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【摘 要】 目的：研究檢測HPV在宮頸癌篩查中應(yīng)用多通道熒光PCR技術(shù)的價值。方法：選取于本院進行宮頸癌篩查的患者190例，采集所有患者的宮頸細胞標本，并采用多通道熒光PCR技術(shù)對其進行18種高危HPV DNA分型和定量檢測，將檢測結(jié)果與PCR-反向斑點雜交法（PCR-RDB）檢測結(jié)果對比，若結(jié)果缺乏一致性，則標本需要應(yīng)用序列方法驗證。結(jié)果：就190例患者，其多通道熒光PCR技術(shù)檢測陽性率為14.21%，PCR-RDB檢測陽性率為17.89%，兩者檢測一致性為99.5%，即Kappa值為0.978。結(jié)論：檢測HPV在宮頸癌篩查中應(yīng)用多通道熒光PCR技術(shù)的價值較高，可以準確檢測出標本陽性，保證患者宮頸癌篩查的效果。

【關(guān)鍵詞】 檢測HPV;宮頸癌篩查;多通道熒光PCR技術(shù)

【中圖分類號】R730.43

【文獻標志碼】A

【文章編號】1005-0019（2019）18-232-02

宮頸癌是女性常見的一種惡性腫瘤疾病，而人乳頭瘤病毒（HPV）是一種可以引發(fā)人體黏膜組織、皮膚良性與惡性腫瘤的雙鏈DNA病毒，根據(jù)相關(guān)研究可知，宮頸癌病變主要原因在于感染HPV，多通道熒光PCR技術(shù)是近幾年臨床檢測HPV常用的一種技術(shù)，具有高通量、特異性強的特點[1]。此研究選取190例行宮頸癌篩查患者，分析檢測HPV在其中應(yīng)用多通道熒光PCR技術(shù)的價值，具體內(nèi)容如下。

1 資料和方法

1.1 基本資料

選取2016年7月—2018年7月于本院進行宮頸癌篩查的患者190例，年齡19—49歲，平均年齡（30.57±1.49）歲。所有受檢者在文化學歷、身高體重、性別等臨床資料方面無比較差異（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 采集DNA與HPV通用PCR引物設(shè)計

采集DNA：采用生理鹽水漂洗宮頸刷拭子后，需要將所有生理鹽水置入1.5ml離心管內(nèi)，嚴格按照每分鐘13000r速度完成離心操作10分鐘，去除上層清液，將沉淀物添加到DNA裂解液50μL，待均勻混合后需要置于100℃環(huán)境中進行干浴10分鐘，然后嚴格按照每分鐘13000r速度進行離心操作10分鐘，提取上層清液備用。HPV通用PCR引物設(shè)計：擴增各HPV亞型的通用引物核苷酸，MY09引物序列：5-CGT CCM ARR GGA WAC TGA TC-3，MY11引物序列：5-GCM CAA GGG WCA TAA YAA TGG-3，其中R=A/G，Y=C/T，W=A/T，M=A/C。

1.2.2 多通道熒光PCR檢測

18種高危HPV DNA分型和定量檢測，其中HPV26、53、73、82等4種HPV無法被分出具體型別，剩余的HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68等14種HPV可以被分出具體型別，每個患者宮頸細胞標本用4個反應(yīng)管檢測，嚴格根據(jù)說明書完成試劑量配制，之后將采集5μL的DNA標本置入PCR反應(yīng)管內(nèi)，再采用PCR儀按照試劑盒說明書調(diào)整反應(yīng)條件、對應(yīng)熒光基團、4個通道，之后擴增PCR，結(jié)果判斷標準：若通道具有明顯對數(shù)擴增曲線，同時Ct在26及以下，即陽性;若不存在對數(shù)擴增曲線，Ct在26以上，則陰性;試驗有效性判斷：各標本均可以通過反應(yīng)管4-通道4中的β球蛋白基因。

1.2.3 PCR-RDB檢測

采用RDB試劑盒檢測HPV分型，其中包括HPV6、11、40、42、43、44、54、61、81、83等10種低危型別與HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等，之后采用PCR儀、全自動核酸雜交檢測儀嚴格按照試劑盒說明書完成檢測，結(jié)果判斷標準：試驗有效（在膜條PC位點上存在藍色斑點）、HPV感染和型別（膜條上藍色斑點有無、出現(xiàn)位置）。

1.2.4 HPV序列

由多通道熒光PCR檢測、PCR-RDB檢測篩查出來的陽性標本，需要通過DNA測序確定型別。

1.3 統(tǒng)計學分析

本研究數(shù)據(jù)由SPSS19.0軟件統(tǒng)計，計數(shù)資料檢驗用x2，表示行百分率（%），P<0.05說明差異呈現(xiàn)統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

多通道熒光PCR技術(shù)檢測陽性率為14.21%（27/190），PCR-RDB檢測陽性率為17.89%（34/190），兩者檢測一致性為99.5%，即Kappa值為0.978，兩種檢測均未發(fā)生結(jié)果無效情況，PCR-RDB法檢測的28種HPV基因分型中包括了多通道熒光PCR技術(shù)檢測的18種高危型HPV，且多通道熒光PCR技術(shù)僅出現(xiàn)1例假陽性，PCR-RDB檢測出現(xiàn)2例假陰性。

3 討論

宮頸癌是女性常見的一種惡性腫瘤疾病，其發(fā)病率僅次于宮頸癌，根據(jù)相關(guān)研究得出，宮頸癌危險因素主要包括感染HPV（人乳頭瘤病毒），且女性宮頸病變的主要標志為HPV-DNA，在99.7%宮頸癌患者體內(nèi)存在高危型HPV-DNA，故檢測女性生殖道HPV感染情況和基因型在宮頸癌預(yù)防中具有至關(guān)重要的價值[2]。PCR-RDB檢測是通過擴增靶序列雜交、固化多種特異性探針膜條等方法篩查出DNA中的多種突病，可以通過肉眼直接觀察結(jié)果，且具有強特異性、敏感性，是國內(nèi)當前常用的一種HPV基因分型檢測方法，但存在操作繁瑣、時間長、極易遭受污染、成本高的缺陷;而多通道熒光PCR是近幾年臨床監(jiān)測HPV常用的一種技術(shù)，且不具有上述缺陷，并能夠利用β球蛋白基因鑒別基因，以此及時排除假陰性情況，可以準確顯示出陽性情況[3]。研究結(jié)果顯示，多通道熒光PCR技術(shù)檢測陽性率為14.21%，PCR-RDB檢測陽性率為17.89%，兩者檢測一致性為99.5%，即Kappa值為0.978。

總而言之，檢測HPV在宮頸癌篩查中應(yīng)用多通道熒光PCR技術(shù)的價值較高，能一次性檢測18種高危型HPV，并進行定量、分型，可準確篩查出宮頸細胞陽性情況，為患者后續(xù)治療提供科學的數(shù)據(jù)參考，有助于保障女性身心健康，值得大力推廣應(yīng)用在宮頸癌篩查中。

參考文獻

[1] 鄭建軍， 胡志芳. HPV16/18型病毒檢測在宮頸癌篩查中的價值[J]. 中國婦幼保健， 2017， 32（16）：3725-3727.

[2] 田敬英. HPV基因分型聯(lián)合TCT檢測在宮頸癌篩查中的應(yīng)用[J]. 中國實用醫(yī)刊， 2016， 43（9）：119-120.

[3] 臧元怡. 高危HPV檢測聯(lián)合TCT在宮頸癌篩查中的應(yīng)用[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2015， v.24（11）：1184-1186.