萬(wàn)愛妮，徐棟生，蔡燕飛，陳 蘊(yùn)，金 堅(jiān)，李華鐘*

（1.江南大學(xué) 工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無(wú)錫 214122；2.江南大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 無(wú)錫 214122）

胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）是含有70個(gè)氨基酸的堿性多肽，也被稱為生長(zhǎng)激素介質(zhì)/促生長(zhǎng)因子（somatomedins C），是一種結(jié)構(gòu)上與胰島素類似的活性多肽[1]，主要由肝臟產(chǎn)生和分泌[2]。IGF-1參與多種細(xì)胞生物效應(yīng)，是細(xì)胞的重要增殖調(diào)控因子，對(duì)生長(zhǎng)和分化有重要作用，并影響蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂質(zhì)代謝[3]。IGF-1還具有胰島素代謝效應(yīng)[4]，能增加組織對(duì)胰島素敏感性[5]，可作為胰島素抵抗糖尿病治療的有效替代藥物。對(duì)治療1型、2型糖尿病有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，IGF-1在生長(zhǎng)遲緩、神經(jīng)損傷、糖尿病等疾病的治療中有廣闊的應(yīng)用前景[6]。

血液中IGF-1主要以無(wú)活性的復(fù)合物形式存在（＞95%），有活性的游離IGF-1含量很低，所以無(wú)法從血清中大量提取天然IGF-1，從而限制了其研究和治療的應(yīng)用[7]。應(yīng)用基因工程技術(shù)，可以獲得大量的有生物活性的外源蛋白，為基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供新途徑。國(guó)內(nèi)外已有很多通過(guò)哺乳動(dòng)物細(xì)胞[8-9]、畢赤酵母[10]及大腸桿菌[11-13]等表達(dá)系統(tǒng)獲得IGF-1的研究，哺乳動(dòng)物細(xì)胞和酵母表達(dá)系統(tǒng)，具有較強(qiáng)的翻譯后修飾功能，適合真核生物基因表達(dá)，但存在發(fā)酵成本高、表達(dá)量低、分離純化困難等問題。

IGF-1相對(duì)分子質(zhì)量較小、不穩(wěn)定，在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)，易被蛋白酶降解，且表達(dá)產(chǎn)物大多以包涵體形式存在，生物活性嚴(yán)重受損。研究表明，載體標(biāo)簽蛋白部分對(duì)IGF-1的原核表達(dá)起主要作用[14-15]，選擇合適的載體對(duì)表達(dá)外源基因并獲得有生物活性的目的蛋白具有重要意義。我們探究了多種原核表達(dá)載體對(duì)IGF-1在大腸桿菌中表達(dá)的影響，構(gòu)建9 種重組載體，分別轉(zhuǎn)入 BL21（DE3）、Rosetta（DE3）和C43（DE3）等3種表達(dá)菌株中。IPTG誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果表明，IGF-1在攜帶標(biāo)簽蛋白Trx的pET32a載體上高效可溶表達(dá)（C43），在其他載體中一部分不表達(dá)（如pET20b-IGF-1），一部分則以包涵體形式表達(dá)（如 pET30a-IGF-1）。

為探究標(biāo)簽蛋白Trx對(duì)外源蛋白IGF-1在大腸桿菌中表達(dá)的影響，我們應(yīng)用融合PCR技術(shù)獲得Trx-IGF-1融合基因，構(gòu)建重組載體pET30-Trx-IGF-1并轉(zhuǎn)化大腸桿菌C43（DE3），以期實(shí)現(xiàn)具有生物活性的IGF-1的高效可溶表達(dá)，進(jìn)而探究標(biāo)簽蛋白Trx對(duì)IGF-1生物活性的影響，為其他外源蛋白的可溶表達(dá)策略提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株、載體及細(xì)胞 IGF-1基因，購(gòu)自O(shè)rigene；大腸桿菌菌株 DH5α、BL21（DE3），購(gòu)自天根生化科技有限公司；載體及大腸桿菌菌株Rosetta（DE3）、C43（DE3）以及NIH3T3 細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 試劑 引物由上海生物工程有限公司合成；PrimeSTAR mix，購(gòu)自TaKaRa公司；限制性內(nèi)切酶（KpnⅠ、SalⅠ等）、T4DNA 連接酶、DNA marker、蛋白marker，購(gòu)自Fermentas公司；質(zhì)粒小提試劑盒、膠回收試劑盒、卡那霉素、IPTG，購(gòu)自上海生物工程有限公司；山羊抗人IGF-1多抗，購(gòu)自Abcam公司；HRP標(biāo)記驢抗山羊IgG，購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所；Ni離子金屬親和層析填料，購(gòu)自美國(guó)GE公司；IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自R&D公司；DMEM和FBS，購(gòu)自Gibco 公司；CellTiter-Blue Cell Viability Assay，購(gòu)自Promega 公司；Propidium Iodide/碘化丙啶（PI），購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所。

1.2 方法

1.2.1 重組表達(dá)載體的構(gòu)建 以IGF-1基因，設(shè)計(jì)引物，引入雙酶切位點(diǎn)，分別與9種帶不同標(biāo)簽的載體連接，構(gòu)建重組載體。

1.2.2 IGF-1在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá) 挑取陽(yáng)性克隆，接種于含100 μg/mL抗生素的LB液體培養(yǎng)基里，37℃，200 r/min培養(yǎng)過(guò)夜，后以1%接種體積分?jǐn)?shù)轉(zhuǎn)接到新鮮含100 μg/mL抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至 OD600值為 0.4～0.6時(shí)加入IGTG（終濃度 1 mmol/L），低溫、低轉(zhuǎn)速（30 ℃，100 r/min）誘導(dǎo)6 h。SDS-PAGE檢測(cè)誘導(dǎo)前后菌液表達(dá)情況。

1.2.3 重組表達(dá)載體pET30a-Trx-IGF-1的構(gòu)建以人igf-1基因?yàn)槟０?，采用PCR方法擴(kuò)增igf-1基因。以pET32a為模板，用PCR方法擴(kuò)增trx基因。膠回收試劑盒純化PCR產(chǎn)物trx-igf-1融合基因，用KpnⅠ和SalⅠ雙酶切，并將酶切產(chǎn)物割膠回收，與同樣酶切并回收純化的pET30a載體用T4DNA酶連接，16℃連接過(guò)夜。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α感受態(tài)中，卡那霉素抗性篩選，提取質(zhì)粒，進(jìn)行菌液PCR、KpnⅠ和SalⅠ雙酶切及測(cè)序鑒定，篩選陽(yáng)性克隆，將其質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌C43（DE3）菌株中。

1.2.4 融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá) 挑取陽(yáng)性克隆，接種于含卡那霉素100 μg/mL的LB液體培養(yǎng)基里，37℃，200 r/min培養(yǎng)過(guò)夜，然后以1%接種量轉(zhuǎn)接到新鮮含卡那霉素100 μg/mL的LB液體培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至OD600值為0.6時(shí)加入IGTG，探索不同誘導(dǎo)溫度（20、25、30、37 ℃）、誘導(dǎo)時(shí)間（2、3、4、5、6、7 h）及 IPTG 濃度（0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5 mmol/L）對(duì)表達(dá)的影響，確定可溶表達(dá)的最優(yōu)條件。誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)束后，離心收集菌體，按1/5加入PBS重懸菌體，經(jīng)超聲破碎后離心，收集上清和沉淀，SDSPAGE檢測(cè)可溶性。

1.2.5 融合蛋白純化 發(fā)酵表達(dá)600 mL，離心收集菌體，按1/5加入平衡緩沖液20 mmol/L PB、100 mmol/L NaCl、25 mmol/L 咪唑（pH 7.2）重懸，超聲破碎，離心取上清備用。Ni離子親和層析柱先用平衡緩沖液平衡，上樣結(jié)束，分別用20 mmol/L PB、100 mmol/L NaCl、257.5 mmol/L 咪唑（pH 7.2）和20 mmol/L PB、100 mmol/L NaCl、800 mmol/L 咪 唑（pH 7.2）洗脫雜蛋白質(zhì)和目的蛋白質(zhì)，收集洗脫峰，進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)。

1.2.6 純化產(chǎn)物的Western blot檢測(cè) 純化蛋白經(jīng)SDS-PAGE分離后，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜（NC膜）上，經(jīng)5 g/dL脫脂奶粉封閉2 h，以山羊抗人IGF-1多抗為一抗，室溫孵育3 h，TBST洗滌3次后，以HRP標(biāo)記的驢抗山羊?yàn)槎?，室溫孵?.5 h，TBST洗滌3次，ECL顯色分析結(jié)果。

1.2.7 融合蛋白Trx-IGF-1促NIH3T3增殖活性NIH3T3細(xì)胞用DMEM培養(yǎng)基（含體積分?jǐn)?shù)10%FSB）配成5×104mL細(xì)胞懸液，接種于96孔板，100 μL/孔，培養(yǎng)24 h。0.4%血清饑餓處理12 h后，向96孔板中分別添加不同濃度的IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品和Trx-IGF-1（100、75、50、25、12.5、6.5、3.25、0 nmol/L），每組6個(gè)復(fù)孔。作用24h后，每孔加CellTiter-Blue試劑10 μL，37℃孵育2 h，酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品在560Ex/590Em波長(zhǎng)處的熒光值。

1.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)NIH3T3細(xì)胞周期的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的NIH3T3細(xì)胞，2×106孔接種于6孔板，分為IGF-1陽(yáng)性組、Trx-IGF-1實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，3孔/組。培養(yǎng)24 h后，更換0.4%FBS/DMEM饑餓處理 12 h，IGF-1 陽(yáng)性組加入 IGF-1（30 nmol/L），Trx-IGF-1實(shí)驗(yàn)組加入 Trx-IGF-1（30 nmol/L），加藥處理24 h后，以1000 r/min離心5 min收集細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，用4℃預(yù)冷的PBS洗細(xì)胞2次，離心去PBS，加入 4℃預(yù)冷的70%的乙醇 -30℃固定過(guò)夜，離心棄去固定液，用 4℃預(yù)冷PBS洗細(xì)胞2次，加入 500 μL RNase（50 μg/mL）37 ℃孵育 30 min，離心棄上清液，加入 200 μL PI（50 μg/mL），4 ℃避光30 min。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。

2 結(jié)果與討論

2.1 IGF-1在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)

將igl-1基因分別與質(zhì)粒 pET28a、pET20b、pET356、pET32a、pET30b、pEZZ18a、pGEX4T-1、pColdⅡ、pMAL2X連接，構(gòu)建9種重組表達(dá)載體，分別轉(zhuǎn)入 BL21（DE3）、Rosetta（DE3）和 C43（DE3）等 3種表達(dá)菌株中，誘導(dǎo)結(jié)果顯示，pET28a-IGF-1、pET35b-IGF-1、pET32a-IGF-1、pET30a-IGF-1、pColdII-IGF-1、pMAL-2X-IGF-1重組載體在大腸桿菌中有不同程度的表達(dá)，但只有pET32a-IGF-1可溶表達(dá)，且在C43（DE3）菌株中表達(dá)量最高（圖1），而pET30a-IGF-1雖然大量表達(dá)，但表達(dá)產(chǎn)物以包涵體形式存在（圖2）。

2.2 重組表達(dá)載體pET30a-Trx-IGF-1在C43（DE3）中的表達(dá)

將PCR獲得的trx-igf-1融合基因插入pET30a表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化至DH5α感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽(yáng)性克隆并進(jìn)行測(cè)序鑒定。重組表達(dá)載體pET30a-Trx-IGF-1轉(zhuǎn)化C43（DE3）細(xì)胞，挑取陽(yáng)性克隆，過(guò)夜活化后，按1/100轉(zhuǎn)接至10 mL LB/Amp+培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期OD600值為0.4～0.6時(shí)，加入IGTG誘導(dǎo)表達(dá)4 h。離心收集菌體，經(jīng)超聲破碎，離心分別取上清和沉淀進(jìn)行SDS-PAGE（圖3），結(jié)果顯示在相對(duì)分子質(zhì)量約25×103處可見目的條帶，與理論值一致，而未誘導(dǎo)組未見此帶。目的蛋白主要存在于上清中，表明重組融合蛋白主要以可溶形式表達(dá)。

圖1 pET32a-MIGF-1在大腸桿菌中表達(dá)產(chǎn)物的SDSPAGEFig.1 SDS-PAGE analysis of pET32a-IGF-1 expression in E.coli

圖2 pET30a-MIGF-1在C43（DE3）中表達(dá)產(chǎn)物的 SDSPAGE分析Fig.2 SDS-PAGE analysis of pET30a-IGF-1 expression in C43（DE3）

2.3 融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件優(yōu)化

為確定最優(yōu)表達(dá)條件，提高可溶目的蛋白表達(dá)量，我們比較了不同誘導(dǎo)溫度（20、25、30、37 ℃）、誘導(dǎo)時(shí)間（2、3、4、5、6、7 h） 及 IPTG 濃度（0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5 mmol/L）對(duì)表達(dá)的影響，確定可溶表達(dá)的最優(yōu)條件。結(jié)果表明，30℃條件下，1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)5 h，可溶性目的蛋白表達(dá)量最高（圖4），用Image J軟件分析結(jié)果顯示，融合蛋白表達(dá)量約占菌體總蛋白的50%。

圖3 pET30a-Trx-IGF1重組載體在C43（DE3）中表達(dá)的SDS-PAGE分析Fig.3 SDS-PAGE analysis of pET30a-Trx-IGF-1 expression in C43（DE3）

圖4 pET30a-Trx-IGF-1在C43（DE3）中優(yōu)化表達(dá)的SDS-PAGEFig.4 SDS-PAGE analysis of optimizing pET30a-Trx-IGF-1 expression in C43（DE3）

2.4 融合蛋白的純化及Western blot分析

超聲破碎上清經(jīng)過(guò)Ni柱吸附后，以20 mmol/L PB、100 mmol/L NaCl、257.5 mmol/L 咪唑洗脫雜蛋白，20 mmol/L PB、100 mmol/L NaCl、800 mmol/L 咪唑洗脫目的融合蛋白（圖5（a）），經(jīng)Ni離子親和層析柱純化后，目的蛋白Trx-IGF-1的純度達(dá)90%以上。純化獲得的目的蛋白經(jīng)SDS-PAGE后，用anti-IGF-1 抗體進(jìn)行 Western blot鑒定（圖5（b）），結(jié)果顯示，在相對(duì)分子質(zhì)量約25×103處可見蛋白雜交帶，說(shuō)明獲得的重組融合蛋白具有IGF-1抗原活性。

2.5 融合蛋白Trx-IGF-1促NIH3T3增殖活性

Cell-Titer Blue試劑盒檢測(cè)Trx-IGf-1對(duì)NIH3T3細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果（圖 6）顯示，在 5、10、20、40、80 nmol/L 的濃度范圍內(nèi)， 與對(duì)照組（0 nmol/L）相比，Trx-IGF-1融合蛋白具有明顯的促NIH3T3細(xì)胞增殖活性，且呈劑量依賴關(guān)系，IGF-1標(biāo)準(zhǔn)品最高增殖率達(dá)到（218.59±11.22）%，Trx-IGF-1融合蛋白最高增值率為（192.79±11.39）%。

圖5 Trx-IGF-1蛋白純化產(chǎn)物的SDS-PAGE與Western Blot分析Fig.5 SDS-PAGE and Western Blot analysis of purified Trx-IGF-1

圖6 Trx-IGF-1融合蛋白對(duì)NIH3T3細(xì)胞增殖的影響Fig.6 Effect of Trx-IGF-1 on NIH3T3 cells proliferation

2.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)NIH3T3細(xì)胞周期的影響

細(xì)胞周期分析結(jié)果（圖7）表明，對(duì)照組NIH3T3細(xì)胞大多處于G0/G1期，細(xì)胞增殖指數(shù)PI為12.88%。IGF-1陽(yáng)性組和Trx-IGF-1實(shí)驗(yàn)組處理NIH3T3細(xì)胞后，與對(duì)照組相比，G0/G1期的細(xì)胞百分率明顯降低，S期和G2/M期細(xì)胞百分比明顯增高，增殖指數(shù)（分別為32.89%、29.51%，表1），表明融合蛋白能明顯促進(jìn)NIH3T3細(xì)胞周期進(jìn)展。

圖7 IGF-1或Trx-IGF-1對(duì)NIH3T3細(xì)胞周期進(jìn)展的影響Fig.7 Effect of IGF-1 or Trx-IGF-1 on NIH3T3 cell cycle progression

表1 IGF-1和Trx-IGF-1對(duì)NIH3T3細(xì)胞周期的影響Table1 Effects of IGF-1 and Trx-IGF-1 on cell cycle progression of NIH3T3 cells %

3 結(jié) 語(yǔ)

IGF-1是人體內(nèi)一種重要的生長(zhǎng)因子，與胰島素結(jié)構(gòu)相似，通過(guò)內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌形式調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和增殖，參與合成代謝，在神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化[16]、軟骨發(fā)育[17]及骨質(zhì)疏松重建過(guò)程中[18]有重要的作用。然而，從血液中獲得IGF-1難度大，得率低，限制了早期人們對(duì)IGF-1純品深入研究和臨床應(yīng)用推廣。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，國(guó)內(nèi)外學(xué)者應(yīng)用基因重組技術(shù)在細(xì)菌、酵母和動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)IGF-1。

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是目前獲得重組蛋白最簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的方法，現(xiàn)階段關(guān)于大腸桿菌表達(dá)IGF-1重組蛋白的研究，國(guó)內(nèi)外都有許多報(bào)道。但該系統(tǒng)缺乏真核生物蛋白質(zhì)翻譯后修飾系統(tǒng)，不能有效表達(dá)過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短的外源蛋白，二硫鍵形成能力有限，易錯(cuò)誤折疊形成包涵體[19]，嚴(yán)重影響了外源蛋白的高表達(dá)和高活性。

選擇適宜的表達(dá)菌株，是外源蛋白高效表達(dá)的重要步驟。菌體內(nèi)含有大量?jī)?nèi)源蛋白酶，易造成外源表達(dá)產(chǎn)物的降解。而大腸桿菌C43（DE3）是蛋白酶缺陷型菌株，可以有效避免外源蛋白被蛋白酶降解，保持其穩(wěn)定性[20]。同時(shí)，C43（DE3）基因組含有參與毒性蛋白表達(dá)時(shí)細(xì)胞死亡途徑的突變，可以高效表達(dá)毒性蛋白或疏水性蛋白[21]。一些在BL21（DE3）中低表達(dá)的蛋白，甚至對(duì)宿主細(xì)胞有毒性的蛋白，如球蛋白和膜蛋白，均能在C43（DE3）中高效且低毒性表達(dá)[22-24]。C43（DE3）是優(yōu)于 BL21（DE3）的高效表達(dá)外源蛋白的理想宿主[25]。

蛋白正確的空間折疊和二硫鍵配對(duì)，是保證其生物活性的基本要求。表達(dá)載體是外源基因在大腸桿菌中可溶表達(dá)的一個(gè)重要影響因素。IGF-1相對(duì)分子質(zhì)量較小，且含有二硫鍵，為獲得正確立體結(jié)構(gòu)的活性蛋白，需與可溶高表達(dá)的蛋白標(biāo)簽融合，進(jìn)行可溶表達(dá)[26-29]。原核表達(dá)載體主要包括pET系列載體、pGEX載體和pMAL載體等，載體上含有各種融合標(biāo)簽，與外源基因形成融合蛋白[30]。pGEX-4T-1載體含有GST標(biāo)簽，具有對(duì)宿主菌無(wú)選擇性，純化條件溫和簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但對(duì)目的蛋白分子量、電性及氨基酸種類要求嚴(yán)格，蛋白易形成包涵體[31]。pMAL-2x載體含有BMP標(biāo)簽，由于胞質(zhì)中蛋白水解酶對(duì)融合蛋白的降解作用，表達(dá)的融合蛋白通常低于理論分子量，且融合蛋白易錯(cuò)誤折疊形成包涵體，不能正常分泌[32]。

pET系列載體是目前應(yīng)用最廣泛的原核表達(dá)載體，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，各種融合載體蛋白系統(tǒng)中，pET32a的硫氧還蛋白標(biāo)簽，能幫助外源基因高效可溶表達(dá)。硫氧還蛋白Trx是一種常見的氧化還原小分子蛋白（相對(duì)分子質(zhì)量為12×103），其保守的活性位點(diǎn)結(jié)構(gòu)為-Trp-Cys-Gly-Pro-Cys-，具備氧化還原活性，可編碼硫氧還蛋白，催化蛋白質(zhì)二硫鍵還原，幫助蛋白質(zhì)正確折疊[33]。同時(shí)，Trx作為大腸桿菌自身蛋白，在菌體中易折疊，應(yīng)用Trx融合表達(dá)，可在大腸桿菌中獲得高產(chǎn)量的可溶性融合蛋白[34-36]。HARTWIGA等[37]應(yīng)用Trx融合及真核序列密碼子優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)廣藿香醇合成酶在大腸桿菌中的可溶表達(dá)，表達(dá)量提高42%，且融合蛋白仍保持酶活。

pET30a-IGF-1在大腸桿菌中主要以包涵體形式表達(dá)，我們通過(guò)構(gòu)建融合表達(dá)載體pET30a-Trx-IGF1，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌 C43（DE3）中，經(jīng) 30℃誘導(dǎo)表達(dá)，實(shí)現(xiàn)融合蛋白的高效可溶表達(dá)，目的蛋白約占菌體總蛋白的50%。利用融合蛋白N端His-tag標(biāo)簽，經(jīng)Ni離子親和色譜柱純化，獲得純度較高且具有IGF-1免疫源性的融合蛋白。在IGF-1的N端融合Trx有助于IGF-1的正確折疊，獲得大量可溶的Trx-IGF-1融合蛋白。生物學(xué)活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)證明，融合蛋白具有明顯的促NIH3T3細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期進(jìn)展的生物活性。與陽(yáng)性對(duì)照相比，Trx-IGF-1融合蛋白促NIH3T3相比增殖活性有些許降低（約12%），可能是由于融合蛋白分子量變大，Trx通過(guò)空間位阻影響IGF-1與其受體結(jié)合，但未影響IGF-1信號(hào)傳導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)表明，硫氧還蛋白促進(jìn)IGF-1在大腸桿菌中的高效可溶表達(dá)，為IGF-1生產(chǎn)工藝及藥學(xué)研究等奠定基礎(chǔ)，同時(shí)為包涵體蛋白在大腸桿菌中的可溶表達(dá)提供一定的借鑒。