謝紅兵，侯曉曉，朱文杰，田帥帥，薛 寧，劉長(zhǎng)忠(河南科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

絞股藍(lán)(Gynostemma pentaphyllum)，屬葫蘆科，是草質(zhì)攀援性植物；莖纖細(xì)，有分枝，具有縱向棱和槽，莖葉無(wú)毛或疏生短柔毛。又名七葉膽、福音草，主要分布在廣西、湖南、福建、江蘇等省區(qū)。絞股藍(lán)是一種很有價(jià)值的中草藥，它含有許多種化學(xué)成分，其中多種絞股藍(lán)皂苷具備類似于人參的功效，所以也稱絞股藍(lán)為“南方人參”或“第二人參”[1]。絞股藍(lán)全草均可入藥，味道稍苦微甘、性涼下火，具有補(bǔ)虛益氣、健胃助消、潤(rùn)肺止咳、消火去毒的效果[2]，主要可用于治療心悸氣短、體虛無(wú)力、頭暈?zāi)垦?、善忘耳鳴[3]、各種病毒性肝炎、慢性腸胃炎、慢性氣管和支氣管炎等癥狀。且其沒(méi)有其他副作用，故近年來(lái)一直是國(guó)內(nèi)外有關(guān)研究的熱點(diǎn)，是一種極具市場(chǎng)前景的中草藥。我國(guó)絞股藍(lán)植物資源較為豐厚，在鄉(xiāng)村民間，絞股藍(lán)既是一種食物，也是一種藥品，悠久的藥用歷史一直至今[4]。我國(guó)市場(chǎng)上的絞股藍(lán)產(chǎn)品有絞股藍(lán)茶、絞股藍(lán)沖劑和絞股藍(lán)片劑等，這些產(chǎn)品的有效成分主要是絞股藍(lán)皂苷。近年來(lái)大量的研究結(jié)果表明，絞股藍(lán)的主要成分有皂苷、黃酮類物質(zhì)、微量元素、蛋白質(zhì)、維生素以及糖類等多種活性成分[5]。目前，絞股藍(lán)在動(dòng)物方面的應(yīng)用研究較少，且大多數(shù)的研究主要在于其皂苷和黃酮部分，而對(duì)多糖及其他成分在動(dòng)物方面的研究很少。

絞股藍(lán)多糖［Gynostemma pent aphyllum polysaccharide（GPS）］主要是由絞股藍(lán)莖葉中提取出來(lái)，是絞股藍(lán)的有效活性成分之一[6]。研究發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗衰老、抗氧化、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞谷氨酸氧化性損傷和肝組織損傷等作用[6]。杜小燕等[10]通過(guò)試驗(yàn)證明,絞股藍(lán)多糖能顯著抑制體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)。王峰[3]等的試驗(yàn)結(jié)果表明，絞股藍(lán)多糖對(duì)DPPH 自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基都具有一定的清除能力，能夠用來(lái)作為一種天然的抗氧化劑[7]。本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)研究在日糧中添加不同劑量的絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬抗氧化性能的影響，以期為有效利用絞股藍(lán)開(kāi)辟新的途徑，為提高斷奶仔豬抗氧化性能、生產(chǎn)性能以及擴(kuò)大絞股藍(lán)在畜牧業(yè)上的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用絞股藍(lán)在河南省藥材市場(chǎng)購(gòu)買，首先將準(zhǔn)備好的絞股藍(lán)粉碎過(guò)60 目篩，放進(jìn)容器內(nèi)攪拌，待其攪拌均勻后備用。過(guò)氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、過(guò)氧化氫酶（CAT）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）試劑盒以及丙二醛（MDA）試劑盒 均購(gòu)于南京建成生物有限公司。

1.2 多糖的制備

稱取絞股藍(lán)粉末500 g，按照固液比1 ∶40 的比例加入乙醇(95%)2 000 mL，然后浸泡30 min，之后在蛇型回流裝置中，回流提取兩次，每次2 h ,液面沸騰后開(kāi)始計(jì)時(shí)，待溫度下降至常溫后，紗布過(guò)濾，取沉淀物，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀分兩次揮發(fā)掉乙醇，加入10 倍量的蒸餾水，在85 ℃下提取30 min，重復(fù)3 次，過(guò)濾并棄去殘?jiān)?，濾液在3 000 r/min 下離心15 min 去雜，取上清液。按照1：1 的比例加入適當(dāng)?shù)?%三氯乙酸-正丁醇液，搖勻后置于分液漏斗中靜置至分層，之后分出下層清液，分離掉上、中兩層的雜質(zhì)。在60 ℃水中用8 %活性炭脫色30 min。100 ℃下恒溫水浴濃縮，按1 ∶3 的比例加入95%乙醇，并在4 ℃下放置一個(gè)晚上沉淀。然后移去部分上清液，離心，沉淀，并依次用95%的乙醇、無(wú)水乙醇、丙酮各清洗一次后放入干燥箱內(nèi)50 ℃下干燥5 h，得到的淡黃色粉末即為絞股藍(lán)多糖。 將其保存于干燥柜中，用硫酸-蒽酮法測(cè)得絞股藍(lán)多糖的含量為64.60%。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

選取160 頭三元雜交（杜×長(zhǎng)×大）28 日齡的斷奶仔豬，試驗(yàn)仔豬的平均斷奶體重為（6.23±0.3）kg。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

隨機(jī)將160 頭斷奶仔豬分為對(duì)照組和試驗(yàn) I、Ⅱ、Ⅲ、IV 組共5個(gè)處理組，每組設(shè)4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8 頭豬，公母豬各半?？瞻讓?duì)照組用基礎(chǔ)日糧飼喂，4 個(gè)試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中分別添加不同劑量的絞股藍(lán)多糖，分別為200 mg/kg、400 mg/kg、600 mg/kg、800 mg/kg ，持續(xù)飼喂28 d。

1.4.2 樣品采集

每個(gè)重復(fù)中選取2 頭豬，抽取其前腔靜脈血10 mL，在室溫下靜置1h，3 000 r/min 離心15 min 后取上層血清，分裝到2 mL 離心管中，放于-20 ℃環(huán)境下冷凍保存，用于抗氧化酶CAT、GSH-Px 和SOD 的活性和MDA 的含量的測(cè)定。每個(gè)重復(fù)中選取體重相近的2頭豬屠宰，并迅速結(jié)扎空腸，在腸段的相同位置選取腸道黏膜樣品，用錫箔紙包裹，放于-80 ℃條件下冷凍保存，測(cè)定之前取出0.2 g，加入9倍量的生理鹽水，在冰浴條件下研磨制成勻漿，離心15 min（2 000 r/min），留取上清液,用于各種抗氧化酶的活性和物質(zhì)含量的測(cè)定。

1.4.3 試驗(yàn)日糧

試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧見(jiàn)表1。

1.4.4 飼養(yǎng)管理

仔豬飼養(yǎng)于排氣通風(fēng)良好、水泥地面的全封閉豬舍，舍溫保持在 23 ～25 ℃ ，采用常規(guī)管理進(jìn)行免疫和驅(qū)蟲(chóng)。試驗(yàn)開(kāi)始后按照分組飼喂不同飼料。5 個(gè)處理組的圈舍環(huán)境和管理等均一致。

1.4.5 測(cè)定指標(biāo)

血清與小腸黏膜中抗氧化酶CAT、GSH-Px 和SOD 的 活 性和 MDA 的含量的測(cè)定分別用過(guò)氧化氫酶（CAT）試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）試劑盒、過(guò)氧化物歧化酶（SOD）試劑盒以及丙二醛（MDA）試劑盒，具體方法按說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)所有數(shù)據(jù)都先使用Excel 2012 處理后，使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，選用單因素方差分析和多重比較兩種分析方法。各組的試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”來(lái)表示，差異顯著性的判斷標(biāo)準(zhǔn)為P ＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

表 1 日糧配方以及營(yíng)養(yǎng)水平

絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響見(jiàn)表2。

從表2 的數(shù)據(jù)可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ組中SOD 的活性分別增加了5.09%（P ＜0.05）、18.83%（P＜0.05）、7.48%（P ＜0.05）和6.09%（P ＜0.05），各試驗(yàn)組之間，Ⅱ組與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組之間差異均顯著（P ＜0.05），其他組之間差異不顯著（P ＞0.05）。與對(duì)照組相比，CAT 的活性分別增加了11.76%（P ＞0.05）、104.83%（P ＜0.05）、82.56%（P ＜0.05）和64.08%（P ＜0.05），各試驗(yàn)組之間（除Ⅰ組外），Ⅱ組與Ⅳ組差異顯著（P ＜0.05），其他組之間差異不顯著（P ＞0.05）。與對(duì)照組相比，G S H-P x 的活性分別增加了3.79%（P ＜0.0 5）、8.2 9%（P ＜0.05）、6.45%（P ＜0.05）和4.24%（P ＜0.05），各試驗(yàn)組之間，Ⅱ組與Ⅰ、Ⅳ組差異顯著（P ＜0.05），與Ⅲ組差異不顯著（P ＞0.05）。 與對(duì)照組相比，MDA的含量分別降低了2.06%（P ＞0.05）、25.71%（P ＜0.05）、18.77%（P ＜0.05）和9.25%（P ＜0.05），Ⅱ組與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組之間差異均顯著（P ＜0.05）。

2.2 絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響見(jiàn)表3。

從表3 的數(shù)據(jù)可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ組中SOD 的活性分別增加了8.12%（P ＜0.05）、18.23%（P ＜0.05）、9.08%（P ＜0.05）、7.09%（P ＜0.05），Ⅱ組與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組之間差異均顯著（P ＜0.05），其他組之間差異不顯著（P ＞0.05）。與對(duì)照組相比，CAT 的活性分別增加了5.63%（P ＜0.05）、17.58%（P ＜0.05）、11.26%（P ＜0.05）、2.90%，Ⅱ組與Ⅰ組之間差異顯著（P ＜0.05），Ⅱ組與Ⅲ組，Ⅳ組之間差異不顯著（P ＞0.05）。與對(duì)照組相比，GSHP x 的活性分別增加了3.1 4%（P ＞0.05）、9.40%（P ＜0.05）、5.40%（P ＞0.05）、4.27%（P ＞0.05），Ⅱ組與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ組之間差異均不顯著（P ＞0.05），其他組之間差異不顯著（P ＞0.05）。與對(duì)照組相比， MDA 的含量分別降低了9.09%（P ＞0.05）、34.09%（P ＜0.05）、18.18%（P ＞0.05）、11.36%（P ＞0.05），各試驗(yàn)組之間差異均不顯著（P ＞0.05）。

3 討論

3.1 絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

動(dòng)物細(xì)胞在正常的新陳代謝過(guò)程當(dāng)中，或受到外界不良環(huán)境條件刺激時(shí)，都會(huì)使體內(nèi)氧化還原狀態(tài)失去平衡，使機(jī)體處在氧化應(yīng)激狀態(tài), 都會(huì)不斷地產(chǎn)生活性氧自由基，主要有羥自由基、超氧陰離子、烷氧自由基、單線態(tài)氧和氮氧自由基等[11-13]。大量的試驗(yàn)結(jié)果表明，多糖可以提高動(dòng)物機(jī)體各種抗氧化酶的含量，降低脂質(zhì)過(guò)氧化的終末產(chǎn)物丙二醇的含量，清除體內(nèi)的自由基，提高動(dòng)物的抗氧化性能。薛凌峰等[25]研究表明，香菇多糖能夠提高斷奶仔豬的抗氧化性能，在仔豬的日糧中添加一定量的香菇多糖后，血漿中GSH-Px 和SOD 的活性能夠顯著提高，而MDA 的含量降低。楊侃侃等[26]研究表明，仔豬日糧中添加適當(dāng)水平的刺五加多糖時(shí)，血液中SOD 和GSH-Px的活性顯著提高，MDA 的含量也顯著降低。王海元等[23]通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明日糧中添加一定量的絞股藍(lán)多糖能明顯提高小鼠體內(nèi)組織的抗氧化性能，可以有效地除去運(yùn)動(dòng)中產(chǎn)生的自由基，以防止脂質(zhì)的過(guò)氧化反應(yīng)，從而能夠保證運(yùn)動(dòng)過(guò)程中正常的氧化供能。申紅春[24]通過(guò)試驗(yàn)證明日糧中添加低劑量的絞股藍(lán)能夠顯著提高仔豬的抗氧化性能，降低了血清中脂質(zhì)過(guò)氧化物的生成。本試驗(yàn)結(jié)果表明:日糧中添加低劑量（400 mg/kg ）的絞股藍(lán)多糖能顯著提高斷奶仔豬的抗氧化能力，血清中SOD、CAT 和GSH-Px的活性顯著升高，顯著降低MDA的含量，這與以上的研究結(jié)果大致相同。

表2 絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

表3 絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

3.2 絞股藍(lán)多糖對(duì)斷奶仔豬小腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

當(dāng)由于各種原因?qū)е聞?dòng)物機(jī)體自由基產(chǎn)生過(guò)多或者是機(jī)體清除自由基的能力下降時(shí)，動(dòng)物機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)各種氧化應(yīng)激反應(yīng)。機(jī)體的每個(gè)部位都可能會(huì)產(chǎn)生氧化應(yīng)激，但由于小腸是機(jī)體消化吸收食物的主要場(chǎng)所，消化酶能把食物消化成小分子物質(zhì)，與此同時(shí)也產(chǎn)生了醛和脂質(zhì)過(guò)氧化物等很多致氧化因子，因此，腸道也是最易遭受自由基攻擊的部位之一。斷奶應(yīng)激可能會(huì)使得仔豬機(jī)體中產(chǎn)生過(guò)量氧自由基，引起腸黏膜細(xì)胞損傷。邊連全等[27]通過(guò)試驗(yàn)表明，在仔豬日糧中外源添加谷氨酰胺能顯著提高仔豬小腸黏膜中CAT 和GSH-Px 的活性，減少M(fèi)DA 的含量。冷煒博等[28]通過(guò)試驗(yàn)表明，在仔豬日糧中添加天冬氨酸能提高仔豬腸黏膜的抗氧化酶的活性，有效降低仔豬機(jī)體的氧化應(yīng)激，從而提高仔豬的抗氧化性能。但多糖對(duì)仔豬腸道黏膜抗氧化性能的影響的報(bào)道并不多見(jiàn)，有待進(jìn)一步深入研究。本試驗(yàn)結(jié)果表明：仔豬日糧中添加一定量（400 mg/kg）的絞股藍(lán)多糖能夠顯著提高小腸黏膜中CAT、SOD 和GSH-Px的活性，減少M(fèi)DA的含量。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)范圍內(nèi)，飼料中添加一定量的絞股藍(lán)多糖可提高斷奶仔豬的抗氧化性能，且以400 mg/kg的量添加時(shí)效果最佳。