唐 歡，奚維東，夏 敏，文 靜，王紹榮

(1.四川省彭州市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 彭州 611930；2.成都市第三人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 成都 610036)

胃癌為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病早期癥狀不明顯，多與胃炎、胃潰瘍等慢性疾病類似，易被臨床診斷忽略，早期檢出率較低[1]?，F(xiàn)階段，多數(shù)胃癌確診患者處于中晚期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高，即使是早期患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率也在10%～15%，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不僅決定患者手術(shù)范圍，同時(shí)對(duì)預(yù)后也有一定影響[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能與淋巴管生成密切相關(guān)，而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)作為促血管生成因子，家族包含多種異構(gòu)體，而VEGF-C作為該家族重要成員之一，主要通過(guò)與酪氨酸激酶受體調(diào)節(jié)血管生成；Podoplanin作為Ⅰ型跨膜蛋白在人體多種組織細(xì)胞中均有表達(dá)，但主要表達(dá)在淋巴管內(nèi)皮，故對(duì)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性較強(qiáng)[3，4]。本文對(duì)胃癌癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達(dá)水平及臨床意義進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2015年5月至2018年5月四川省彭州市人民醫(yī)院及成都市第三人民醫(yī)院收治的127例胃癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《NCCN胃癌臨床實(shí)踐指南》[5]中診斷及分期標(biāo)準(zhǔn)，且在我院實(shí)施胃癌手術(shù)治療；②術(shù)前均實(shí)施放療、化療等治療方案；③標(biāo)本根據(jù)染色結(jié)果，均選擇具有典型癌組織代表性蠟塊進(jìn)行免疫組化研究；④臨床病理及病例資料均完整；⑤經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)該項(xiàng)研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并嚴(yán)重基礎(chǔ)性疾病、感染等；③妊娠期或哺乳期婦女；④無(wú)對(duì)應(yīng)手術(shù)指征、存在手術(shù)禁忌證。取患者手術(shù)切除胃癌組織(127例)及距腫瘤5～10 mm處癌旁組織(50例)石蠟標(biāo)本進(jìn)行研究。

1.2 方法采用免疫組化法檢測(cè)全部標(biāo)本中Podoplanin、VEGF-C水平，操作如下：組織切片常規(guī)脫蠟至水，其中Podoplanin于乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修復(fù)液(pH 9.5)、VEGF-C于枸櫞酸組織抗原修復(fù)液(pH 6.5)中使用高陽(yáng)加熱進(jìn)行抗原修復(fù)(3 min)。修復(fù)結(jié)束后采用免疫組化三步法進(jìn)行染色(所有染色操作嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行)→免疫組化顯色→蘇木精復(fù)染→中性樹(shù)脂封片→光鏡下觀察。本研究均用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照則為已知陽(yáng)性胃癌組織切片。所有試劑盒均購(gòu)于北京中杉金橋生物制品有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)觀察Podoplanin、VEGF-C在胃癌及癌旁組織中表達(dá)情況及與病理參數(shù)(年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期、分化程度、漿膜浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)關(guān)系。Podoplanin采用微淋巴管密度(LVD)表示，LVD計(jì)數(shù)方式參照Weidner法[6]：1個(gè)淋巴管為棕黃色染色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞簇，先在低倍鏡(40倍鏡)下觀察，再選擇高密度區(qū)在高倍鏡(200倍鏡)隨機(jī)選擇5個(gè)視野內(nèi)淋巴管進(jìn)行計(jì)數(shù)，記錄平均值。VEGF-C表達(dá)陽(yáng)性率并由3名高年資主治醫(yī)師雙盲閱片，并協(xié)商一致后進(jìn)行記錄。具體方法[5]：采集切片圖像，并在顯微鏡下觀察陽(yáng)性區(qū)域(10倍鏡)及陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)(40倍鏡)。陽(yáng)性區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)[6]：無(wú)染色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽(yáng)性計(jì)數(shù)比例標(biāo)準(zhǔn)：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，50%以上為3分；總評(píng)分：0～1分為陰性(-)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中陽(yáng)性(++)，6分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌及癌旁組織中Podoplanin、VEGF-C表達(dá)水平比較胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達(dá)水平均高于癌旁正常組織(P< 0.05)，見(jiàn)表1。

表1 胃癌及癌旁組織中Podoplanin、VEGF-C表達(dá)水平比較

2.2 胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)關(guān)系不同年齡、性別、腫瘤大小的胃癌患者癌組織中Podoplanin表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，臨床分期高、分化程度低、存在漿膜浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者Podoplanin表達(dá)水平較高(P< 0.05)。不同年齡、性別、腫瘤大小、分化程度的胃癌患者癌組織中VEGF-C表達(dá)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，臨床分期高、存在漿膜浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者VEGF-C表達(dá)陽(yáng)性率較高(P< 0.05)。見(jiàn)表2。

表2 胃癌組織中Podoplanin、VEGF-C表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)關(guān)系

3 討論

胃癌是一類起源于胃黏膜上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，高發(fā)于50歲以上男性，且與患者飲食結(jié)構(gòu)、工作壓力及幽門螺桿菌感染相關(guān)，隨著近年社會(huì)生活方式不斷轉(zhuǎn)變，使得胃癌呈年輕化趨勢(shì)[7]。目前，胃癌治療主要以手術(shù)治療為主，但術(shù)后仍存在較高復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌手術(shù)治療失敗的主要原因之一，且影響胃癌患者預(yù)后。

Podoplanin蛋白作為淋巴管內(nèi)皮標(biāo)志物的跨膜唾液酸蛋白，主要表達(dá)部位為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，而在血管內(nèi)皮上不表達(dá)，且在多種惡性腫瘤及瘤旁組織中均有表達(dá)，現(xiàn)已成為新型免疫組織化學(xué)標(biāo)志物，與惡性腫瘤侵襲、遷移及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8]。腫瘤細(xì)胞自身可分泌促進(jìn)淋巴管生成的Podoplanin蛋白，對(duì)腫瘤性淋巴管生成具有一定促進(jìn)作用，同時(shí)癌細(xì)胞可通過(guò)增多的淋巴管向外散播和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞沿淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本文研究結(jié)果顯示，胃癌癌組織中Podoplanin表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，其高表達(dá)可能與腫瘤臨床分期、分化程度、漿膜浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這與郭海等[9]研究類似，提示癌組織中淋巴管密度明顯高于正常組織，臨床可通過(guò)抑制或阻斷Podoplanin蛋白表達(dá)，降低新生淋巴管形成，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)等。

VEGF是一種強(qiáng)大的內(nèi)皮調(diào)控因子，主要誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)可促進(jìn)腫瘤內(nèi)外管脈生成，其在胃癌組織血管內(nèi)皮細(xì)胞及淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞分裂和增殖過(guò)程中起著較為關(guān)鍵的作用。VEGF-C作為其中之一，是促進(jìn)腫瘤淋巴管生成的重要因子之一，其可誘導(dǎo)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，并形成淋巴竇，同時(shí)與腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)。VEGF-C誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移及侵襲機(jī)制包括：誘導(dǎo)淋巴管生成促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移；激活淋上皮細(xì)胞釋放腫瘤趨化因子，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)生長(zhǎng)及淋巴轉(zhuǎn)移；通過(guò)調(diào)節(jié)淋巴管收縮增加淋巴滲透范圍[10]。腫瘤組織中癌細(xì)胞可通過(guò)自分泌或旁分泌產(chǎn)生VEGF-C，使其作用與腫瘤周圍組織，進(jìn)而刺激并誘導(dǎo)新生淋巴管的形成及擴(kuò)張，對(duì)惡性腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移有一定促進(jìn)作用[11]。本研究結(jié)果顯示，胃癌癌組織中VEGF-C陽(yáng)性率明顯高于癌旁正常組織，且VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤臨床分期、漿膜浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這與修麗娟等[12]研究結(jié)果類似。

綜上所述，胃癌癌組織中Podoplanin、VEGF-C均呈高表達(dá)狀態(tài)，兩者高表達(dá)均增加胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，其中Podoplanin高表達(dá)可能與腫瘤臨床分期、分化程度、漿膜浸潤(rùn)情況有關(guān)，而VEGF-C高表達(dá)可能與腫瘤臨床分期、漿膜浸潤(rùn)有關(guān)。