王 洋，曾智杰，葛長利，邱 陽，朱先利，唐 政，張澤楠，周 榮，李 奎，陳其美*

（1.山東藍思種業(yè)有限公司，山東日照 276800；2.中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京 100193）

在實際生產活動中，種公豬的精液品質對母豬配種效率、母豬妊娠率、產仔數(shù)、仔豬斷奶成活率、斷奶體重和生產性能均有不同程度的影響，高品質的公豬精液往往決定著人工授精母豬的受精率和產仔數(shù)[1-3]。我國豬人工授精技術在生產實踐中經過多年的不斷發(fā)展改進，在精液采集、保存、檢測等方面形成了一套規(guī)范的操作程序，并被廣泛應用[4-5]，在這個過程中種公豬精液品質的檢測必不可少。

以巴克夏豬為父本，杜洛克豬為母本培育的雜交F1代，即巴杜豬，有生長速度快、肉質好、飼料利用率高等優(yōu)點，具備良好的發(fā)展前景和經濟效益。本研究選擇30 頭8～36 月齡巴杜種公豬，分析采精量、精子密度、精子活率和畸形率等指標隨月齡的變化趨勢，確定生產效果最佳的精子所對應的種豬月齡，為今后豬場人工授精工作提供參考，同時有助于提高種公豬精液利用率，進而提高豬場的繁殖效率和經濟效益。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 種豬來源于山東藍思種業(yè)股份有限公司，按月齡分組，分別為8～12、13～18、19～24、25～30、31～36 月齡巴杜種公豬各6 頭，全部為生產中正常利用的繁殖群種公豬，飼養(yǎng)管理條件相同，實驗公豬全部單欄飼養(yǎng)，自由飲水，每天人工喂料 2 次，按照豬場常規(guī)程序進行保健，并定期消毒。

1.2 實驗儀器與試劑 RCZ-200G 精子分析儀（上海精密儀器儀表有限公司）、XSP-8CA 顯微鏡（上海光學儀器六廠）、XMTX2112 數(shù)顯恒溫電熱板（常州奧華儀器有限公司）、電子秤（精度1%）、電熱恒溫培養(yǎng)箱（青島海康畜牧器械有限公司）、水浴鍋、SZ-93A自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）、溫度計（30 cm）、采精杯、全能建Z 精液稀釋粉（中牧南京動物藥業(yè)有限公司）、精液稀釋瓶、塑料燒杯（1 L）、量筒（500 mL）、蓋玻片、載玻片、輸精瓶、瓶蓋、一次性輸精管、PE 手套、濾紙、衛(wèi)生紙、橡皮筋。

1.3 精液采集及檢測

1.3.1 采精 種公豬每隔3 d 采精1 次，每天上午采精，用集精杯采精，對采集的精液用 4～6 層消毒紗布進行過濾，去除膠狀物。

1.3.2 精液品質檢查 采精結束后立即進行精液品質檢查，檢查項目主要包括精液量、顏色、氣味、精子密度、精子活率和畸形率，整個檢查過程要迅速、準確，10 min 內完成，最后詳細填寫《公豬采精登記表》。

用精確度0.1 g 天平稱稱取原精液重量，并用重量表示采精量。

精子活率運用光學顯微鏡，人工評級。用移液器取50 μL 稀釋好的精液滴于預熱的載玻片上，加蓋20 mm×20 mm 的蓋玻片，在400 倍光學顯微鏡視野下，分別對2 個視野中精子的運動狀態(tài)進行觀測，并采用10 級評分標準打分，直線前進運動的精子為100%者評為10級，90%者為9 級，以此類推，2 次計算平均值。

用上海精密儀器儀表有限公司開發(fā)的RCZ-200G型彩色精子質量分析儀進行精液及精子質量分析，檢驗精子密度和精子畸形率。

1.4 統(tǒng)計分析 采用Excel 軟件整理所有數(shù)據(jù)指標，在SPSS 19.0 統(tǒng)計軟件中用單因素方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，用平均值± 標準表示結果，Graphpad prism 6.0 作圖。P＜0.05 表示差異顯著，P>0.05 表示差異不顯著。

2 結果

2.1 月齡對巴杜公豬采精量的影響 如圖1 所示，巴杜種公豬在8～12 月齡采精量較少，平均每次采精量約為187.10 g，低于其他各月齡（P＜0.05）。13～24 月齡種公豬采精量有明顯上升趨勢，其中19～24 月齡種公豬的采精量最高，高于其他各月齡（P＜0.05），平均每次采精量約為256.73 g，處于采精量高峰期。24 月齡之后采精量開始有所下降，但仍然保持較高水平。

圖1 不同月齡巴杜公豬采精量的變化

2.2 月齡對巴杜公豬精子密度的影響 如圖2 所示，8～12 月齡種公豬平均每毫升精液中約有476.03×106個精子，低于其他各月齡（P＜0.05）。13～24 月齡巴杜種公豬精子密度有明顯上升，19～24 月齡平均每毫升精液中約有565.95×106個精子，精子密度達到最大，顯著高于其他各月齡（P＜0.05）。24 月齡后精子密度開始下降（P＜0.05），31～36 月齡種公豬平均每毫升精液中約有513.80×106個精子，下降到13～18 月齡水平。

圖2 不同月齡巴杜公豬精子密度的變化

2.3 月齡對巴杜公豬精子活率的影響 如圖3 所示，8～12 月齡種公豬平均精子活率約為86.22%，低于其他各月齡（P＜0.05）。13～24 月齡巴杜種公豬精子活率明顯上升，其中19～24 月齡平均精子活率達到92.20 %，高于其他各月齡（P＜0.05），此階段精子受精能力最強。隨著公豬年齡的增長，精子活率逐漸下降，25～30月齡種公豬精子活率與19～24 月齡相比下降2.05 %（P＜0.05），31～36 月齡種公豬精子活率與19～24 月齡相比下降2.98 %（P＜0.05）。

圖3 不同月齡巴杜公豬精子活率的變化

2.4 月齡對巴杜公豬精子畸形率的影響 如圖4 所示，8～12 月齡種公豬平均精子畸形率約為9.87 %，高于其他各月齡（P＜0.05）。13～24 月齡巴杜種公豬精子畸形率有明顯下降。19～24 月齡精子畸形率降至 7.00 %，低于其他各月齡（P＜0.05）。24 月齡后精子畸形率逐漸上升，25～30 月齡種公豬精子畸形率與19～24 月齡相比上升0.47 % (P＜0.05），31～36 月齡種公豬精子畸形率與19～24 月齡相比上升1.80 % (P＜0.05 ）。

3 討 論

圖4 不同月齡巴杜公豬精子畸形率的變化

公豬精液品質是衡量公豬繁殖力和公畜效應的代表性指標，在豬遺傳改良中起著決定性作用，公豬精液品質的好壞直接影響到后代的數(shù)量、質量以及豬場的生產效益[6]。種公豬精液品質受多種因素共同影響，其中與初配年齡及公豬使用年限有很大關系。如果青年公豬過早參與配種，不僅會影響自身的生長發(fā)育，導致產仔數(shù)減少，所產仔豬體質較弱，還會使公豬使用年限縮短。王黎等[7]研究發(fā)現(xiàn)，13～18、25～30 月齡的巴杜種公豬精液品質相對較好，種公豬的精液品質會隨著公豬月齡的增加呈現(xiàn)規(guī)律性變化，公豬性成熟之后，射精量、精子密度和精子活率會逐漸增加，畸形率會逐漸減少，壯年之后，射精量、精子密度和精子活率會逐漸減少，畸形率會逐漸增加。這與玉榮等[1]的研究結果不一致，其對杜洛克、大白和長白3 個品種豬不同月齡種公豬精液品質研究發(fā)現(xiàn)，3 個品種豬精子活率均在8～12 月齡最強。而Leman 等[8]研究表明，種公豬從發(fā)情期開始，采精量和精子數(shù)會隨著年齡的增加而增加，18 月齡左右達到最高，之后一直維持在較高水平。

本研究發(fā)現(xiàn)，19～24 月齡巴杜種公豬精液品質最佳，在采精量、精子密度、精子活率方面均顯著高于其他各月齡，且精子畸形率顯著低于其他月齡，在這一時間段內進行配種或用這一月齡段的種豬精液進行人工授精，母豬的受胎率相比其他階段而言明顯增加，返情率也大大減少。因此建議用于核心育種的巴杜公豬月齡不低于一歲半，不超過兩年，除個別生產性能特別優(yōu)秀的個體外，在實際生產活動中人工授精公豬月齡超過3年可考慮淘汰。此外，8～12 月齡精子品質各項指標均優(yōu)于最低使用標準，例如精子活率高達86.22%（高于70%），畸形率為9.87%（遠遠小于17%），因此8 月齡巴杜公豬可開始嘗試初配，最初幾次精液品質可能不太穩(wěn)定，但一段時間后將趨于正常。本實驗結果對種公豬人工授精工作有一定的參考作用，有益于豬人工授精技術的順利推廣。