周碧云 ,張玲 ，巫小莉 ，肖鴻岸 ，曾紫婷

(1.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，廣東廣州51000，2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)金沙洲醫(yī)院，廣東廣州510168，3.廣東醫(yī)學(xué)院，廣東東莞523808)

Sysmex XN-1000是一臺(tái)全自動(dòng)五分類的血液分析儀,全血細(xì)胞檢測(cè),有全血和預(yù)稀釋血兩種檢測(cè)模式。血小板檢測(cè)，有電阻法和光學(xué)法(RET通道)。根據(jù) 《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T406-2012》[1]血液分析儀不同檢測(cè)模式的結(jié)果可比性要求，對(duì)兩種檢測(cè)模式結(jié)果的可比性和一致性進(jìn)行評(píng)價(jià)；對(duì)檢測(cè)血小板的兩種方法電阻法和光學(xué)法進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑 Sysmex XN1000全自動(dòng)血液分析儀；配套試劑、校準(zhǔn)物名稱：XN-CAL,批號(hào)：63130525； 質(zhì) 控 物 批 號(hào) ： (H、N、L)63611101、63611102、63611103； 廣州陽(yáng)普公司：2mg/ml EDTA-K2抗凝管

1.2 一般資料 ① 據(jù)《WS/T406-2012》要求，按標(biāo)本數(shù)量比例選擇20例廣州中醫(yī)藥大學(xué)金沙洲醫(yī)院門診部與住院部病人的新鮮抗凝全血標(biāo)本；②血小板大于400×109/L的臨床樣本15例；紅細(xì)胞MCV小于65fl且血小板直方圖異常的臨床樣本100例。

1.3 方法

1.3.1 儀器的準(zhǔn)備：按《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T406-2012》臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目操作要求儀器進(jìn)行驗(yàn)證，內(nèi)容包括：精密度、攜帶污染率、線性、參考區(qū)間驗(yàn)證、準(zhǔn)確性、可比性等，各項(xiàng)均達(dá)到國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；

1.3.2 每天質(zhì)控(高、中、低)數(shù)據(jù)均在±2SD之內(nèi)；

1.3.3 實(shí)驗(yàn)操作 ①全血細(xì)胞兩種檢測(cè)模式的比較：a.全血檢測(cè)模式：20例臨床樣本測(cè)定白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板，每例樣本計(jì)數(shù)兩次取均值；b.預(yù)稀釋模式：上述20例標(biāo)本，每例取20μl血加到120μl稀釋液中，同時(shí)稀三管，混勻后檢測(cè)(目的：減少誤差)。每份標(biāo)本檢測(cè)兩次取均值；兩種檢測(cè)模式所測(cè)得的均值，分別計(jì)算白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)等的相對(duì)偏差；②血小板兩種檢測(cè)方法(電阻法和光學(xué)法)的評(píng)價(jià)：高值血小板(＞400×109/L)的臨床樣本 15例；紅細(xì)胞 MCV 小于65fl且血小板直方圖異常的臨床樣本100例，同時(shí)用電阻法和光學(xué)法檢測(cè)血小板，比較兩種方法學(xué)對(duì)異常樣本血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。

1.3.4 離群值檢驗(yàn)和按EP9-A2文件要求對(duì)方法內(nèi)和方法間所有標(biāo)本的測(cè)定值進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，按照公式分別計(jì)算方法內(nèi)絕對(duì)偏差、相對(duì)偏差和方法間絕對(duì)偏差、相對(duì)偏差，可接受限是上述偏差的4倍。如果一個(gè)標(biāo)本同時(shí)超出了絕對(duì)偏差和相對(duì)偏差的可接受限，判斷為離群點(diǎn)。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)方法 ①全血細(xì)胞兩種檢測(cè)模式的比較：參照《WS/T406-2012》中表8可比性驗(yàn)證的允許偏差及比對(duì)樣本的濃度要求，計(jì)算兩種檢測(cè)模式結(jié)果的相對(duì)偏差，與允許偏差作比較，判斷兩種檢測(cè)模式是否具有可比性；②血小板兩種檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)：采用t檢驗(yàn)和Z檢驗(yàn)：評(píng)價(jià)血小板兩種檢測(cè)方法。

2 結(jié)果

2.1 離群點(diǎn)判斷 4個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目方法內(nèi)和方法間的可接受限結(jié)果見表1。經(jīng)過(guò)判斷，本次實(shí)驗(yàn)種各項(xiàng)目未見離群點(diǎn)，說(shuō)明儀器精密度良好，所獲數(shù)據(jù)可以進(jìn)行下一步分析。

2.2 兩種檢測(cè)模式檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差 儀器校準(zhǔn)后，兩種檢測(cè)模式的各項(xiàng)結(jié)果達(dá)到行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，偏差在允許范圍內(nèi)。見表2。

2.3 Wilcoxon符號(hào)秩檢驗(yàn)結(jié)果 電阻抗法和光學(xué)法兩通道，高值血小板的計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05)；紅細(xì)胞平均體積小于65fl組的血小板計(jì)數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 見表3。

表1 各項(xiàng)目重復(fù)測(cè)量方法內(nèi)和方法間可接受限

表2 兩種檢測(cè)模式檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)偏差

表3 RBC小MCV組及高值血小板組資料Wilcoxon符號(hào)秩檢結(jié)果

3 討論

血細(xì)胞分析,以靜脈全血檢測(cè)的準(zhǔn)確性最高，各醫(yī)院檢驗(yàn)科大部分用全自動(dòng)全血模式進(jìn)行血細(xì)胞檢驗(yàn)，但由于某些特殊原因，比如嬰幼兒、長(zhǎng)期化療病人、血管難抽血等人群，不能依靠靜脈全血模式檢測(cè)時(shí)，就要對(duì)患者靜脈全血或末梢血作預(yù)稀釋處理，在預(yù)稀釋模式下檢測(cè)。Sysmex XN-1000全自動(dòng)血液分析儀，由于兩種檢測(cè)模式分別采用各自的校準(zhǔn)因子，雖然通道與方法學(xué)一樣，但稀釋比不一樣，計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)不一樣，容易造成結(jié)果出現(xiàn)偏倚或誤差，給臨床診治帶來(lái)困擾，給患者帶來(lái)不信任感。如何減少不同檢測(cè)模式之間的偏倚和誤差，保證兩種檢測(cè)模式結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性和一致性，是質(zhì)量保證的重要措施與前提。因此，比較這兩種模式檢測(cè)結(jié)果的一致性，探討其檢驗(yàn)結(jié)果的可比性顯得非常重要[2-5]；參照《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T406-2012》文件要求進(jìn)行選擇臨床標(biāo)本和設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以全自動(dòng)模式作為參比方法，預(yù)稀釋模式作為實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行儀器校準(zhǔn)后的數(shù)據(jù)分析。儀器校準(zhǔn)后的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板四個(gè)參數(shù)，按照CLSI EP9-A2文件要求，計(jì)算WBC、RBC、Hb和PLT四個(gè)項(xiàng)目的可接受限，判斷離群點(diǎn)，結(jié)果顯示4個(gè)項(xiàng)目在兩次重復(fù)測(cè)定方法和參比方法間，均無(wú)超出點(diǎn)和離群點(diǎn)，提示Sysmex XN-1000精密度好，獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以進(jìn)一步用于統(tǒng)計(jì)分析[1-6]。表2結(jié)果顯示，兩種檢測(cè)模式的結(jié)果具有可比性，均達(dá)到了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《WS/T406-2012》，符合使用不同的檢測(cè)程序測(cè)定某種分析物獲得的檢測(cè)結(jié)果間的一致性，結(jié)果間的差異不超過(guò)規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可認(rèn)為結(jié)果具有可比性[1]的要求。

Sysmex XN-1000全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)血小板，常規(guī)通道采用電阻抗法，儀器在2～30fl范圍內(nèi)分析血小板，在25～250fl范圍內(nèi)分析紅細(xì)胞，兩者分析范圍間有交叉重疊處。在血小板直方圖正常及無(wú)干擾的情況下，電阻抗法和光學(xué)法兩通道的高值血小板計(jì)數(shù)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；當(dāng)紅細(xì)胞平均體積小于65fl，血小板直方圖異常時(shí)，儀器會(huì)將體積小于30fl完整的小紅細(xì)胞及紅細(xì)胞碎片當(dāng)血小板計(jì)數(shù)[2-10]，因而會(huì)影響血小板檢測(cè)的準(zhǔn)確性，血小板計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(P＜0.05)；因此建議，當(dāng)血小板直方圖異常，紅細(xì)胞體積小于65fl時(shí)，建議使用光學(xué)法檢測(cè)血小板，因?yàn)楣鈱W(xué)法是通過(guò)熒光染色[8]識(shí)別血小板，可以在一定程度上減少紅細(xì)胞碎片及小紅細(xì)胞等因素對(duì)電阻法血小板計(jì)數(shù)時(shí)的干擾，并可計(jì)數(shù)大血小板，使結(jié)果更接近于真值。

Sysmex XN1000是多功能全自動(dòng)血液分析儀，具有全血檢測(cè)和預(yù)稀釋血檢測(cè)模式，血小板計(jì)數(shù)有電阻法和光學(xué)法。由于檢測(cè)模式與方法學(xué)不同，如果一臺(tái)儀器檢測(cè)結(jié)果不一致，不但給臨床治療帶來(lái)困擾，同時(shí)也會(huì)引起臨床和患者對(duì)我們結(jié)果準(zhǔn)確性的質(zhì)疑，嚴(yán)重的可能會(huì)引起醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起重視。如何減少不同檢測(cè)模式、不同方法學(xué)之間結(jié)果的誤差，實(shí)現(xiàn)一份樣本不同檢測(cè)模式結(jié)果的可比性和不同檢測(cè)方法結(jié)果的準(zhǔn)確性，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理的重要內(nèi)容之一。因此，要保證檢測(cè)結(jié)果的可比性、準(zhǔn)確性和一致性，實(shí)行定期比對(duì)是保障儀器最終測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵所在，是室內(nèi)質(zhì)量控制的延伸和完善。