楊先富 吳通奎 袁曉娟 廖 飛 包濤濤 楊勝紅 趙孝木 彭彩麗

（貴州省黔東南州動物疫病預防控制中心，貴州凱里 556000）

豬瘟是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV）引起豬的一種高度接觸性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報告的傳染病[1]；在《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中，作為我國優(yōu)先防治和重點防范的16種動物疫病之一[2]。在我國，對豬瘟的防控采取以疫苗免疫接種為主的綜合防治措施[3]；常用的豬瘟疫苗有豬瘟兔化弱毒脾淋苗、豬瘟兔化弱毒組織苗、豬瘟細胞苗（豬瘟活疫苗）、豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)活疫苗4種[4]。目前，在規(guī)模場雖然每年都免疫豬瘟疫苗，豬瘟的發(fā)生與流行也逐漸減少，但“非典型豬瘟”、隱性帶毒情況以及疫苗免疫失敗的現(xiàn)象仍然時有發(fā)生。由于我國幅員遼闊，各地環(huán)境狀況差異較大，同一種疫苗在不同的養(yǎng)殖環(huán)境免疫效果不盡相同，加上豬的品種不同，對同一種疫苗免疫反應程度有所差異，因此，已建立的豬瘟疫苗免疫程序可能存在局限性。做好豬瘟的防治工作，各地應根據實際情況探索適合當?shù)刎i品種的疫苗免疫程序。

劍白香豬是世界上著名的微型豬品種，被農業(yè)農村部列為國家二級保護畜種，是劍河縣少數(shù)民族同胞培育成的具有悠久歷史的原始豬種；是經歷了1 000多年的自然進化和人類培育，適應當?shù)刈匀画h(huán)境、生活條件和少數(shù)民族生產習俗的帶有野性的特殊豬種，主要產于貴州省黔東南州劍河縣的叢林山寨中，主食為野生植物，以其豬肉特有香味、嫩度、純天然、無污染而引起科學家們的高度關注。劍白香豬豬瘟疫苗免疫程序研究未見報道，為了規(guī)范劍白香豬豬瘟疫苗免疫程序，降低豬瘟發(fā)生的風險，保障劍白香豬產業(yè)的健康發(fā)展，2018年至2019年，筆者對劍白香豬商品豬開展豬瘟活疫苗的免疫試驗，觀察其免疫抗體變化規(guī)律和免疫效果，為劍白香豬商品豬豬瘟疫苗的免疫工作提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 疫苗

豬瘟活疫苗，廣東永順生物制藥股份有限公司生產，批號：2018039。

1.2 試驗動物

在劍河縣劍白香豬原種場選擇來自同批次4頭母豬的同胎次、同日出生、相同飼養(yǎng)管理條件的健康仔豬30頭，35日齡監(jiān)測豬瘟母源抗體，全部為陰性，符合試驗條件。

1.3 檢測試劑

豬瘟ELISA試劑盒，中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所生產。

1.4 免疫方法

仔豬于35日齡首次免疫豬瘟活疫苗，分別在56日齡、65日齡采集血清監(jiān)測豬瘟疫苗免疫抗體。65日齡加強免疫1次，分別在85日齡、115日齡、145日齡、175日齡、185日齡采集血清監(jiān)測豬瘟抗體。185日齡開展第3次免疫，分別在205日齡、260日齡、320日齡、365日齡采集血清監(jiān)測豬瘟抗體；每次免疫豬瘟活疫苗，都按每頭豬1頭份（1 mL）進行肌肉注射。

1.5 免疫抗體監(jiān)測方法

取出CSFV抗原酶標板，在記錄表上記錄樣本的位置。選2個孔加入100μL未稀釋的陰性對照血清，在臨近陰性對照孔附近選2個孔加入100μL未稀釋的陽性對照血清，然后在其他對應的孔中加入30倍稀釋的待檢樣品。加樣完成后，將CSFV抗原酶標板置于37℃條件下孵育30 min后，棄掉酶標板各孔中的反應液體，用約300μL的1×洗滌液洗滌5次板孔，將孔中殘留的洗滌液用吸水紙拍干。在干燥后的抗原酶標板中加入50μL兔抗豬IgG-HRP工作液，然后封板。封好的反應板在37℃下孵育30 min，然后再洗滌板孔并吸干孔中的水分。在干燥后的板孔中加入50μL底物溶液，37℃下孵育12±1 min，孵育完成后，在每個孔中加入50μL終止液，并將酶標板放入酶標儀中讀取酶標儀上波長450 nm下的OD值。

1.6 計算結果

對照值計算：

注：NC1A（450）為陰性對照1孔，NC2A（450）為陰性對照2孔；PC1A（450）為陽性對照 1孔，PC2A（450）為陽性對照2孔。

實驗有效判定：

樣品：

結果判定：S/P≥0.4為陽性，S/P＜0.4為陰性。

2 結果與分析

2.1 結果

豬瘟活疫苗免疫抗體通過ELISA方法監(jiān)測，結果如表1所示。

表1 豬瘟活疫苗免疫抗體監(jiān)測結果

仔豬在35日齡首次免疫后，在56日齡、65日齡采樣檢測，S/P值分別為0.320、0.391，豬瘟活疫苗免疫抗體陽性數(shù)分別為12頭、19頭，豬瘟活疫苗免疫抗體陰性數(shù)分別為18頭、11頭，陽性率分別為40%、63.3%；在75日齡、85日齡、115日齡、145日齡、175日齡、185日齡檢測，S/P值分別為0.423、0.625、0.614、0.512、0.420、0.375，豬瘟活疫苗免疫抗體陽性數(shù)分別為21頭、25頭、24頭、23頭、21頭、15頭，豬瘟活疫苗免疫抗體陰性數(shù)分別為9頭、5頭、6頭、7頭、9頭、15頭，陽性率分別為70%、83.33%、80%、76.66%、70%、50%；在205日齡、260日齡、320日齡、365日齡檢測，S/P值分別為0.693、0.658、0.603、0.415，豬瘟活疫苗免疫抗體陽性數(shù)分別為27頭、26頭、24頭、21頭，豬瘟活疫苗免疫抗體陰性數(shù)分別為3頭、4頭、6頭、9頭，陽性率分別為90%、86.66%、80%、70%。

2.2 分析

2.2.1 S/P值分析

劍白香豬仔豬在35日齡首次免疫豬瘟活疫苗后，抗體水平呈緩慢上升趨勢，到65日齡值仍低于0.4，抗體水平低，不足以保護豬群，此時如果有豬瘟強毒侵襲，豬群易被感染而發(fā)病，因此，必須加強免疫1次，免疫后抗體水平快速上升，到85日齡時達到峰值，隨后抗體水平緩慢下降，到185日齡時，S/P值低于0.4，免疫保護率變低，免疫保護期可維持4個月；由于劍白香豬生長慢，飼養(yǎng)周期較長，通常是1年才能出欄，為了使抗體維持在較高水平，確保豬群安全，必須在185日齡進行第3次免疫，在205日齡時，抗體水平達到高峰，直到365日齡，S/P值仍然維持在合格水平以上，免疫保護期可維持半年以上，通過3次豬瘟活疫苗的免疫，豬瘟免疫保護期可維持到劍白香豬商品豬出欄。

2.2.2 免疫保護率分析

經過2次免疫的豬群在85日齡時，豬瘟免疫抗體保護率為83.33%，比第1次免疫保護率63.33%提高了20%，這與衛(wèi)選智等人[5]報道的豬瘟抗體水平變化趨勢相似。第3次免疫后，抗體水平進一步提高，在205日齡時，免疫保護率達90%，比第2次免疫保護率83.33%提高了6.67%，到365日齡時，免疫保護率仍維持在70%。

3 小結

綜上所述，第2次免疫效果優(yōu)于第1次，第3次免疫效果優(yōu)于第2次，是由于動物機體存在免疫記憶，當疫苗再次刺激機體免疫系統(tǒng)后，迅速產生大量抗體，抗體在體內能維持較長時間[6]。按照在35日齡首免、65日齡加強免疫1次、185日齡進行第3次免疫的程序進行免疫，可使劍白香豬商品豬獲得較高的豬瘟抗體水平，保護生豬免受豬瘟病毒感染。