朱衛(wèi)萍 饒高雄

摘要：目的 建立黃龍尾藥材的薄層方法。方法 采用薄層層析法對(duì)三批黃龍尾藥材進(jìn)行鑒別。結(jié)果 采用所篩選的薄層鑒別法展開后，與對(duì)照藥材的相應(yīng)位置有相應(yīng)的斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無干擾，結(jié)論 薄層色譜分離度好，特異性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為黃龍尾藥材的鑒別方法。

關(guān)鍵詞：黃龍尾;薄層色譜;鑒別

中圖分類號(hào)：R286.0?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號(hào)：1007-2349（2019）09-0068-02

黃龍尾來源于薔薇科植物黃龍尾Agrimonia pilosa Ledeb.var.nepalensis（D.Don）Nakai.的干燥地上部分[1]，為仙鶴草的變種，具有收斂止血的功效，主要用于治療咯血、尿血、便血的等各種出血證，除了中草藥應(yīng)用外，納西族、彝族、哈尼族多種民族亦做藥用[2]。

1 儀器與材料

FA1104型0.1mg電子分析天平（上海上平儀器公司）;JP250YHE型超聲波清洗器（南京壘君達(dá)超聲電子設(shè)備有限公司）;硅膠G板（青島海洋化工廠）。正丁醇、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿均為分析純，水為滅菌注射用水;三批黃龍尾試驗(yàn)樣品分別采自昆明谷律（A20090801），大理清碧溪（B20090818）、楚雄羅茨（C20090709），經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)楊樹德教授鑒定為黃龍尾。

2 方法與結(jié)果

2.1.1 系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn) 文獻(xiàn)報(bào)道，黃龍尾（Agrimonia pilosa Ledeb.var.nepalensis（D.Don）Nakai.）主要含有黃酮，鞣質(zhì)和酚類成分，黃酮類有槲皮素、蘆丁、兒茶素等;鞣質(zhì)類有鞣花酸-4-O-β-D-吡喃木糖苷，鞣花酸等;酚類有仙鶴草酚等。此外，還有三萜皂苷，酯類成分。根據(jù)化學(xué)成分研究報(bào)道再通過化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示鞣質(zhì)、酚性成分和黃酮是黃龍尾主要的化學(xué)成分[3-7]。

2.1.2 薄層色譜展開系統(tǒng)篩選 根據(jù)文獻(xiàn)資料和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，按黃龍尾藥材所含鞣質(zhì)以及酚性成分研究制定薄層色譜鑒別方法。小極性部分展開系統(tǒng)優(yōu)選：環(huán)己烷-乙酸乙酯（10：1;5：1;3：1），環(huán)己烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-丙酮（10：1;5：1），三氯甲烷-甲醇（20：1;15：1;10：1），三氯甲烷-甲醇-甲酸（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-水（20：1：0.1），三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（20：1：0.1：0.1）上行展開;大極性部分展開系統(tǒng)優(yōu)選：三氯甲烷-甲醇（3：1;2：1;1：1），三氯甲烷-丙酮（1：1），正丁醇-冰醋酸-水（4：1：1）正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上層），三氯甲烷-甲醇-水（65：35：10，下層），三氯甲烷-乙醇（（3：1;2：1;1：1），上行展開。

2.1.3 供試品提取方法優(yōu)化 供試品溶液制備分別采用了以下8種方法進(jìn)行篩選和優(yōu)化。方法1：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法2：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液;方法3：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法4：取本品粉末1 g，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液;方法5：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法6：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液;方法7：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液;方法8：取本品粉末1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。

對(duì)照物質(zhì)的選用 目前尚無鑒別該藥材專屬性對(duì)照品，故鑒別項(xiàng)目中選擇對(duì)照藥材為對(duì)照物質(zhì)，照供試品溶液的制備方法制備對(duì)照藥材溶液。

對(duì)照藥材溶液制備：小極性部分：取黃龍尾對(duì)照藥材1 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

大極性部分：取黃龍尾對(duì)照藥材1 g，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.1.4 檢視方法選擇 噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)清晰;噴以三氯化鐵試液，置日光下檢視，置紫外光燈（254nm+365nm）下檢視結(jié)果見表1。

2.1.5 方法耐用性考察

2.1.5.1 不同廠牌的薄層板 硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）;硅膠G薄層板（青島美高化工有限公司）;硅膠G薄層板（煙臺(tái)信德化工有限公司）。

2.1.5.2 點(diǎn)樣方式點(diǎn)樣量 點(diǎn)樣方式為接觸點(diǎn)樣;點(diǎn)樣量為1 μL、2 μL、3 μL、4 μL、5 μL、8 μL。

2.1.5.3 溫度及相對(duì)濕度的影響 按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察本品在溫度10～30℃、相對(duì)濕度為35%～80%展開時(shí)，對(duì)薄層色譜結(jié)果的影響。結(jié)果表明，在上述溫度、相對(duì)濕度范圍內(nèi)對(duì)該薄層色譜結(jié)果無明顯影響。

2.1.5.4 預(yù)平衡的影響 按照試驗(yàn)所得薄層色譜條件，考察未平衡、平衡10 min、平衡20 min及平衡30 min展開，對(duì)薄層色譜結(jié)果的影響。結(jié)果表明，未平衡、平衡10 min、平衡20 min及平衡30 min展開，所得斑點(diǎn)的分離度均較好，因此，為了簡(jiǎn)化操作程序，采用未平衡展開。

2.1.5.5 重復(fù)性 不同產(chǎn)地的3批樣品的檢測(cè)結(jié)果表明，該方法具有重復(fù)性。

2.2 結(jié)果 試驗(yàn)表明，小極性部分：采用方法8制備供試品溶液，硅膠G薄層板，點(diǎn)樣量2 μL，以三氯甲烷-甲醇（20：1）為展開劑，噴以含有10%硫酸乙醇試液，在105℃烘烤至斑點(diǎn)清晰.

大極性部分：試驗(yàn)表明，采用方法3制備供試品溶液，硅膠G薄層板，點(diǎn)樣量2μl，以正丁醇-乙酸乙酯-水（4：1：5，上層）為展開劑，噴以三氯化鐵試液后置日光下檢視，所得薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離較好。

3 討論

根據(jù)黃龍尾為所含化學(xué)成分的不同，將該藥材的薄層色譜鑒別分為小極性部分和大極性部分兩個(gè)段來鑒別;兩個(gè)極性段用所優(yōu)選的方法鑒別，分離效果好，斑點(diǎn)清晰，有較好的鑒別意義。本研究對(duì)黃龍尾的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制和薄層色譜鑒別提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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（收稿日期：2019-06-03）