楊水秀， 國果

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 貴州 貴陽 550025； 2.貴陽市公共衛(wèi)生救治中心 血庫室， 貴州 貴陽 550004)

獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)即艾滋病，是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起，主要侵犯機(jī)體淋巴細(xì)胞，特別是CD4+T淋巴細(xì)胞遭大量破壞后，細(xì)胞免疫功能缺損，患者出現(xiàn)機(jī)會性感染或腫瘤，發(fā)展為AIDS[1]，迄今AIDS仍未找到治愈的方法，更無疫苗預(yù)防，抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(antiretroviral therapy，ART)是目前AIDS最有效的治療方法，主要是通過抑制病毒的復(fù)制，增加CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量，從而減少AIDS的機(jī)會性感染，改善HIV感染者的預(yù)后，進(jìn)一步提高生存質(zhì)量，可有效預(yù)防HIV，降低其發(fā)病率和病死率[2]。近年來，科學(xué)家們研究發(fā)現(xiàn)多種免疫細(xì)胞及其釋放的細(xì)胞因子與HIV/AIDS的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，他們參與了抗HIV病毒免疫應(yīng)答過程，有可能成為抗HIV病毒新的輔助治療途徑[3-5]。本研究通過觀察HIV感染者治療前及ART 3個月時血液中干擾素-γ(IFN-γ) 、白細(xì)胞介素-21(IL-21)、趨化因子CXC受體5(CXCR5)及CD8+T淋巴細(xì)胞水平，分析這些指標(biāo)與HIV感染病程進(jìn)展的相關(guān)性。

1 對象與方法

1.1 對象及分組

1.1.1對象 2016年5月-2017年4月門診及住院的75例HIV感染病例，其中男48例、女27例，18～64歲，均經(jīng)免疫印跡法確認(rèn)為HIV-1型抗體陽性，符合2018年衛(wèi)生部《艾滋病診療指南》的標(biāo)準(zhǔn)。所有入組者均排除結(jié)核感染、其他自身免疫性疾病、糖尿病病、高血壓、心血管疾病等基礎(chǔ)疾病，排除乙型肝炎、丙型肝炎等常見病毒感染及其他感染性疾病，研究均獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，病人知情同意。

1.1.2分組 將75例HIV感染病例根據(jù)CD4+T淋巴細(xì)胞計數(shù)均分為A組(CD4+T<200個/μL)、B組(CD4+T為 200 ～500個/μL)和C組(CD4+T>500個/μL), 另選取同期健康體檢者25例為對照組、均為抗HIV陰性健康體檢者。對照組和3組HIV感染者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法及觀察指標(biāo)

分別于患者ART前1 d、ART后3個月時，采集空腹靜脈血，采用BD流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法檢測血清IFN-γ、IL-21及CXCR5水平，分別比較ART前及ART后3個月時上述檢測指標(biāo)的變化，采用Pearson相關(guān)分析IFN-γ、CXCR5、IL-21、CD8+T淋巴細(xì)胞與HIV感染疾病病程進(jìn)展的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清IFN-γ水平

ART前，各組血清FN-γ水平比較，對照組>C組>B組>A組，各組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)； ART后3個月時 ，HIV感染各組(A組、B組、C組)的IFN-γ水平高于治療前，差異均有統(tǒng)計意義(P<0.01)；但A、B、C組互相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 HIV感染者ART前后血清IFN-γ水平與對照組比較

注：(1)與對照組同時點比較，P<0.01；(2)與A組同時點比較，P<0.01；(3)與B組同時點比較，P<0.01；(4)與同組ART前比較，P<0.01。

2.2 血清IL-21水平

ART前各組血清IL-21水平比較，A組顯著低于B組，A組、B組均顯著低于C組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，C組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)； ART后3個月時 ，HIV感染各組(A組、B組、C組)的IFN-γ水平高于同組治療前，差異均有統(tǒng)計意義(P<0.01)。見表2。

表2 HIV感染者ART前后血清IL-21水平與對照組比較

注：(1)與對照組同時點比較，P<0.05；(2)與A組同時點比較，P<0.05；(3)與B組同時點比較，P<0.05；(4)與同組ART前比較，P<0.01。

2.3 血清CXCR5水平

ART前各組血清CXCR5水平比較，A組顯著低于B組，A組、B組均顯著低于C組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；ART后3個月時 ，HIV感染各組(A組、B組、C組)的CXCR5水平顯著高于同組治療前，差異均有統(tǒng)計意義(P<0.01)。見表2。

2.4 CD8+T淋巴細(xì)胞、病毒載量與IFN-γ、IL-21、CXCR5水平的相關(guān)性

對75例HIV感染者的CD8+T淋巴細(xì)胞、病毒載量與血清IFN-γ、IL-21、CXCR5指標(biāo)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示CD8+T淋巴細(xì)胞計數(shù)與IFN-γ、CXCR5、IL-21的水平呈正相關(guān)，病毒載量與IFN-γ、CXCR5、IL-21水平呈負(fù)相關(guān)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表3 HIV感染者ART前后血清CXCR5水平與對照組比較

注：(1)與對照組同時點比較，P<0.05；(2)與A組同時點比較，P<0.05；(3)與B組同時點比較，P<0.05；(4)與同組ART前比較，P<0.01。

表4 各組HIV感染患者血液CD8+T淋巴細(xì)胞、病毒載量與血清IFN-γ、IL-21、CXCR5水平的相關(guān)性

注：(1)為P<0.01。

3 討論

HIV感染人體后，會導(dǎo)致淋巴細(xì)胞數(shù)絕對減少及細(xì)胞功能受損，人體的免疫功能紊亂，繼而引起機(jī)體免疫功能缺陷及異常免疫激活。有研究表明HIV抗病毒治療可恢復(fù)其部分免疫功能[6]，但恢復(fù)較慢，且其機(jī)制尚不十分清楚。IFN-γ主要是由NK細(xì)胞和活化的T淋巴細(xì)胞(包括CD8+T淋巴細(xì)胞和TH0細(xì)胞、TH1細(xì)胞)分泌，具有抗病毒、抗增殖及免疫調(diào)節(jié)免疫等功能[7-8]。其通過誘導(dǎo)抗病毒蛋白(antiviral protein, AVP)的合成發(fā)揮相應(yīng)效應(yīng),強(qiáng)濾泡輔助T細(xì)胞(TFH)的免疫功能，實現(xiàn)對病毒的抑制作用[9-11]；IFN-γ在 HIV感染者疾病進(jìn)展中可與IL-12等免疫細(xì)胞因子及CD4+CD25+FOXP3Treg等免疫細(xì)胞間相互作用，發(fā)揮中心因子作用[12]。HIV可直接激活HIV感染者的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，激活慢性免疫，最終造成機(jī)體免疫系統(tǒng)衰竭[13]，IFN-γ還可介導(dǎo)單核細(xì)胞分泌大量的細(xì)胞因子，實現(xiàn)相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)[14]。本研究顯示，ART前IFN-γ水平低于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，隨著CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)下降，外周血中IFN-γ水平呈逐漸下降趨勢。經(jīng)ART有效抑制病毒后，各組IFN-γ水平均較治療前增加，提示IFN-γ可能參與了抗病毒及機(jī)體免疫重建過程，但仍低于對照組，考慮與感染者免疫功能恢復(fù)不全有關(guān)，與既往研究結(jié)果符合[15]。

IL-21在控制慢性病毒感染中有免疫增強(qiáng)的作用，主要由CD4+T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。由于HIV感染會導(dǎo)致 CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量減少，使得IL-21水平低下。有研究表明IL-21會增強(qiáng)CD4+T細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的功能，在控制病毒感染中起重要的作用[16]。最新研究顯示，IL-21可上調(diào)和增強(qiáng)HIV感染的自然抗性，外源增加IL-21水平或可促進(jìn)機(jī)體細(xì)胞中IL-21蓄積，抑制早期HIV感染的程度[17]。IL-21還能提高抗凋亡蛋白 Bcl-2和Bcl-X(L)表達(dá)，增強(qiáng)HIV特異抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用；IL-21激活的NK細(xì)胞在共同培養(yǎng)的被HIV感染同源CD4+T淋巴細(xì)胞中可通過穿孔素或白細(xì)胞功能相關(guān)抗原(LFA-1)依賴方式抑制HIV病毒復(fù)制[18]。HIV感染和破壞人T輔助細(xì)胞，從而導(dǎo)致感染者機(jī)體免疫缺陷。IL-21還能刺激T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ，誘導(dǎo)其增殖和細(xì)胞毒活性。本研究結(jié)果顯示，未ART前，IL-21水平隨著機(jī)體免疫功能下降而呈降低趨勢，經(jīng)ART治療后，其水平逐漸增高，與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示IL-21參與了HIV感染過程。

CXCR5在肝、脾和淋巴結(jié)等組織表達(dá)豐富，是重要的B淋巴細(xì)胞組織因子[19]，在相關(guān)臨床疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、重癥肌無力、糖尿病等患者外周血中可以檢測到CXCR5的高表達(dá)，在一些自身免疫性疾病中可作為一種疾病發(fā)展階段的指征。CXCR5不僅表達(dá)于B細(xì)胞表面，還是TFH表面的重要標(biāo)志，CXCR5CD8+T淋巴細(xì)胞具有抑制病毒復(fù)制的功能[20-22]，有研究表明，外周血CXCR5+CD8+T淋巴細(xì)胞頻率及功能與HIV感染者的基本進(jìn)展密切相關(guān)[23]。因此CXCR5水平可能與慢性病毒感染疾病的嚴(yán)重程度存在相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示，ART前，CXCR5細(xì)胞因子水平變化均為A組

本研究結(jié)果顯示，未經(jīng)過ART治療的HIV感染者血清中IFN-γ、IL-21、CXCR5細(xì)胞因子水平變化均為A組

綜上所述，IFN-γ、IL-21、CXCR5等細(xì)胞因子及CD8+T淋巴細(xì)胞與HIV感染病程密切相關(guān)，提示血清IFN-γ、IL-21、CXCR5細(xì)胞因子水平變化可能作為疾病病程、病情預(yù)判的檢測指標(biāo)，并可評價ART療效，有望成為此類病人的檢測指標(biāo)，可能為今后HIV感染免疫治療提供新的方向。