熊波 謝先林 高青松 陳鳳蘭 呂慶華 陳金芝

（1，湖北省荊門市動物疫病預防控制中心 448000；2，湖北省荊門市畜牧獸醫(yī)發(fā)展中心 448000）

禽流感是禽流行性感冒的簡稱，分為高致性、低致病性和非致病性3 大類，其中高致病性禽流感是由H5和H7亞毒株（以H5N1、H5N6和H7N9為代表）引起的。高致病性禽流感因其在禽類中傳播快、危害大、病死率高，被世界動物衛(wèi)生組織列為A 類動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。家禽高致病性禽流感采用疫苗接種是最好的預防辦法，疫苗主要分為弱毒活疫苗、滅活油乳劑疫苗、基因工程疫苗3 類。從實際效果、安全性能和經(jīng)濟實用性等方面綜合考慮，主要以滅活油乳劑疫苗為主，然而此類疫苗的免疫注射家禽應(yīng)激反應(yīng)大，特別是對蛋雞的產(chǎn)蛋率影響比較大。本課題探索在實踐中改變傳統(tǒng)的疫苗免疫注射方法，在疫苗中添加硫酸頭孢喹肟佐劑，減少注射應(yīng)激反應(yīng)，提升疫苗免疫效果展開試驗和研究。

1 試驗情況

長期以來，禽流感主要以H5N1免疫為主，隨著H7N9禽流感防控形勢日益嚴峻，禽流感疫苗在2017 年由原來的H5亞型三價滅活疫苗（Re-6-7-8 株）變?yōu)镠5+H7的雙聯(lián)苗。本課題于2018 年4 月至12 月，開展了疫苗中添加硫酸頭孢喹肟佐劑在禽流感免疫效果的研究。

1.1 試驗蛋雞場情況

蛋雞場位于沙洋縣拾橋鎮(zhèn)東風村8 組，遠離人群密集區(qū)，自然防疫條件好，地理位置優(yōu)越。該場為荊門市神羽禽業(yè)有限公司合作社的一個代養(yǎng)場，該養(yǎng)殖場為新場，沒有發(fā)生過重大動物疫病，飼養(yǎng)能力為11000 只蛋雞，符合實驗室所需樣品數(shù)量要求。

附表 抗體檢測結(jié)果

1.2 試驗疫苗和獸藥

禽流感二價滅活疫苗（H5+H7），吉林冠界生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：201802012；硫酸頭孢喹肟注射液由四川恒通動物制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格10ml：0.25g；包裝：10ml×2 瓶；生產(chǎn)批號：20171203。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗動物

本試驗選擇生產(chǎn)周期長的蛋雞作為研究對象，首次選擇1200 只16 日齡的蛋雞進行免疫試驗，用同批次的1200 只蛋雞作為對照組。75 日齡進行第二次免疫試驗，在開產(chǎn)前105 日齡進行第三次免疫試驗。

1.3.2 免疫方法

將10ml 0.25g 規(guī)格的硫酸頭孢喹肟注射液作為佐劑，按10ml 添加到每瓶500 頭份H5+H7禽流感疫苗中，充分混勻后對試驗的1200 只蛋雞進行免疫注射，注射部位為頸部皮下，每只注射0.3ml。對比組的蛋雞也同樣進行免疫注射，但疫苗中不添加硫酸頭孢喹肟佐劑。第二次、第三次免疫試驗方法同第一次免疫試驗，只是注射劑量都變?yōu)?.5ml。（疫苗操作說明規(guī)定2 周齡每只注射0.3ml，5 周齡以上雞每只0.5ml。）

免疫后，觀察試驗動物有無副反應(yīng)，采食量變化、發(fā)病和死淘、對產(chǎn)蛋的影響等情況，做好相關(guān)記錄。

2 高致病性禽流感（H5+H7）滅活苗疫苗抗體檢測情況

2.1 采血

一次性采血器前腔靜脈采血，每份不少于2ml。采血后，將采血器活塞外拉預留血清析出空間，并塞上護針帽，去除推桿，在采血器上標明樣品編號。在實驗室中，靜置2h 后離心機3500G 離心6min，分離血清。

采血試驗蛋雞數(shù)量和對照組蛋雞數(shù)量各定為160 只。分別于37 日齡（一免后21d）、96 日齡（二免后21d）、126 日齡（三免后21d），各采血1 次，分離血清做禽流感免疫抗體檢測試驗。

2.2 抗體檢測方法

按照國標 《高致病性禽流感診斷技術(shù)》 （GB/T18936-2003）中血凝和血凝抑制試驗（HA-HI）進行，具體操作步驟參照試劑盒說明書。

2.3 抗體檢測結(jié)果

見附表。

3 免疫抗體效果分析

本試驗均在免疫注射后21d 進行抗體監(jiān)測。第一次免疫試驗組抗體合格率為0.78，對照組抗體合格率為0.73；第二次免疫試驗組抗體合格率為0.96，對照組抗體合格率為0.95；第三次免疫試驗組抗體合格率為0.98，對照組抗體合格率為0.96，3 次免疫試驗中試驗組和對照組抗體平均合格率差異不顯著（＞0.05）。

4 試驗期間副反應(yīng)發(fā)病死亡情況

本試驗第一次試驗組1200 只蛋雞免疫后沒有應(yīng)激死亡，對照組無死亡；第二次試驗組1200 只蛋雞免疫后沒有應(yīng)激死亡，對照組死亡4 只；第三次試驗組1200 只蛋雞免疫后應(yīng)激死亡2 只，對照組死亡8 只。3 次試驗中試驗組共死亡2 只，對照組死亡12 只。通過對比觀察，3 次免疫注射后，試驗組和對照組均出現(xiàn)采食量下降，但試驗組3d 恢復到平時采食量，而對照組7d 恢復正常采食。添加抗生素的試驗組達到90%的產(chǎn)蛋高峰比對照組提前了15d。

5 結(jié)論

（1）提高蛋雞機體抗應(yīng)激能力。通過試驗對比，疫苗中添加抗生素的蛋雞機體抗應(yīng)激能力增強，死亡率下降0.83%，采食量恢復較快，產(chǎn)蛋高峰期提前，蛋雞生產(chǎn)性能得到提升。

（2）通過試驗結(jié)果顯示，添加抗生素對抗體水平無顯著影響。但通過第二、三次強化免疫后，家禽能產(chǎn)生更高和持續(xù)時間更久的免疫保護效果。

（3）禽流感疫苗由強毒禽流感病毒制成的滅活油乳劑疫苗，硫酸頭孢喹肟注射液也為油乳劑，只對細菌有消滅作用，對病毒性病原不產(chǎn)生影響；硫酸頭孢喹肟注射液為中性酸堿度，對疫苗的pH 不產(chǎn)生影響，所以兩者結(jié)合使用不存在排異性。3 次試驗中抗體水平試驗組和對照組沒有明顯區(qū)別，通過試驗得到驗證。

高致病性禽流感疫苗免疫在國內(nèi)已推廣應(yīng)用多年，但疫苗免疫副反應(yīng)和免疫效果還需要進一步探索和解決，這也是湖北省乃至全國禽類養(yǎng)殖業(yè)的重點研究方向。一般情況，疫苗在生產(chǎn)和使用過程中容易產(chǎn)生雜菌，在對雞群進行免疫注射后，如果有雜菌隨疫苗進入，增加雞群產(chǎn)生副反應(yīng)和患病的風險，將硫酸頭孢喹肟一起免疫注射可將進入家禽注射部位傷口和部分體內(nèi)的細菌消滅，減少機體應(yīng)激反應(yīng)。本項目利用試驗制定出科學合理的免疫程序，探索出減少機體應(yīng)激反應(yīng)、繼發(fā)感染和提高蛋雞生產(chǎn)性能的有效方法，本項目的實施將會顯著提升蛋雞養(yǎng)殖場經(jīng)濟效益，示范推廣前景廣闊。