馬永能，何 芳，張 潔，蔣 偉，彭 碧，邱曉勤，曾覃平

（綿陽市第三人民醫(yī)院·四川省精神衛(wèi)生中心，四川 綿陽 621000）

抑郁癥以情緒持續(xù)低落、思維遲緩、情感反應(yīng)低下、疲勞衰弱、言語動作減少等為主要特征，是一種常見的重性精神疾病［1］。抑郁癥患者多伴思維和行為異常、焦慮等癥狀，病情嚴重者甚至有自殺傾向［2］，嚴重影響患者的生活質(zhì)量和生命安全。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）統(tǒng)計，抑郁癥在全球的發(fā)病率約為11%［3］。隨著生活節(jié)奏的加快和社會壓力的增大，抑郁癥的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。據(jù)估計，到2020年，抑郁癥可能成為僅次于冠心病的世界第二大疾?。?］。抑郁癥的發(fā)病機制尚不明確，研究者普遍認為生物、心理和社會因素均對抑郁癥的發(fā)生發(fā)展有一定影響。其中生物學(xué)因素主要包括遺傳、神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)［5］。免疫系統(tǒng)在生物學(xué)因素中起主導(dǎo)作用，機體免疫狀態(tài)失衡可導(dǎo)致疾病的發(fā)生發(fā)展，同時還影響疾病的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸［6］。淋巴細胞是免疫系統(tǒng)的基本單位，由多個免疫表型和功能不同的亞群組成［7］。正常情況下，機體淋巴細胞各亞群的絕對值和比例都維持在一定范圍，淋巴細胞亞群的異?？蓪?dǎo)致機體神經(jīng)和內(nèi)分泌異常，影響身體機能和精神狀態(tài)［8］。有研究顯示，心理壓力可抑制免疫功能，增加機體對炎癥和精神疾病的易感性［9-10］。目前國內(nèi)外對抑郁癥的研究主要集中在遺傳、環(huán)境、心理社會、生物化學(xué)、神經(jīng)遞質(zhì)等方面，關(guān)于免疫系統(tǒng)尤其是細胞免疫、體液免疫、細胞因子等方面的研究較少。本研究對110例抑郁癥患者的淋巴細胞亞群進行檢測，探索抑郁癥患者的淋巴細胞亞群免疫表型與正常人群的差異并比較不同程度抑郁癥患者的淋巴細胞亞群免疫表型，為抑郁癥的發(fā)生機制及診療提供更多免疫學(xué)思路和實驗室依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 對象

以2017年12月-2018年2月某三甲醫(yī)院的抑郁癥住院患者為患者組。納入標準：①符合《國際疾病分類（第10版）》（International Classification of Diseases，tenth edition，ICD-10）抑郁癥診斷標準；②抑郁自評量表（Self-rating Depression Scale，SDS）評分≥53分；③由兩位經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)的醫(yī)師共同診斷；④近半年內(nèi)未服用免疫調(diào)節(jié)劑、激素藥、抗精神病藥及免疫抑制劑等影響免疫功能的藥物。排除標準：①患自身免疫性疾病者；②合并糖尿病、腫瘤或其他嚴重疾病者；③近兩周內(nèi)有感染、免疫功能紊亂、創(chuàng)傷、發(fā)熱或過敏史者。符合納入標準且不符合排除標準共110例。同期在綿陽市第三人民醫(yī)院隨機選取與患者組性別、年齡匹配的60名健康體檢者為對照組。所有受試者均簽署知情同意書，本研究經(jīng)綿陽市第三人民醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2 檢測方法

由綿陽市第三人民醫(yī)院檢驗科工作人員于研究對象入組或體檢當日7∶00-9∶00抽取受試者空腹靜脈血2.0 mL行TBNK淋巴細胞亞群檢測。檢測指標包括CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞、CD3-CD19+B細胞以及CD3-CD56+CD16+NK細胞。采用ACEA NovoCyte D2040R流式細胞儀［艾森生物（杭州）有限公司］進行檢測分析，所用試劑均購自艾森生物（杭州）有限公司。

采用直接免疫熒光流式細胞術(shù)進行檢測。具體操作如下：①取兩只干凈的流式管，分別標記為T管和 BNK管；②取 20μL CD3／CD8／CD45／CD4檢測試劑盒（8920008）中的抗體置于T管底，取20μL CD3／CD16+CD56／CD45／CD19 檢 測 試 劑 盒（8920009）中的抗體置于BNK管底；③分別取50μL已充分混勻的新鮮外周血置于T管和BNK管底，漩渦混合器上輕輕振蕩5 s，室溫避光靜止15 min；④向T管和BNK管中加入450μL溶血素，漩渦混合器上輕輕振蕩5 s，室溫避光靜止15 min；⑤2 h內(nèi)流式細胞儀上機檢測，用NovoExpress軟件分析流式數(shù)據(jù)。

1.3 淋巴細胞亞群設(shè)門方法

采用CD45／SSC設(shè)門法，具體步驟如下：①以CD45為橫軸，側(cè)向角（SSC）為縱軸，在 CD45／SSC散點圖上設(shè)CD45+SSClow為淋巴細胞門，見圖1。②分析淋巴細胞內(nèi)CD3+T細胞的絕對值和占淋巴細胞的比例，見圖2。③分析CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞的絕對值和占淋巴細胞的比例，見圖3。④ 分析 CD3-CD19+B細胞及CD3-CD56+CD16+NK細胞的絕對值和占淋巴細胞的比例，見圖4。

圖1 CD45+SSClow淋巴細胞

圖2 CD3+T細胞

圖3 CD3+CD4+T細胞與CD3+CD8+T細胞

圖4 CD3-CD56+CD16+NK細胞與CD3-CD19+B細胞

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0進行統(tǒng)計分析。對符合正態(tài)分布的計量資料用（x—±s）表示，兩樣本組間比較采用獨立樣本t檢驗，多個樣本組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05認為差異統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 研究對象一般資料

患者組男性53例，女性57例；年齡20～55歲，平均（33.4±11.7）歲。根據(jù)SDS評分將患者分為輕、中、重度組，SDS評分53～62分為輕度組，63～72分為中度組，≥73分為重度組；其中輕度組34例，中度組38例，重度組38例。對照組男性30名，女性30名；年齡20～55歲，平均（34.5±12.3）歲。以20～35歲為青年組，36～55歲為中年組，患者組和對照組中的青年組與中年組淋巴細胞各亞群比例和絕對值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。

2.2 患者組與對照組淋巴細胞亞群比較

患者組CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3-CD56+CD16+NK細胞的比例和絕對值均低于對照組，CD3+CD8+T細胞比例和絕對值均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。兩組CD3-CD19+B細胞比例和絕對值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）?；颊呓MCD4+／CD8+比值低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、表2。

2.3 輕、中、重度組淋巴細胞亞群比較

輕、中、重度組的CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞及CD3-CD56+CD16+NK細胞比例和絕對值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。進一步兩兩比較顯示，重度組CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3-CD56+CD16+NK細胞的比例和絕對值低于中、輕度組，中度組低于輕度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）；重度組CD3+CD8+T細胞比例和絕對值高于中、輕度組，中度組高于輕度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。不同抑郁嚴重程度患者組的CD3-CD19+B細胞比例和絕對值差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P均＞0.05）。見表3、表4。

表1 患者組與對照組淋巴細胞各亞群占淋巴細胞比例及CD4+／CD8+比值比較（x—±s）

表2 患者組與對照組淋巴細胞各亞群絕對值比較（x—±s）

表3 輕、中、重度組淋巴細胞各亞群占淋巴細胞比例及CD4+／CD8+比值比較（x—±s）

表4 輕、中、重度組淋巴細胞各亞群絕對值比較（x—±s）

3 討 論

神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)相互作用、影響和協(xié)調(diào)，保證人體的身心健康，其中免疫系統(tǒng)起主要作用［11］。細胞免疫在免疫應(yīng)答系統(tǒng)中起主導(dǎo)作用，CD3+CD4+T細胞與CD3+CD8+T細胞在抗感染、自身免疫等病理生理過程中起重要作用。B淋巴細胞是體液免疫的主要細胞。CD3-CD56+CD16+NK細胞主要發(fā)揮免疫監(jiān)視和免疫防御作用，NK細胞除直接殺傷感染或變異細胞外，還可通過分泌、釋放細胞因子如INF-γ、TNF-β等，增強和促進T細胞的免疫功能與活化［12］。免疫細胞通過抗原刺激，釋放細胞因子、刺激細胞分泌信號、引導(dǎo)和調(diào)節(jié)細胞間的相互作用，進而將免疫、內(nèi)分泌與中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)聯(lián)，影響人體的精神行為［13］。近年有研究顯示，抑郁癥是一種炎癥性疾病，與免疫系統(tǒng)的應(yīng)答和失衡相關(guān)，免疫細胞分泌的細胞因子以及免疫細胞數(shù)量、比例的異常均可導(dǎo)致神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)紊亂，具體作用機制和參與其中的細胞因子還處于研究階段［14-15］。

CD3+CD4+T細胞主要通過各種方式輔助、誘導(dǎo)其他淋巴細胞發(fā)揮免疫功能，CD3+CD8+T細胞主要發(fā)揮免疫抑制功能，當兩者都保持在一個正常范圍內(nèi)且處于平衡狀態(tài)時，機體才能發(fā)揮正常的免疫功能。本研究結(jié)果顯示，患者組的CD3+CD4+T細胞比例和絕對值低于對照組、CD3+CD8+T細胞比例和絕對值高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05），提示抑郁癥患者的抗感染、自身免疫及免疫應(yīng)答功能降低。同時，患者組的CD3-CD56+CD16+NK細胞比例和絕對值低于對照組（P＜0.05），提示抑郁癥患者的免疫監(jiān)視和防御功能降低，殺傷感染或變異細胞的能力減弱。CD4+／CD8+比值是免疫調(diào)節(jié)的一項指標，本研究結(jié)果顯示，患者組CD4+／CD8+比值低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示抑郁癥患者的免疫功能紊亂。

進一步對不同程度抑郁癥患者進行分析，結(jié)果顯示，輕、中、重度組CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞及CD3-CD56+CD16+NK細胞比例和絕對值差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。重度組 CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3-CD56+CD16+NK細胞比例和絕對值低于中、輕度組，中度組低于輕度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）；重度組CD3+CD8+T細胞比例和絕對值高于中、輕度組，中度組高于輕度組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。提示不同程度抑郁癥患者的淋巴細胞亞群比例和絕對值存在差異，且病情越嚴重，機體的抗感染、免疫應(yīng)答及免疫監(jiān)督等功能越弱?？蔀橐钟舭Y病情的評估提供客觀指標。

綜上所述，CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3-CD56+CD16+NK細胞比例和絕對值較健康人群低，而CD3+CD8+T細胞比例和絕對值較健康人群高，且不同程度抑郁癥患者的CD3+T細胞、CD3+CD4+T細胞、CD3+CD8+T細胞及 CD3-CD56+CD16+NK細胞比例和絕對值存在差異；抑郁癥患者的CD3-CD19+B細胞比例和絕對值與健康人群無差異。本研究僅對抑郁癥患者的淋巴細胞亞群進行了初步分析，其具體原因和機制還需更深入的研究進一步探討。