查祎凡 聶黎行?于健東?戴 忠馬雙成

（1.中國食品藥品檢定研究院，北京100050；2.中國藥科大學(xué)，江蘇 南京211198）

牛黃清胃丸收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第一冊）》，由牛黃、大黃、菊花、麥冬、薄荷、石膏、梔子、玄參、番瀉葉、黃芩、甘草、冰片17味中藥組成，具有清胃瀉火、潤燥通便的作用，用于心胃火盛、頭暈?zāi)垦?、口舌生瘡、牙齦腫痛、乳蛾咽痛、便秘尿赤［1］。方中冰片功效清熱止痛，但執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中缺乏其質(zhì)量控制項(xiàng)目；另一方面，在合成過程中會(huì)產(chǎn)生副產(chǎn)物樟腦，氣味和外形相似，但具有毒性［2］，同時(shí)市售品存在該成分含有量超標(biāo)的問題［3-4］，故需要進(jìn)行檢查。

中成藥中冰片質(zhì)量控制的方法常采用GC 技術(shù)［5-10］，但其易揮發(fā)，含有量限度設(shè)定往往無據(jù)可依。為了科學(xué)地評(píng)價(jià)牛黃清胃丸中冰片質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)創(chuàng)新性地引入對(duì)照制劑，采用GC 法測定龍腦、異龍腦含有量，對(duì)樟腦進(jìn)行限量檢查，同時(shí)研制了相關(guān)對(duì)照制劑，考察了生產(chǎn)、貯存過程中冰片轉(zhuǎn)移和損失情況，以期為含冰片原粉制劑的質(zhì)量和安全控制提供參考。

1 材料

AE240（十萬分之一）、FX-200（萬分之一）電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；Agilent 7890N 氣相色譜儀（美國Agilent 公司）；Climacell 恒溫恒濕箱（德國MMM公司）；KQ3200DB 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

樟腦（110747-201409）、異龍腦（111512-201603）、龍腦（110881-201508）對(duì)照品，以及人工牛黃（121197-201204）、大 黃（120902-201311 ）、菊 花（121384-201504）、麥 冬（121013-201310 ）、薄 荷（120916-201310）、梔 子（120986-201610 ）、玄 參（121008-201609）、番瀉葉（120996-201205）、黃 芩（120955-201309）、甘 草（120904-201620 ）、桔 梗（121028-201612）、黃 柏（121510-201606 ）、連 翹（120908-201216）、牽牛子（121024-201606）、枳 實(shí)（120936-201606）對(duì)照藥材均由中國食品藥品檢定研究院提供；石膏購于北京華邈藥業(yè)有限公司，經(jīng)中國食品藥品檢定研究院聶黎行副研究員鑒定為正品。牛黃清胃丸對(duì)照制劑由中國食品藥品檢定研究院按大生產(chǎn)規(guī)模自行研制，其中冰片來自福建青松股份有限公司。煉蜜由北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠提供。無水乙醇、乙酸乙酯，硅藻土為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取樟腦、異龍腦、龍腦對(duì)照品適量，無水乙醇制成每1 mL 分別含三者10 μg、0.1 mg、0.1 mg，即得。

2.1.2 供試品溶液 取重量差異項(xiàng)下丸劑適量，研細(xì)，精密稱取3 g，加入無水乙醇30 mL，稱定質(zhì)量，冰浴超聲（100 W、40 kHz）45 min，冷卻至室溫，無水乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液 按照丸劑處方和制法，制備缺冰片的陰性樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.2 色譜條件［11］HP-INNOWax 色譜柱（0.32 mm×30 m，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度250 ℃；柱溫100 ℃；FID 檢測器溫度300 ℃；載氣體積流量1.8 mL／min；進(jìn)樣量1 μL；分流比10 ∶1。

3 結(jié)果

3.1 樣品溶液制備方法 本實(shí)驗(yàn)對(duì)是否加硅藻土、提取溶劑種類和用量、提取時(shí)間進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)不加硅藻土直接研磨時(shí)冰片提取效率更高；無水乙醇提取效率高于乙酸乙酯；無水乙醇加入量30 mL、超聲時(shí)間45 min 時(shí)，龍腦、異龍腦含有量不再增高。

3.2 方法學(xué)考察

3.2.1 專屬性試驗(yàn) 取對(duì)照品、供試品、陰性樣品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，結(jié)果見圖1。由圖可知，陰性樣品在對(duì)照品保留時(shí)間處無干擾，表明該方法專屬性良好。

圖1 各成分GC 色譜圖

3.2.2 檢出限、定量限 取質(zhì)量濃度已知的樟腦對(duì)照品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，測得檢出限（信噪比3 ∶ 1）為0.26 μg／mL，定量限（信噪比10 ∶ 1）為1.51 μg／mL。

3.2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取各對(duì)照品適量，無水乙醇制成每1 mL 分別含樟腦19.26 μg、異龍腦1.01 mg、龍腦1.01 mg 的貯備液，將其稀釋成不同質(zhì)量濃度，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下各進(jìn)樣1 μL 測定。以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸，結(jié)果見表1，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 各成分線性關(guān)系

3.2.4 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液（批號(hào)20170602），在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定6次，測得樟腦、異龍腦、龍腦峰面積RSD 分別為2.33%、1.79%、1.43%，表明儀器精密度良好。

3.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液（批號(hào)20170602），室溫下放置0、1、2、4、6、8 h 后在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，測得樟腦、異龍腦、龍腦峰面積RSD 分別為2.37%、1.70%、1.04%，表明溶液在8 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批丸劑（批號(hào)20170602），按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，測得樟腦、異龍腦、龍腦含有量RSD 分別為2.38%、2.37%、2.94%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取含有量已知的丸劑（批號(hào)20170602），研細(xì)，精密稱取1.5 g，按高、中、低3個(gè)水平精密加入對(duì)照品溶液，每個(gè)水平按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備3份供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 各成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

3.3 樣品含有量測定 取46批樣品，每批按“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備2份供試品溶液，在“2.2”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算含有量，結(jié)果見表3。

表3 各成分含有量測定結(jié)果（n=2）

3.4 冰片轉(zhuǎn)移率、損失率測定 取對(duì)照制劑及冰片，同法測定，以龍腦含有量為指標(biāo)，根據(jù)冰片處方量和對(duì)照制劑中煉蜜加入量，測得冰片轉(zhuǎn)移率為38%。再取新制備、包裝完好的對(duì)照制劑，置于溫度60 ℃、相對(duì)濕度60%的恒溫恒濕箱中10 d，于第0、5、10天取樣，同法測定，以龍腦含有量為指標(biāo)，測得損失率分別27%、48%。由此確定，冰片在貯存過程中的損失率暫以48%計(jì)。

4 討論

4.1 牛黃清胃丸中與冰片質(zhì)量相關(guān)的安全性評(píng)價(jià)《中國藥典》 規(guī)定，冰片中樟腦含有量限度為0.50%［12］。牛黃清胃丸用量為1次2丸，每天2次，最大日服用劑量為24 g，按樟腦每天最大服用量1.5 mg 計(jì)算，本實(shí)驗(yàn)擬定樟腦安全限度為62 μg／g，并發(fā)現(xiàn)46批樣品中有1批超過限度。另外，10批樣品中樟腦含有量占樟腦、異龍腦、龍腦總量的比例大于0.50%，可能是由于企業(yè)投料用的冰片雜質(zhì)過多，故建議提高原料質(zhì)量。

4.2 牛黃清胃丸中與冰片質(zhì)量相關(guān)的有效性評(píng)價(jià) 《中國藥典》 規(guī)定，冰片中龍腦含有量不得低于55.0%［12］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)46批樣品中龍腦占樟腦、異龍腦、龍腦總量的比例均在55.0%左右，表明投料用冰片中龍腦含有量基本符合規(guī)定。按處方量折算，牛黃清胃丸中龍腦理論含有量為0.36%，但“2.4”項(xiàng)下結(jié)果顯示對(duì)照制劑所含冰片在生產(chǎn)過程中的轉(zhuǎn)移率為38%，貯存過程中的損失率為48%，故擬定其含有量限度為0.12%。同時(shí)，有16批樣品達(dá)到該擬定限度，占34.8%，提示企業(yè)應(yīng)加強(qiáng)生產(chǎn)過程控制，改善包裝材料，以降低冰片損失；D 廠家2批樣品、N 廠家1批樣品測定值明顯偏低，僅在0.03%左右，可能是企業(yè)未按處方量投料。

4.3 對(duì)照制劑在中藥質(zhì)量控制中的應(yīng)用 對(duì)照制劑作為中藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的新形式，是指采用道地、優(yōu)質(zhì)、規(guī)范加工的原料藥材（飲片）和輔料，嚴(yán)格按照制法和生產(chǎn)工藝規(guī)程，并遵循藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范制備的實(shí)物對(duì)照，主要用于中成藥質(zhì)量控制，評(píng)價(jià)產(chǎn)品投料真實(shí)性（是否投入正確原料）和投料量可靠性（是否按處方量投料）［13］。將對(duì)照制劑用于中藥研究、生產(chǎn)、質(zhì)量控制時(shí)，可提供化學(xué)成分（群）從原料到制劑的轉(zhuǎn)移率等關(guān)鍵信息，有助于完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，提高工藝水平，保證用藥安全有效。