熊波 謝先林 高青松 陳鳳蘭 呂慶華 陳金芝

（1，湖北省荊門市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 448000；2，湖北省荊門市畜牧獸醫(yī)發(fā)展中心 448000）

禽流感是禽流行性感冒的簡稱，分為高致性、低致病性和非致病性3 大類，其中高致病性禽流感是由H5和H7亞毒株（以H5N1、H5N6和H7N9為代表）引起的。高致病性禽流感因其在禽類中傳播快、危害大、病死率高，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為A 類動(dòng)物疫病，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。家禽高致病性禽流感采用疫苗接種是最好的預(yù)防辦法，疫苗主要分為弱毒活疫苗、滅活油乳劑疫苗、基因工程疫苗3 類。從實(shí)際效果、安全性能和經(jīng)濟(jì)實(shí)用性等方面綜合考慮，主要以滅活油乳劑疫苗為主，然而此類疫苗的免疫注射家禽應(yīng)激反應(yīng)大，特別是對(duì)蛋雞的產(chǎn)蛋率影響比較大。本課題探索在實(shí)踐中改變傳統(tǒng)的疫苗免疫注射方法，在疫苗中添加硫酸頭孢喹肟佐劑，減少注射應(yīng)激反應(yīng)，提升疫苗免疫效果展開試驗(yàn)和研究。

1 試驗(yàn)情況

長期以來，禽流感主要以H5N1免疫為主，隨著H7N9禽流感防控形勢日益嚴(yán)峻，禽流感疫苗在2017 年由原來的H5亞型三價(jià)滅活疫苗（Re-6-7-8 株）變?yōu)镠5+H7的雙聯(lián)苗。本課題于2018 年4 月至12 月，開展了疫苗中添加硫酸頭孢喹肟佐劑在禽流感免疫效果的研究。

1.1 試驗(yàn)蛋雞場情況

蛋雞場位于沙洋縣拾橋鎮(zhèn)東風(fēng)村8 組，遠(yuǎn)離人群密集區(qū)，自然防疫條件好，地理位置優(yōu)越。該場為荊門市神羽禽業(yè)有限公司合作社的一個(gè)代養(yǎng)場，該養(yǎng)殖場為新場，沒有發(fā)生過重大動(dòng)物疫病，飼養(yǎng)能力為11000 只蛋雞，符合實(shí)驗(yàn)室所需樣品數(shù)量要求。

附表 抗體檢測結(jié)果

1.2 試驗(yàn)疫苗和獸藥

禽流感二價(jià)滅活疫苗（H5+H7），吉林冠界生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：201802012；硫酸頭孢喹肟注射液由四川恒通動(dòng)物制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml：0.25g；包裝：10ml×2 瓶；生產(chǎn)批號(hào)：20171203。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)選擇生產(chǎn)周期長的蛋雞作為研究對(duì)象，首次選擇1200 只16 日齡的蛋雞進(jìn)行免疫試驗(yàn)，用同批次的1200 只蛋雞作為對(duì)照組。75 日齡進(jìn)行第二次免疫試驗(yàn)，在開產(chǎn)前105 日齡進(jìn)行第三次免疫試驗(yàn)。

1.3.2 免疫方法

將10ml 0.25g 規(guī)格的硫酸頭孢喹肟注射液作為佐劑，按10ml 添加到每瓶500 頭份H5+H7禽流感疫苗中，充分混勻后對(duì)試驗(yàn)的1200 只蛋雞進(jìn)行免疫注射，注射部位為頸部皮下，每只注射0.3ml。對(duì)比組的蛋雞也同樣進(jìn)行免疫注射，但疫苗中不添加硫酸頭孢喹肟佐劑。第二次、第三次免疫試驗(yàn)方法同第一次免疫試驗(yàn)，只是注射劑量都變?yōu)?.5ml。（疫苗操作說明規(guī)定2 周齡每只注射0.3ml，5 周齡以上雞每只0.5ml。）

免疫后，觀察試驗(yàn)動(dòng)物有無副反應(yīng)，采食量變化、發(fā)病和死淘、對(duì)產(chǎn)蛋的影響等情況，做好相關(guān)記錄。

2 高致病性禽流感（H5+H7）滅活苗疫苗抗體檢測情況

2.1 采血

一次性采血器前腔靜脈采血，每份不少于2ml。采血后，將采血器活塞外拉預(yù)留血清析出空間，并塞上護(hù)針帽，去除推桿，在采血器上標(biāo)明樣品編號(hào)。在實(shí)驗(yàn)室中，靜置2h 后離心機(jī)3500G 離心6min，分離血清。

采血試驗(yàn)蛋雞數(shù)量和對(duì)照組蛋雞數(shù)量各定為160 只。分別于37 日齡（一免后21d）、96 日齡（二免后21d）、126 日齡（三免后21d），各采血1 次，分離血清做禽流感免疫抗體檢測試驗(yàn)。

2.2 抗體檢測方法

按照國標(biāo) 《高致病性禽流感診斷技術(shù)》 （GB/T18936-2003）中血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）進(jìn)行，具體操作步驟參照試劑盒說明書。

2.3 抗體檢測結(jié)果

見附表。

3 免疫抗體效果分析

本試驗(yàn)均在免疫注射后21d 進(jìn)行抗體監(jiān)測。第一次免疫試驗(yàn)組抗體合格率為0.78，對(duì)照組抗體合格率為0.73；第二次免疫試驗(yàn)組抗體合格率為0.96，對(duì)照組抗體合格率為0.95；第三次免疫試驗(yàn)組抗體合格率為0.98，對(duì)照組抗體合格率為0.96，3 次免疫試驗(yàn)中試驗(yàn)組和對(duì)照組抗體平均合格率差異不顯著（＞0.05）。

4 試驗(yàn)期間副反應(yīng)發(fā)病死亡情況

本試驗(yàn)第一次試驗(yàn)組1200 只蛋雞免疫后沒有應(yīng)激死亡，對(duì)照組無死亡；第二次試驗(yàn)組1200 只蛋雞免疫后沒有應(yīng)激死亡，對(duì)照組死亡4 只；第三次試驗(yàn)組1200 只蛋雞免疫后應(yīng)激死亡2 只，對(duì)照組死亡8 只。3 次試驗(yàn)中試驗(yàn)組共死亡2 只，對(duì)照組死亡12 只。通過對(duì)比觀察，3 次免疫注射后，試驗(yàn)組和對(duì)照組均出現(xiàn)采食量下降，但試驗(yàn)組3d 恢復(fù)到平時(shí)采食量，而對(duì)照組7d 恢復(fù)正常采食。添加抗生素的試驗(yàn)組達(dá)到90%的產(chǎn)蛋高峰比對(duì)照組提前了15d。

5 結(jié)論

（1）提高蛋雞機(jī)體抗應(yīng)激能力。通過試驗(yàn)對(duì)比，疫苗中添加抗生素的蛋雞機(jī)體抗應(yīng)激能力增強(qiáng)，死亡率下降0.83%，采食量恢復(fù)較快，產(chǎn)蛋高峰期提前，蛋雞生產(chǎn)性能得到提升。

（2）通過試驗(yàn)結(jié)果顯示，添加抗生素對(duì)抗體水平無顯著影響。但通過第二、三次強(qiáng)化免疫后，家禽能產(chǎn)生更高和持續(xù)時(shí)間更久的免疫保護(hù)效果。

（3）禽流感疫苗由強(qiáng)毒禽流感病毒制成的滅活油乳劑疫苗，硫酸頭孢喹肟注射液也為油乳劑，只對(duì)細(xì)菌有消滅作用，對(duì)病毒性病原不產(chǎn)生影響；硫酸頭孢喹肟注射液為中性酸堿度，對(duì)疫苗的pH 不產(chǎn)生影響，所以兩者結(jié)合使用不存在排異性。3 次試驗(yàn)中抗體水平試驗(yàn)組和對(duì)照組沒有明顯區(qū)別，通過試驗(yàn)得到驗(yàn)證。

高致病性禽流感疫苗免疫在國內(nèi)已推廣應(yīng)用多年，但疫苗免疫副反應(yīng)和免疫效果還需要進(jìn)一步探索和解決，這也是湖北省乃至全國禽類養(yǎng)殖業(yè)的重點(diǎn)研究方向。一般情況，疫苗在生產(chǎn)和使用過程中容易產(chǎn)生雜菌，在對(duì)雞群進(jìn)行免疫注射后，如果有雜菌隨疫苗進(jìn)入，增加雞群產(chǎn)生副反應(yīng)和患病的風(fēng)險(xiǎn)，將硫酸頭孢喹肟一起免疫注射可將進(jìn)入家禽注射部位傷口和部分體內(nèi)的細(xì)菌消滅，減少機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)。本項(xiàng)目利用試驗(yàn)制定出科學(xué)合理的免疫程序，探索出減少機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)、繼發(fā)感染和提高蛋雞生產(chǎn)性能的有效方法，本項(xiàng)目的實(shí)施將會(huì)顯著提升蛋雞養(yǎng)殖場經(jīng)濟(jì)效益，示范推廣前景廣闊。