂質(zhì)的胞質(zhì)細(xì)胞器，對(duì)脂肪沉積及能量代謝至關(guān)重要，CLA 可通過(guò)調(diào)控脂滴的形態(tài)和數(shù)量來(lái)調(diào)節(jié)甘油三酯的儲(chǔ)存。t10-c12-CLA 可以減少小鼠白色脂肪組織和體外培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞中的脂滴；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，t10-c12-CLA 可增加脂解和改變脂肪細(xì)胞脂滴形態(tài)，而不是c9-t11-CLA[46]。另外，t10-c12-CLA 會(huì)改變豬卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中細(xì)胞質(zhì)脂滴的分布和形態(tài)，從而以時(shí)間依賴性方式降低其脂質(zhì)含量[47]。

CLA 調(diào)控脂滴形成的過(guò)程實(shí)際上是通過(guò)脂滴蛋白發(fā)揮作用。t10-c12-CLA 介導(dǎo)的脂肪細(xì)胞甘油三酯含量的減少與脂滴相關(guān)蛋白的差異定位和表達(dá)相關(guān)，該過(guò)程通過(guò)激活mTOR/p70S6K/S6 信號(hào)傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)對(duì)脂肪分化相關(guān)蛋白（Adipocyte Differentiation Related Protein，ADRP）的翻譯控制和對(duì)Perilipin A 的轉(zhuǎn)錄控制[48]。Yeganeh 等[49]報(bào)道，t10-c12-CLA 激活PKCα 途徑調(diào)控脂滴的數(shù)量和脂滴蛋白的磷酸化水平，進(jìn)而調(diào)控脂肪沉積。另外，Stringer 等[50]利用Zucker 大鼠（胰島素抵抗和代謝綜合征的模型）評(píng)估CLA 對(duì)肝臟脂肪變性的作用，結(jié)果表明c9-t11-CLA 處理的肝細(xì)胞中具有更少的細(xì)胞質(zhì)脂滴，但是這些脂滴的尺寸更大；而t10-c12-CLA 處理的肝細(xì)胞具有更多數(shù)量的脂質(zhì)小滴，且脂滴的變化與較低的Perilipin 2 水平相關(guān)。

3.2 CLA 對(duì)肌肉發(fā)育（肌纖維類型）的調(diào)控機(jī)制 肌纖維是肌肉的基本組成成分，肌肉的生長(zhǎng)發(fā)育與肌纖維的長(zhǎng)度、直徑和類型密切相關(guān)。肌纖維的數(shù)量在胚胎期已經(jīng)確定，出生后不再改變，肌纖維直徑和長(zhǎng)度依賴于肌衛(wèi)星細(xì)胞的發(fā)育，肌纖維類型的轉(zhuǎn)化則伴隨著整個(gè)機(jī)體發(fā)育時(shí)期。CLA 可通過(guò)改變與肌肉生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的基因表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)肌纖維組成和類型。體外研究表明，c9-t11-CLA 處理可提高C2C12 細(xì)胞的增殖和分化，而t10-c12-CLA 顯著抑制細(xì)胞增殖和分化進(jìn)程[51]，表明不同CLA 異構(gòu)體對(duì)肌肉生長(zhǎng)存在差異性調(diào)控。此外，用t10-c12-CLA 孵育C2C12 細(xì)胞，降低了肌肉特異性基因肌酸激酶、肌細(xì)胞生成素、肌球蛋白重鏈的表達(dá)，從而抑制了肌管的形成[52]。

肌纖維的組成和比例與肉品質(zhì)有密切關(guān)系，肌球蛋白重鏈I（Myosin Heavy Chain I，MyHC I）和MyHC Ⅱa 比例越高，豬肉的pH、肉色、嫩度和風(fēng)味等與肉品質(zhì)相關(guān)的指標(biāo)就越高。體內(nèi)外試驗(yàn)均證明了CLA 在促進(jìn)肌纖維轉(zhuǎn)化方面的功能。在日糧中添加1.5%的CLA，生長(zhǎng)肥育豬的MyHC I 和MyHC Ⅱa mRNA 表達(dá)量顯著高于對(duì)照組，而MyHC Ⅱb 和MyHC Ⅱx mRNA 表達(dá)量顯著低于對(duì)照組[53]。Huang 等[54]研究也發(fā)現(xiàn)，CLA顯著影響肌纖維型基因的表達(dá)，顯著提高M(jìn)yHC I 和MyHC Ⅱa 表達(dá)，下調(diào)MyHC Ⅱx 表達(dá)，但對(duì)MyHCⅡb mRNA 表達(dá)影響不顯著。另外，體外培養(yǎng)的豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞向肌纖維轉(zhuǎn)化時(shí)，添加不同水平CLA 均能提高M(jìn)yHC I 和MyHC Ⅱa 型肌纖維比例，降低MyHC Ⅱb 和MyHC Ⅱx 型肌纖維比例[55]。重要的是，膳食CLA 還可以緩解生長(zhǎng)肥育豬由于年齡變化引起的MyHC I mRNA 豐度下降的趨勢(shì)，增加氧化型纖維的比例[56]。上述研究揭示，CLA 可以通過(guò)調(diào)控肌肉發(fā)育和肌纖維類型進(jìn)而影響產(chǎn)肉性能和肉品質(zhì)的形成。

3.3 CLA 對(duì)糖脂代謝的調(diào)控機(jī)制

3.3.1 CLA 影響脂類代謝關(guān)鍵酶的活性 脂類代謝是一個(gè)極其復(fù)雜的生理過(guò)程，包括脂肪酸的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、延伸及氧化，脂肪的合成、儲(chǔ)存與分解等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。補(bǔ)充CLA 可通過(guò)調(diào)控與脂類代謝關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄來(lái)影響脂肪沉積。膳食CLA 降低了肌肉和肝臟中與脂肪合成相關(guān)酶的活性，進(jìn)而改變組織中脂肪酸組成和脂肪含量[57]。José 等[58]報(bào)道，t10-c12-CLA 降低了脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthase，F(xiàn)AS）活性，但對(duì)豬脂肪組織的脂質(zhì)分解沒(méi)有影響。而Ostrowska 等[59]研究發(fā)現(xiàn)，CLA 顯著增加血漿非酯化脂肪酸和甘油三酯的濃度，表明脂肪動(dòng)員和脂質(zhì)分解增加，推測(cè)可能是脂蛋白脂酶活性變化引起的。參與葡萄糖和脂肪酸生物合成的基因轉(zhuǎn)錄水平顯著降低，包括乙酰輔酶A 羧化酶-α和-β（Acetyl-coa Carboxylase，ACC）、激素敏感脂肪酶（Hormone-Sensitive Lipase，HSL）、脂蛋白脂酶（Lipoprotein Lipase，LPL）和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（Sterol Regulatory Element Binding Protein 1，SREBP-1），而解偶聯(lián)蛋白（Uncoupling Protein 1，UCP1）、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶（Carnitine Palmitoyl Transferase 1，CPT1）mRNA水平增加[60]。這表明補(bǔ)充CLA 會(huì)通過(guò)增強(qiáng)脂肪酸氧化來(lái)增加儲(chǔ)存的甘油三酯的消耗，減少脂肪合成。Wang等[61]用t10-c12-CLA 處理培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞，線粒體呼吸和脂肪酸氧化增加。Choi 等[62]證實(shí)，補(bǔ)充c9-t11-CLA可增加肝臟脂聯(lián)素受體1 和2 的敏感性，導(dǎo)致PPARα配體活性和脂肪酸氧化增加。這說(shuō)明CLA 在體內(nèi)一方面促進(jìn)組織脂肪酸氧化和分解，加速能量利用；另一方面減少脂肪的合成，從而使體脂沉積減少。

CLA 異構(gòu)體和其代謝物參與不同組織的磷脂和中性脂質(zhì)部分，顯著改變了脂肪酸譜系。House 等[63]報(bào)道，脂肪酸間比例和組成的變化歸因于硬脂酰輔酶A 去飽和 酶-1（Stearoyl-Coenzyme A Desaturase 1，SCD-1）活性的降低，其結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明CLA 的作用效果和路徑與作用時(shí)間有關(guān)。Jiang 等[64]報(bào)道得到了類似的結(jié)論，補(bǔ)充CLA 降低背膘和背最長(zhǎng)肌中的△9-去飽和酶活性。研究CLA 對(duì)新生仔豬大腦和肝臟組織中n-6 長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸代謝過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，膳食CLA 對(duì)脂肪酸β-氧化沒(méi)有影響，但通過(guò)抑制伸長(zhǎng)和去飽和作用可顯著降低n-6長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸生物合成[65]。上述研究表明，CLA通過(guò)抑制脂肪酸去飽和酶的活性來(lái)調(diào)控脂肪酸組成。

3.3.2 CLA 調(diào)控葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn) 骨骼肌通常占總體重的近40%，在糖脂代謝和整體能量穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。在基礎(chǔ)條件下，CLA 補(bǔ)充會(huì)促進(jìn)小鼠肌肉中葡萄糖的氧化和利用[66]，這增加了葡萄糖攝取和肌肉中葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)?？赡苁怯捎谝葝u素受體和葡糖糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白數(shù)量的增加，進(jìn)而允許更高劑量的葡萄糖跨越肌細(xì)胞膜用作能量來(lái)源。在骨骼肌細(xì)胞中，CLA 通過(guò)磷脂酰肌醇3（Phosphatidylinositide 3-Kinase，PI3）激酶和AMPK 途徑，刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4（Glucose Transport Proteins 4，GLUT4）易位至質(zhì)膜促進(jìn)葡萄糖攝取[67]。也有研究報(bào)道，t10-c12-CLA 通過(guò)Ca2+-CaMKII-AMPK-Akt途徑以刺激骨骼肌葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)[68]。高水平的葡萄糖進(jìn)入肌肉細(xì)胞中，肌內(nèi)脂肪供能減少，保留了肌內(nèi)脂肪酸儲(chǔ)備，肉品質(zhì)得到改善。

CLA 在調(diào)控代謝綜合征動(dòng)物模型中葡萄糖的利用也承擔(dān)了重要作用。t10-c12-CLA 處理可改善肥胖大鼠中骨骼肌葡萄糖耐受性和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)活性的能力，這種變化與氧化應(yīng)激和肌肉脂質(zhì)水平的降低有關(guān)[69]。CLA不僅對(duì)母體有效果，而且對(duì)具有代謝綜合征母體的后代同樣發(fā)揮作用。CLA 補(bǔ)充緩解了血漿中的高胰島素和高葡萄糖濃度，進(jìn)而改善了母體高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠后代代謝功能障礙[70]。

3.3.3 CLA 影響腸道菌群 胃腸道整合了食物、微生物群和宿主代謝之間的相互作用，將外源性的營(yíng)養(yǎng)素經(jīng)過(guò)腸道消化吸收，構(gòu)成了體內(nèi)各器官生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有益代謝反應(yīng)。已經(jīng)鑒定出腸道內(nèi)發(fā)酵可產(chǎn)生CLA 的菌群，重要的是，提升產(chǎn)CLA 有益菌屬的豐度一方面影響了盲腸和肝臟組織中CLA 的水平，另一方面可以降低動(dòng)物模型中結(jié)腸癌的發(fā)病率和減輕炎癥及脂類代謝[71-72]。而CLA 異構(gòu)體經(jīng)過(guò)腸道的消化也會(huì)影響微生物區(qū)系組成，進(jìn)而調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)代謝過(guò)程。在高脂飲食下補(bǔ)充CLA 對(duì)小鼠胃腸道的特定部位有顯著影響，增加多種胃蛋白表達(dá)和促進(jìn)腸道有益微生物群的定植[73]。補(bǔ)充t10-c12-CLA 后小鼠腸道微生物組成發(fā)生改變，并且緩解了肥胖小鼠的體重增加，推測(cè)腸道微生物的變化與體內(nèi)能量代謝水平增加有關(guān)，進(jìn)而引起體重減少[74]。研究發(fā)現(xiàn)，t10-c12-CLA 處理可顯著改變與脂質(zhì)代謝和誘導(dǎo)肝臟脂肪變性腸道微生物組成，厚壁菌門比例降低，擬桿菌比例升高，但沒(méi)發(fā)現(xiàn)c9-t11-CLA 具有同樣的效果[75]。這些結(jié)果表明，飲食t10-c12-CLA 對(duì)小鼠脂質(zhì)代謝的調(diào)控，可能部分由腸道微生物群組成和功能的改變介導(dǎo)。

4 小結(jié)與展望

綜上所述，CLA 可以通過(guò)調(diào)控脂肪細(xì)胞分化、糖脂代謝和肌肉發(fā)育（肌纖維類型）來(lái)影響肌內(nèi)脂肪沉積、肌肉發(fā)育和肌纖維類型，進(jìn)而影響脂肪酸組成、肉色、系水力、風(fēng)味、嫩度和pH 等肉的感官品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)。因此，CLA 作為一種綠色安全的飼料添加劑，在養(yǎng)豬業(yè)和優(yōu)質(zhì)安全豬肉生產(chǎn)中具有廣泛的應(yīng)用前景。然而，目前CLA 在生產(chǎn)應(yīng)用上仍然存在一些問(wèn)題：CLA 的作用效果不穩(wěn)定，尤其是CLA 在不同品種、日齡、性別畜禽中應(yīng)用的效果差異顯著；CLA 在腸道內(nèi)消化吸收后，如何調(diào)控體內(nèi)器官和組織發(fā)育的過(guò)程和途徑不明確；CLA 吸收后在不同組織內(nèi)的利用和分配也不清晰，無(wú)法實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)調(diào)控；CLA 的制備工藝和成本較高，無(wú)法大規(guī)模推廣應(yīng)用。另外，CLA 在體內(nèi)的生理功能和調(diào)控機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，是多種細(xì)胞活動(dòng)和代謝途徑相互作用的結(jié)果。因此，關(guān)于CLA 對(duì)肉品質(zhì)形成的作用調(diào)控機(jī)制仍需要深入研究，進(jìn)而為CLA 的廣泛應(yīng)用和優(yōu)質(zhì)豬肉生產(chǎn)調(diào)控提供理論和實(shí)踐依據(jù)。