吳海喬 邵 威 胡君程 楊冰洪

中國人民解放軍第一七四醫(yī)院病理科，福建省廈門市 361003

非小細胞肺癌約占肺癌的85%，多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已發(fā)生全身轉(zhuǎn)移，預后不良，病死率高，ⅢA期、Ⅳ期患者5年生存僅為5%和1%，嚴重威脅患者的生命安全[1]。經(jīng)血循環(huán)和淋巴結(jié)播散是肺癌轉(zhuǎn)移的重要途徑，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移在內(nèi)的多臟器轉(zhuǎn)移是導致患者死亡的主要原因，檢測有效指標篩選出發(fā)生轉(zhuǎn)移的高危患者對預測遠期效果和指導臨床治療具有重要意義[2]。上皮細胞黏附分子(EpCAM)基因定位于染色體2p21，是相對分子量40 000的Ⅰ型跨膜糖蛋白，其編碼的糖蛋白具有表皮細胞黏附分子功能，參與信號傳導、細胞增殖等多種生物學功能[3]。相關研究[4-5]顯示，EpCAM過表達與乳腺癌、胃癌等多種癌癥的轉(zhuǎn)移和預后密切相關，目前國內(nèi)尚未見非小細胞肺癌EpCAM表達的相關報道。本研究對2011年2月—2013年2月在我院經(jīng)病理確診并手術切除的非小細胞肺癌標本進行研究并對患者進行隨訪，探討EpCAM在非小細胞肺癌中表達及其與非小細胞肺癌轉(zhuǎn)移預后關系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年2月—2013年2月在我院經(jīng)病理確診并手術切除的非小細胞肺癌患者作為研究對象。納入標準：(1)經(jīng)病理證實符合非小細胞肺癌的診斷標準，病理診斷為肺腺癌；(2)首次診斷，既往未行放療、化療等抗癌治療；(3)均由同一組醫(yī)師行胸腔鏡下肺癌根治術；(4)TNM分期[6]Ⅰa～Ⅰb期；(5)患者對研究知情并簽署知情同意書。排除標準：(1)已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移者；(2)合并其他部位原發(fā)惡性腫瘤者；(3)患者依從性差，明確拒絕隨訪者。共納入非小細胞肺癌患者126例，其中男74例，女52例；年齡32～73歲，平均年齡(53.72±11.47)歲。

1.2 研究方法 (1)免疫組化法檢測EpCAM表達：采用福爾馬林常規(guī)固定24h，酒精脫水，石蠟包埋，采用2mm芯片針，以組織芯片儀，在腫瘤組織、癌旁組織和正常肺組織取材，按預先做好的病例數(shù)目，在模板蠟塊中進行組織列陣，然后對組織芯片蠟塊進行連續(xù)切片，厚度4μm，40℃裱片，50℃烤片后37℃恒溫箱中過夜，常溫保存?zhèn)溆?。采用免疫組化法檢測組織中EpCAM表達，檢查程序為脫蠟、再水化、抗原修復、去除內(nèi)源性過氧化物酶、封閉、一抗反應(1∶100)、二抗反應和顯色(按Dakocytomation Envision+TM System HRP試劑盒說明書進行操作)、蘇木精復染細胞核、中性樹膠封片，光學顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果，判定標準：EpCAM表達部位在細胞膜，棕黃色顆粒沉著，400×光鏡至少觀察至少5個視野，按陽性細胞百分比作為判定標準：<5%為陰性(-)，5%～25%為+，26%～50%為++，>51%為+++。(2)隨訪：對所有患者進行定期隨訪，隨訪計劃為2年內(nèi)為3個月復查1次，2年后6個月隨訪1次。未能按時返院復查者用電話隨訪。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS23.0進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)處理，計量資料采用均數(shù)±標準差表示，采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t法，計數(shù)資料采用率或百分比表示，采用χ2檢驗，等級資料采用Radit分析，生存期比較采用KM曲線Log-rank分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中EpCAM表達情況 肺癌組織EpCAM表達陽性率高于正常組織和癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中EpCAM表達情況

2.2 非小細胞肺癌患者遠期預后與EpCAM表達的相關性 EpCAM陰性患者生存率和中位生存時間均高于陽性患者，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2和圖1。

表2EpCAM表達與5年生存率和中位生存時間關系

圖1不同EpCAM表達患者生存曲線比較

2.3 EpCAM表達與患者轉(zhuǎn)移的關系 EpCAM陰性患者5年內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移率均低于EpCAM陽性患者，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3EpCAM表達與患者轉(zhuǎn)移的關系[n(%)]

3 討論

絕大多數(shù)肺癌患者死于癌細胞的轉(zhuǎn)移，尋求影響肺癌轉(zhuǎn)移的基因，控制轉(zhuǎn)移，可顯著提高肺癌患者的生存期限和生活質(zhì)量。EpCAM屬黏附分子家族，是由腫瘤相關鈣信號轉(zhuǎn)導1基因編碼的單次跨膜蛋白，參與調(diào)節(jié)細胞間黏附、介導信號轉(zhuǎn)導、細胞遷移、增殖、分化等功能[7]。生理情況下，EpCAM表達于除鱗狀上皮之外的所有正常上皮，多表達于細胞間緊密連接處，結(jié)締組織和造血系統(tǒng)來源的細胞幾乎不表達EpCAM[8]。

研究[9]顯示，EpCAM過表達可上調(diào)癌基因C-myc和周期素A、E，加快細胞周期促進細胞增殖。在腫瘤細胞中，EpCAM過表達可增強腫瘤細胞的增殖活性，提高腫瘤細胞的侵襲性，下調(diào)EpCAM表達可抑制腫瘤細胞的增殖和侵襲[10]。近年來的研究[11]顯示，EpCAM是Wnt-β-catenin信號轉(zhuǎn)導通路的靶基因，被認為是腫瘤干細胞的標志物，具有干細胞功能的特征。魯明典等研究顯示，胃癌組織EpCAM的陽性表達率為92.3%，而正常組織陽性率僅為13.9%[12]。黃宇珊[13]研究顯示，EpCAM在胃癌中高表達，且與腫瘤浸潤程度、淋巴轉(zhuǎn)移情況、遠處轉(zhuǎn)移和組織分化程度呈正相關，與患者預后呈負相關。Went等[14]對3 347份組織的研究顯示，EpCAM在食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌均達到或接近100%，在乳腺癌中表達為73%，而在淋巴瘤中無表達。體外研究[15]顯示，siRNA下調(diào)EpCAM表達可抑制胃癌、哈癌、舌鱗狀細胞癌的黏附、浸潤和遷移。Zhou等[16]研究顯示，EpCAM是轉(zhuǎn)移相關蛋白1的下游靶基因，過表達轉(zhuǎn)移相關蛋白1可增強EpCAM表達，增強肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，與預后不良相關。

本研究中，肺癌組織EpCAM表達陽性率高于正常組織和癌旁組織，EpCAM陰性患者5年內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移率均低于EpCAM陽性患者，EpCAM陰性患者生存率和中位生存時間均高于陽性患者，結(jié)果提示EpCAM在非小細胞肺癌中高表達，且與Ⅰ期非小細胞肺癌患者術后遠期轉(zhuǎn)移和生存相關，提示干擾EpCAM功能可能是非小細胞肺癌的新治療靶點。