趙芳宗 王 培 李丹丹 朱小娟

胃癌是常見消化系統(tǒng)惡性腫瘤，早期無明顯癥狀，胃鏡常規(guī)篩查普及率低，多數(shù)患者確診已到晚期，失去最佳治療時機。MiRNA作為生物學研究熱點已有時日，人類miRNA具有充當腫瘤基因或抑制瘤基因作用，對其它靶基因表達和信號通路有調(diào)控作用，在腫瘤發(fā)生、進展及轉(zhuǎn)歸中有重要作用[1-2]。miR-155目前被發(fā)現(xiàn)與乳腺癌、直腸癌等多種惡性腫瘤發(fā)生有關，在多種血液系統(tǒng)腫瘤和實體瘤中有高表達[3]。目前關于miR-155與胃癌關系的研究甚少，本研究分析胃癌癌組織miR-155表達與預后和鉑類化療后效果的關系，為今后胃癌病情觀察和療效評估提供參考，報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

納入標準[4-5]：穿刺細胞學或胃鏡組織病理學診斷的胃癌；未曾接受過放化療；影像學檢查發(fā)現(xiàn)可測量腫瘤靶病灶；ECOG≤2分；預計生存時間≥1個月；肌酐<1.5倍ULN，膽紅素<1.5倍ULN，堿性磷酸酶≤2.5倍ULN，谷丙及谷草轉(zhuǎn)氨酶≤2.5倍ULN，血小板計數(shù)≥100×109/L，血紅蛋白≥80 g/L，中性粒細胞計數(shù)≥2.0×109/L，白細胞計數(shù)≥4.0×109/L。排除標準[6-7]：其它惡性腫瘤；為控制的高血壓、糖尿病、感染；哺乳期及妊娠期女性。從病理科獲取研究對象經(jīng)福爾馬林固定石蠟包埋組織標本和距癌組織至少2 cm的癌旁非癌組織標本。根據(jù)上述標準于2013年1月至2018年1月納入胃癌患者87例，患者年齡、性別分布及分化情況等見表1。

1.2 方法

使用過美國LC Science公司提供的RNA提取式試劑盒，按說明書操作，用瓊脂糖凝膠電泳法檢測RNA完整性，miR-155莖環(huán)反轉(zhuǎn)錄反應引物為5'-CGC TGC TAC CTG AGA GTA GAC CAG ATG CAG CGA CCC CT-3'。傷害博仕生物技術公司提供的反轉(zhuǎn)錄試劑盒配置10 μl反轉(zhuǎn)錄體系，37 ℃下反應15 min，85 ℃下反應5 s，之后放在-20 ℃中保存。用Real-time PCR檢測miR-155，涉及引物，用SYBR Green實時熒光定量PCR試劑盒配置25 μl PCR反應體系，94 ℃下反應3 min，預變性后在94 ℃下反應30 s，45 ℃下反應30 s，72 ℃下反應30 s，35個循環(huán)，所有反應均有2個復孔，記錄每管中熒光信號達到的閾值時經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)，取2次平均值，經(jīng)內(nèi)參基因歸一化，計算癌組織和配對癌旁組織miR-155水平。

1.3 觀察指標

①對比癌組織與癌旁組織中miR-155水平；②觀察癌組織中miR-155水平與臨床病理特征的關系；③將肺癌組織中miR-155表達高于本研究中平均水平的患者歸為高表達組，低于平均水平的歸為低水平組，對比兩組進展生存時間；④癌組織miR-155水平不同療效組中的表達。其中療效參考RECIST1.1版本相關標準[8]：目標病灶：目標病灶完全消失，病理淋巴結(jié)短徑減少至10 mm以下，且所有非目標病灶消失，腫瘤標記物水平正常，無新發(fā)灶，為完全緩解；所有目標灶消失，病理淋巴短徑均將至10 mm以下，有1個或多個非目標灶持續(xù)存在或(和)腫瘤標記物水平持續(xù)高于正常值為部分緩解，或目標病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，無新發(fā)病灶或(和)非目標病灶進展也可判斷為部分緩解；目標病灶最大徑之和較基線縮小至少30%，同時無新病灶出現(xiàn)或(和)非目標病灶進展，為穩(wěn)定；此外均視為進展。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 癌組織與癌旁肺癌組織中miR-155水平對比

癌組織miR-155平均值為(0.449±0.031)，癌旁非癌組織為(1.124±0.110)，t=55.090(P=0.0000)。

2.2 癌組織中miR-155水平與臨床病理特征的關系

侵犯層次為T3/T4者miR-155表達較T1/T2低；TNM分期為Ⅲ/Ⅳ者較Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者miR-155水平較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低。以上比較差異無統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌癌組織中miR-155水平與其臨床病理特征的關系

2.3 隨訪6個月癌組織miR-155高表達組與低表達組預后對比

低表達組共49例，隨訪6個月總生存率為79.59%(39/49),高表達組隨訪6個月總生存率為93.88%(46/49)，χ2=8.099(P=0.0044)。低表達組6個月無進展生存率為71.43%(35/49)，高表達組為85.71%(42/49)，χ2=6.632(P=0.0100)。miR-155與PTEN表達呈正相關(γ=0.813，P<0.01)。

2.4 癌組織miR-155水平不同療效組中的表達

miR-155水平在癌組織中表達水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩(wěn)定組、病變進展組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。相關性分析(Spearman)發(fā)現(xiàn)療效與癌組織miR-155表達呈負相關(γ=-0.561，P<0.01)。

表2 胃癌癌組織中miR-155在不同療效患者中的表達

3 討論

MinRNA是非編碼小分子RNA，轉(zhuǎn)錄后水平對目標基因表達實現(xiàn)負調(diào)控，引起靶mRNA分子降解，或出現(xiàn)翻譯抑制。本研究中miR-155廣泛分布在人類細胞及組織中，是發(fā)現(xiàn)較早的miRNAs之一，在多種惡性腫瘤中有異常表達，例如上皮型卵巢癌、膀胱癌、結(jié)直腸癌、黑色素瘤等[9]。目前許多研究發(fā)現(xiàn)其在組織中表達具有特異性，關于其在癌組中的表達意義研究逐漸增多。本研究中對比胃癌患者癌旁非癌組織和癌組中miR-155表達水平，癌組織miR-155平均值為(0.449±0.031)，癌旁非癌組織表達為(1.124±0.110)(P<0.05)。這與梁雪藝等[10]研究者報道的胃癌晚期患者癌組織中miR-155、miR-192水平較癌旁組織表達低，miR-30a較癌旁組織高的結(jié)果基本一致。

目前關于miR-155與癌癥的大部分研究發(fā)現(xiàn)miR-155高表達患者預后相對較好；但也有個別研究發(fā)現(xiàn)miR-155在惡性腫瘤發(fā)生進展中具有促癌基因作用，其表達與預后為負相關[11-12]。miR-155表達在不同腫瘤患者中表示不同的預后，這可能與腫瘤組織特異性有關，或是miR-155樣本提取不同所致，例如一些研究者是觀察血漿miR-155水平或是細胞miR-155水平，一些研究者是觀察血清miR-155水平，而本研究觀察組織miR-155水平[13-14]。在本研究中癌組織miR-155水平高表達預示較好的預后。侵犯層次為T3/T4者miR-155表達較T1/T2低；TNM分期為Ⅲ/Ⅳ者較Ⅰ/Ⅱ者miR-155低；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移這miR-155水平較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者低。而早期胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者病情更嚴重，其預后受諸多因素制約，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高分期、侵犯層次深是胃癌預后不良因子。本研究通過對比高表達組和低表達組無進展生存時間，發(fā)現(xiàn)低表達組6個月總生存率為79.59%，無進展生存率為71.43%，均較高表達組(93.88%、85.71%)低(P<0.01)。以上研究結(jié)果均提示胃癌患者癌組織中miR-155水平高低與預后密切相關。

鉑類藥物是晚期胃癌一線用藥，但是腫瘤細胞有鉑類耐藥現(xiàn)象，導致臨床治療面臨巨大困難。miRNA異常表達與腫瘤對鉑類化療藥物的敏感程度相關；一些研究者指出晚期胃癌患者miR-21及miR-181b表達與含奧沙利鉑化療后預后有關，其中低表達組預后較高表達組好[15]。現(xiàn)有研究均認為其表達與化療效果有一定關系。本研究通過對比發(fā)現(xiàn)miR-155水平在癌組織中表達水平由高至低依次為完全緩解組、部分緩解組、病變穩(wěn)定組、病變進展組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。進一步相關性分析證明癌組織miR-155表達與鉑類化療效果呈正相關關系(P<0.01)，提示miR-155有抑制胃癌基因作用。體外實驗發(fā)現(xiàn)miR-155能抑制鋅指 E-盒結(jié)合同源異型盒 1基因表達，從而抑制胃癌腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，胃癌組織miR-155表達水平與胃癌患者預后及鉑類化療方案療效相關，是觀察胃癌進展和預后的重要指標。